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       【摘要】 
       目的对干地黄叶中梓醇的提取方法进行优选，确定最佳提取工艺。方法采用正交实验表Ｌ８ （２）７ 安排实验。结果提取方法对梓醇提取率影响最大。结论确定地黄叶中梓醇的最佳提取工艺，即加水煎煮提取，提取次数为２ 次，１ｈ／次。
       【关键词】  地黄叶 正交实验 梓醇
       Optimization of the Extraction Process for Catalpol from the Dry Leaves of Rehmannia glutinosa Libosch by Orthogonal Experiment
       ＳＵＮ Ｌｉ ｗｅｉ，ＬＩ Ｑｉｎ*
       （Institute of Traditional Chinese Medicine of Henan University， Kaifeng， Henan ４７５００４，China）
       Abstract:ObjectiveＴｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ｆｏｒ ｃａｔａｌｐｏｌ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｌｅａｖｅｓ ｏｆ Rehmannia glutinosa Ｌｉｂｏｓｃｈ，ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｐｒｏｃｅｓｓ ｗａｓ ｓｅｌｅｃｔｅｄ．MethodsＵｓｉｎｇ ｔｈｅ Ｌ８ （２）７ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔａｂｌｅ．ResultsＴｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｈａｄ ａ ｓｉｇｎｉｆｉcａｎｔ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｖｅ ｒａｔｅ．ConclusionＴｈｅ ｂｅｓｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ｉｓ Ａ１ Ｂ２ Ｃ２ Ｄ２ ， ｎａｍｅｌｙ， ｔｈｅ ｗａｔｅｒ ｉｓ ｕｓｅｄ ａｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎ， ａｄｄｉｎｇ ｗａｔｅｒ，ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ２ ｔｉｍｅｓ， １ｈ ｆｏｒ ｅａｃｈ ｔｉｍｅ．
       Key words:Lｅａｖｅｓ ｏｆ Rehmannia glutinosa Ｌｉｂｏｓｃｈ；  Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ；  Ｃａｔａｌｐｏｌ
       
       地黄为玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa Ｌｉｂｏｓｃｈ 的块根， 为临床常用中药，梓醇为其主要有效成分之一［１］。地黄叶为玄参科植物地黄的干燥叶，有报道怀地黄叶中梓醇含量比块根中高［2］ 。本工艺采用正交实验法，以地黄叶中梓醇含量为考察指标，考察了提取溶媒、提取方法、提取时间、提取次数等因素对提取效果的影响，确定最佳提取工艺，为地黄综合开发利用提供科学依据。
       1  仪器与试药
       １．１  仪器日本岛津ＬＣ －２０１０Ａ 高效液相色谱仪；ＬＣ －２０１０紫外检测器。
       １．２  试药地黄叶采自河南武陟县，经张保国教授鉴定为玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa Ｌｉｂｏｓｃｈ 的叶；梓醇对照品购自中国药品生物制品检定所，编号１１０８０８；水为去离子水；乙腈为色谱醇；其它试剂均为分析醇。
       2  方法与结果
       ２．１  梓醇的含量测定
       ２．１．1  色谱条件Ｃ１８ Ｄｉａｍｏｎｄ（１５０ ｍｍ ×４．６ ｍｍ）柱；检测波长２１０ ｎｍ；流速１．０ ｍｌ／ｍｉｎ；柱温２５℃；流动相乙腈：水（V／V＝０．５∶９９．５）；进样量５μｌ。
       ２．１．２  标准曲线绘制精密称取干燥至恒重的梓醇对照品２．２０ ｍｇ，置２５ ｍｌ 容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀。分别进样３，５，１０，１５，２０ μｌ。以峰面积为横坐标，进样量（μｇ）为纵坐标，得回归方程Y＝７．８１２ ９５ ×１０－３ ＋３．１８７ ７４ ×１０－６X（r＝０．９９９ ９）。结果表明梓醇的进样量０．２６４ ～１．７６ μｇ 与峰面积呈良好的线性关系。
       ２．１．3  供试品溶液的制备与测定精密称取地黄叶干燥粉末０．５ ｇ（过２０ 目筛），每次加提取溶媒５０ ｍｌ 提取，提取液静置，放凉，滤过，定容至１００ ｍｌ 容量瓶中，摇匀。进样５ μｌ 测得峰面积， 计算梓醇含量。
       ２．１．4  精密度吸取梓醇对照品液５ μｌ 进样，连续５ 次，测量峰面积，RSD＝０．９０７％。
       ２．１．5  梓醇含量测定及加样回收率精密称取干地黄叶粉末０．５ ｇ（过２０ 目筛），按最佳提取工艺，测得干地黄叶中梓醇含量为３．２８％。另取地黄叶干燥粉末，加入梓醇对照品，测定并计算回收率。平均回收率９９．７％。
       ２．２  正交实验设计梓醇属环烯醚萜类化合物，极性较大，通过预实验，选取４ 个因素，每个因素两个水平，以Ｌ８ （２）７ 正交表安排实验（因素水平表见表１）。
       表1  因素水平（略）
       ２．３  实验结果与分析按照“２．１．１”，“２．１．３”项下规定测定供试品溶液１ ～８ 号，梓醇含量计算结果见表２。对表２ 进行方差分析见表３。
       表2  正交实验结果（略）
       表3   方差分析（略）
       由表２ ～３ 数据分析显示，根据极差Ｒ 的大小，分出各因素及交互作用的主次关系为Ｂ ＞Ａ ×Ｂ ＞Ａ ＞Ｃ ＞Ｄ ＞Ａ ×Ｃ，可见Ａ ×Ｂ也是影响实验结果的重要因素，为此，列二元搭配均值表，见表４。方差分析结果显示提取方法（Ｂ）对梓醇的提取效果影响最大，考虑交互作用，最佳工艺条件为Ａ１ Ｂ２ Ｃ２ Ｄ２ 。
       表4  A和B的二元（略）
       3  讨论
          
       笔者进行了提取条件的预试验，提取溶媒选择时，对水，甲醇，乙醇，８０％乙醇进行比较，结果用水、甲醇提取时梓醇含量明显高于乙醇，８０％乙醇，依次为１．９３％，１．７４％，１．１６％，１．２７％，故选择水、甲醇两个水平；比较了回流、超声、冷浸３ 种提取方法，结果回流、超声的提取效果明显好于冷浸；比较了提取１ 次，２次，３ 次，结果提取２ 次、３ 次在提取效果上差别不明显，故确定１次、２ 次为两个水平；提取时间为０．５，１．０，１．５ ｈ，测得梓醇含量分别为１．６３％，１．９１％，１．８９％，１ ｈ 和１．５ ｈ 差别不明显，故选择提取时间为０．５，１．０ ｈ 两个水平。
       
       流动相的选择本实验比较了２％、５％、１０％的甲醇－水溶液系统，以及０．５％，２％，５％的乙腈－水溶液系统和直接用水作流动相多种条件，其中甲醇－水系统中样品的峰形很差，２％，５％的乙腈－水作为流动相时峰拖尾较明显。通过比较，笔者选用０．５％的乙腈作为本次实验的流动相，指标成分保留时间适宜，且样品分离效果好，峰形好。
       
       地黄叶中梓醇含量约为３．０％，远高于地黄根，地黄叶的产量约为根的１／４，每年大量的地黄叶白白的扔掉或烧掉，鉴于地黄叶丰富的资源和较高的梓醇含量，有待进一步的研究和开发。
       【参考文献】
         　　［1］ 国家药典委员会．中国药典，Ⅰ部［ Ｓ］．北京：化学工业出版社，２００５：８２．
       
       ［2］ 王太霞，李景原，胡正海．怀地黄营养器官中梓醇的积累动态［Ｊ］．中草药，２００４，３５（２）：２０８．