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       【摘要】 
       目的探讨香附总黄酮的提取及鉴别方法，以充分利用香附植物资源，避免资源的浪费。方法采用超声波乙醇浸提法从香附中提取黄酮类物质，对所提取的黄酮类物质进行验证，并用分光光度法测定含量。结果测得样品中总黄酮的含量C=0.186 4 mg/ml，回收率为102.7%，其纯度和产率均较高。结论该方法采用全物理过程，无任何污染，是提取香附黄酮类物质的有效途径。
       【关键词】  超声波提取 香附 总黄酮 鉴别
       Study on the Extraction Process of the Total Flavanone from Cyperus rotundus by Ultrasonic Wave
       HUANG Suoyi，LUO Jianhua，ZHANG Lidan, MENG Chunyue,LIU Jiao,FENG Ling,ZHANG Weizhi
       （Department of Chemistry, Youjiang Medical College for Nationalities，Baise, 533000，China）
       Abstract：ObjectiveTo establish the methods of extraction and identification for total flavonoids from Crperus rotundus.MethodsThe flavonoids were extracted with ethanol as the solvent from Cyperus rotundus by ultrasonic wave. Spectrophotometry was used to determine the flavanone of Cyperus rotundus .ResultBy this method the content of the total flavanone of Cyperus rotundus was C=0.186 4 mg/ml and the rate of  recovery was 102.7%. This text provides the extraction and purification methods for the total flavanoids and the purity is high .ConclusionThis method is a purely physical process and has no pollution. It is an ideal way to extract the flavanone of Cyperus rotundus.
       Key words：Ultrasonic wave treatment;  Cyperus rotundus;  Total flavanone;  Identification
       
       香附，异名雀头香、莎草根等，为莎草科植物莎草Cyperus rotundus L．的干燥根茎。秋季采挖，去毛须。归肝、脾、三焦经，有行气解郁、调经止痛之功效。用于肝郁气滞，月经不调［1］。香附目前尚无家种，商品全系野生，资源分布全国除黑龙江、内蒙古、宁夏、新疆及西藏等省、自治区外的各地区，各地田野及阴湿地均常见生长，尤其以海南货量大且质优，产量约占全国总产量的2/3［2］。香附用途十分广泛，妇科称其为“圣药”。李时珍《本草纲目》指出：“诸书皆云益气,而俗有耗气之说,宜于女人,不宜于男子者,非矣!”赞扬其为“气病之总司,女科之主帅”。书中该条之下列主治症38则，附方48首；其中妇科8则，内科杂病14则，血证5则，五官头面9则，外科2则，可谓详尽其用［3］。有文献报道香附的主要成分含挥发油、三萜类、黄酮类等［4］。
       
       目前国内外对香附黄酮类的研究相当缺乏。黄酮类化合物在治疗冠心病、老年性痴呆、脑血栓、神经系统疾病、抑菌、抗癌等方面有显著效果，无副作用，并因此开发出许多种药品和保健食品［5］。近年来，超声技术应用于提取植物中的生物碱、苷类、生物活性物质、动物组织浆的毒质等研究已有报道［6，7］，表明其具有能耗低、效率高、不破坏有效成分的特点。很多研究表明，利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，可加速植物材料中的有效成分进入溶剂，从而增加有效成分的提取率，缩短提取时间，并且还可避免高温对提取成分的影响［7］。但超声技术应用于提取香附中黄酮类物质的研究尚未见报道，本研究用超声波提取香附总黄酮及鉴别。现报道如下。
       1  仪器与试剂
       1.1  仪器KQ5200DB型数控超声波清洗器（超声工作频率 40 kHz,江苏省昆山市超声仪器有限公司）；UV-755B紫外可见分光光度计（上海分析仪器总厂）；ZF-I型三用紫外分析仪(上海顾村光电仪器厂)；SHB-III循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）。
       1.2  试剂95%乙醇；亚硝酸钠AR；硝酸铝AR；氢氧化钠AR；三氯化铝AR；盐酸AR；氨水AR；冰醋酸AR；醋酸乙酯AR；乙酸镁AR；镁粉AR；正丁醇AR；芦丁标准品（中国药品生物制品检定所）；新鲜香附（采于广西百色市）。
       2  方法与结果
       2.1  总黄酮成分提取 取新鲜香附，烘干，粉碎。称取香附粉末约6 g，加80 ml 95%乙醇，超声波提取2.5 h，抽滤。滤渣再加80 ml 95 %乙醇，超声波提取2.5 h，抽滤，合并两次滤液，减压回收乙醇至滤液仅剩25 ml左右为止，放置250 ml容量瓶中，用60%乙醇稀释至刻度，得样品液。
       2.2  测定方法依据以芦丁为对照品测定香附中总黄酮的含量，加入铝离子试剂，同时控制适宜pH值，使黄酮化合物与铝盐形成络合物，在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。
       2.3  定量实验-总黄酮的含量测定
       2.3.1  波长的选择   取样品液适量，在0.30 ml 5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在420～700 nm波长范围测定络合物的吸光度，络合物于510 nm波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。
       2.3.2  标准曲线的绘制分别精密吸取芦丁对照液（0.10 mg/ml）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 ml于10.00 ml容量瓶中，分别加入5%亚硝酸钠溶液0.30 ml，摇匀，静置6 min；再加10%硝酸铝溶液0.30 ml，摇匀，静置6 min；再加4%氢氧化钠溶液4.00 ml，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置12 min，以试剂作空白参比液，于510 nm处测吸光度。结果见表1。
       表1  分光光度法测定芦丁对照液吸光度结果（略）
       根据上表得回归方程：A=-0.031 1+13.518 4C，r=0.999 9。
       2.3.3  提取物含量的测定  精密吸取样品液0.50 ml，置10 ml容量瓶，按标准曲线的制备方法测定吸光度A=0.094 9，根据回归方程：A=-0.0311+13.5184C，计算样品中总黄酮的含量C=0.186 4 mg/ml。   
       2.3.4  回收率实验 精密量取样品液2.00 ml，加入标准芦丁对照品2.00 ml（0.10 mg/ml），同前样品测定方法操作测定吸光度，求出回收率为102.7% 。
       2.4  定性实验-总黄酮的鉴别
       2.4.1  颜色反应 
       
       紫外光下呈色反应：取该样品溶液点在滤纸上，在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈灰褐色并有荧光斑点。
       
       浓氨水反应：取该样品溶液点在滤纸上，将滤纸在氨水上方熏0.5 min，立即在紫外光下观察，呈极明显的黄褐色荧光斑点。
       
       三氯化铝反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加１％三氯化铝乙醇溶液，吹干。在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈黄色荧光斑点。
       
       乙酸镁反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加1%乙酸镁甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黄色斑点。
       
       盐酸-镁粉反应：取乙醇提取液1 ml于试管中加镁粉，再加入浓盐酸数滴（1次加入），在泡沫处呈紫红色。
       2.4.2   纸层析 取样品溶液10 μl点在滤纸上。用正丁醇∶醋酸∶水=4∶1∶5体积比为展开剂，上行展开5 h，取出晾干。喷1%氯化铝乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可见荧光斑点。
       3  讨论
          
       实验结果表明，本实验方法工艺简单，回收率为102.7%。利用本文所提供的超声波提取、纯化方法而得到的黄酮类物质其纯度较高。超声波可以强化乙醇浸提法，达到省时、高效、节能的目的。此方法采用全物理过程，无任何污染，是一条理想的提取黄酮类物质的途径，具有广阔的应用前景。
       
       黄酮类化合物是一大类天然产物，广泛存在于植物界，是许多中草药的有效成分，具有很高的药用价值。在自然界中最常见的是黄酮和黄酮醇，其它包括双氢黄（醇）、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等［5］。天然来源的生物黄酮分子量小，能被人体迅速吸收，能通过血脑屏障，能进入脂肪组织，进而体现出如下功能：消除疲劳、保护血管、防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大脑及其他脏器细胞的功能。
       
       黄酮类化合物具有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用［8，9］。近年来，世界上掀起了植物药开发的热潮，植物药以其天然低毒的特点倍受青睐，而黄酮类化合物以其广谱的药理作用引人瞩目，香附分布广泛。本实验结果表明，香附中含有较为丰富的黄酮。因此，香附具有广泛的开发和利用价值，值得综合利用，加强资源开发。
       【参考文献】
         　　［1］ 黄险峰，彭国平. 香附的化学成分及药理研究进展［J］.中药材，2003，26(1):65.
       
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       ［5］ 夏杏洲，张 辉，魏传晚.榕树叶中黄酮类化合物的提取条件研究［J］.食品研究与开发，2002，23(5):35.
       
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       ［7］ 谢明杰，宋 明，邹翠霞，等. 超声波提取大豆异黄酮［J］.大豆科,2004,23(1):75.
       
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