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       【摘要】 
       目的优选炮制后鲜卑花属植物叶中熊果酸的超声提取工艺。方法采用L9(34)正交实验，考察超声功率(A)、时间(B)、次数(C)和溶媒用量(D) 4 个影响因素，以熊果酸含量为评价指标，并采用薄层扫描法进行测定。结果超声影响因素主次顺序为D、B、A、C。结论熊果酸的超声提取最佳工艺为用8倍量无水乙醇浸泡30 min 后，在输入功率80%下超声20 min 2次。
       【关键词】  鲜卑花属植物 超声波提取 薄层扫描 熊果酸 正交实验
       Studies on the Ultrasonic Extraction Process for the Ursolic Acid of Sibirae
       YAN Zhihui,LI Zhigang,YANG Yongjian
       (Pharmaceutical College of Lanzhou University, Lanzhou, Gansu 730000，China; Tianshui Provincial Institute of Drug Control TianShui, Gansu 741000，China)
       Abstract:ObjectiveTo optimize the conditions of ultrasonic extraction of Sibirae．MethodsThe four relevant factors-ultrasonic power(A)，ultrasonic time(B)，ultrasonic times(C)and solvent volume(D) were investigated by the L9(34) orthogonal design. The content of ursolic acid was defined as the standard index．ResultsThe experimental results showed that the factor D was the most important one．ConclusionThe optimum condition of the ultrasonic extraction is that the sample is soaked in 8 fold of ethanol for half an hour, and then extracted for 30 min under the power of 80%by ultrasonic extraction twice．
       Key words:Sibirae；  Ultrasonic extraction；  TLC；   Ursolic acid；  Orthogonal test
       
       柳茶为藏族民间常用药，以蔷薇科（Rosaceae）鲜卑花属（Sibiraea）植物窄叶鲜卑花Sibiraea angustata(Rehd.)Hand-Mazz.及鲜卑花Sibiraea laecigata(L) Maxim.的枝叶及果序（带果实的果枝）入药，主要用于消食导滞、疏散风热；藏药文献收载，主治热病和疫病［1］。藏族民间所用鲜卑花属植物的传统炮制方法为小火煨熟。熊果酸是存在于天然植物中的一种三萜类化合物，具有安定、降温、降酶、镇静、抗炎、抗菌、抗糖尿病、抗溃疡、降低血糖等多种效应，近年来发现它还具有抗致癌、抗促癌、诱导F9 畸胎瘤细胞和抗血管生成作用，可明显增强机体免疫功能，有可能成为低毒高效的新型抗癌药物。熊果酸是鲜卑花属植物的主要药效成分之一，而超声技术因其设备简单、操作方便、提取时间短、效率高、节能等优点，已广泛用于有效成分的提取［2］。本实验以熊果酸含量为评价指标，首次运用正交实验方法对鲜卑花属植物中熊果酸的超声提取法的提取工艺进行多因素多水平优选。
       1  仪器与材料
       1.1  仪器KQ一500DE型医用数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司，频率40 kHz，输入功率500 W)，CS－9301型双波长薄层扫描仪（日本岛津），AE-240双量程电子天平（瑞士梅特勒公司），硅胶G板（青岛海洋化工厂）。
       1.2   材料 鲜卑花属植物叶采于甘肃省甘南藏族自治州合作市郊，海拔3 200 m。经兰州大学药学院生药学研究所杨永建教授鉴定。将原植物叶除杂质，放入名茶多功能机中，对其进行炮制加工后备用。
       
       对照品熊果酸（中国药品生物制品检定所，批号：110742-200313）；其余试剂均为分析纯。
       2  方法与结果
       2．1  超声提取样品液的制备
       2.1.1  正交设计考察超声功率、时间、超声次数和溶媒(无水乙醇)用量4个主要因素。 设计实验因素和水平见表1。
       2.1.2  工艺过程  各取经粉碎的炮制后鲜卑花属植物叶的粉末2 g，精密称定9份，分别用20 ml石油醚回流20 min，过滤取滤渣按L9(34)正交表实验，浸泡30 min，超声提取，合并提取液，挥干后用10 ml蒸馏水溶解，20 ml醋酸乙酯萃取2次，合并醋酸乙酯层挥干后无水乙醇定溶至10 ml，得1～9号超声样品液。
       表1  正交实验因素水平（略）
       2.2  对照品液的制备  精密称取熊果酸对照品13.33 mg，置10 ml容量瓶中，以无水乙醇溶解，并稀释至刻度，即得1.333 mg/ml对照液。
       2.3   含量测定
       2.3.1  薄层及扫描条件  薄层条件：硅胶G薄层板；展开剂：环己烷氯仿醋酸乙酯冰醋酸(10∶2.5∶4∶0.5)，上行展开；取出晾干喷以10% 硫酸乙醇显色;110℃烘箱中烘至斑点清晰。扫描条件：双波长反射法线性扫描，λS =520 nm，λR =700 rim，Sx=3中等灵敏度。
       2.3.2  线性关系考察  用定量毛细管分别吸取对照品液2，4，6，8，10 μl ，依次点于同一块硅胶板上，按上述薄层层析扫描条件测定，以点样量(X)对斑点面积积分值(Y)进行回归，得回归方程为：Y=5.542 9X+11.696 ，r=0.999 8，点样量在2.666～13.33 μg范围内与斑点面积呈良好线性关系。
       2.3.3  精密度实验  同板精密度实验：分别定量吸取对照品液6 μl 5次，依次点于同一块硅胶板上，按上述办法展开测定各斑点面积积分值，RSD=2.38%；异板精密度实验：分别定量吸取对照品液6 μl点在不同的5块硅胶G板上，按上述办法展开测定各斑点面积积分值，RSD=5.66%。
       2.3.4  稳定性实验  定量吸取对照品液4 μl点于硅胶板上，依法展开，显色，20 min后扫描测定，2 h内每隔30 min扫描 1 次，RSD=1.98% 表明2 h内测定结果稳定。
       2.3.5  加样回收率实验  精密称取已知含量的样品适量，定量加入熊果酸对照品，按样品液制备并测定。得平均回收率为97.60% ，RSD=2.81%。
       2.3.6   样品含量测定  将超声提取样品液和熊果酸对照品液用定量毛细管点于同一块硅胶G板上。采用外标两点法测定熊果酸含量。结果见表2。
       表2  实验结果（略）
       2.4   结果分析由R值可知，超声影响因素主次顺序为D、B、A、C，溶媒用量是控制鲜卑花属植物提取工艺的关键因素；超声时间和超声功率影响次之，超声次数影响最小。方案A3B2C2D1较好，即用8倍量无水乙醇浸泡30 min后，在功率80%下超声20 min两次为最优方案。
       3  结论
          
       本文首次对炮制后鲜卑花属植物叶中的熊果酸进行超声波提取，并利用正交实验优选了熊果酸的醇提工艺。
       
       由方法学考察结果可见，本方法线性关系、重现性(同异板)良好，回收率满意，稳定性满足测定时间的要求，可以认为本方法工序简便，稳定可靠。
       【参考文献】
         　　［1］ 甘肃省卫生局．甘肃中草药手册,第3册［M］.兰州：甘肃人民出版社，1973：1554．
       
       ［2］ 董嘉德．超声技术在中药提取中的应用［J］.中国药业，2002，11(11)：55．