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       【关键词】  旱莲草
        摘要：目的：从旱莲草中提取总黄酮和鞣质，并测定其含量。方法：运用超声技术提取旱莲草总黄酮和鞣质，用比色法测定总黄酮含量，配位滴定法测定鞣质的含量。结果：测得旱莲草中总黄酮含量为0.704%，平均回收率为100.3%，相对标准偏差(RSD)为1.77%(n=5)；鞣质含量为4.82%，相对标准偏差(RSD)为0.939%(n=3)。结论：运用超声技术从旱莲草中提取总黄酮和鞣质，反应速度加快，提高了提取效率。
        关键词：超声技术；旱莲草；总黄酮；鞣质；提取；含量测定
        Ultrasonic Extraction and Determination of Total Flavonoids and Tannin in Eclipta prostrata (L.)
        WANG Zijun,  XUE Mei, BIAN Li
        (Department of Chemistry, Normal College, Shihezi University, Shihezi, Xinjiang 832002, China)
        Abstract:Objective:To extract and determine the total flavonoids and tannin in Eclipta prostrata (L).Methods:Total flavonoids and tannin in Eclipta prostrata (L.) were extracted by ultrasonic technology, total flavonoids determined by colorimetry and tannin was determined by the method of complex titration.Results:Total flavonoids in Eclipta prostrata (L.) was 0.704%,and recovery rate was 100.3%,RSD was 1.77%(n=5)；Tannin in Eclipta prostrata (L.) was 4.82%, RSD was 0.939%(n=3).Conclusion:Ultrasonic technology was applied to extracting total flavonoids and tannin in Eclipta prostrata (L.) for the first time. The reaction speed is faster and the result is satisfactory.
        Key words:Ultrasonic technology;Eclipta prstrata (L.);Total flavonoids;Tannin;Extraction;Determination
        旱莲草别名黄海棠、牛心菜，为菊科植物鳢肠Eclipta prostratal L.的全草，为常用中药之一，性寒，味微苦［1］。具有平肝，凉血止血，清热解毒等功效，用于跌打损伤［2］。由于旱莲草为常见中药，资源非常丰富，价廉易得，能够降低药物研究的成本，促进药物的发展。旱莲草对非特异性免疫和细胞免疫功能有促进作用，可能解释其滋阴补肾的功效。而其具有免疫调节作用的分子基础是旱莲草中的黄酮类化合物-木犀草素和槲皮素，利用它的免疫活性可以在临床上应用治疗冠心病和扁平疣［3］。超声技术的应用，近年来得到很大发展。超声具有穿透力强、选择性高等特点。超声技术可以大大加快反应速度，缩短反应时间［4］。超声技术应用于植物细胞破壁，有效地提高了收率。对于旱莲草总黄酮和鞣质的其它提取方法还未见报道，我们运用超声技术辅助测定了旱莲草中总黄酮［5］和鞣质的含量［6］。现将结果报道如下。
           1仪器、样品及试剂
        UV-2401型分光光度计(日本岛津)，DL-360超声波仪(35kHz,浙江宁波市象山县石浦海天电子仪器厂)。对照品芦丁购自中国药品生物制品检定所，其余试剂均为分析纯。旱莲草购自石河子中药店，粉碎后备用。
           2方法与结果
        2.1测定方法依据以芦丁为对照品测定旱莲草中总黄酮含量，加入铝离子试剂，同时控制适宜pH值，使黄酮化合物与铝盐形成配合物在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。运用配位滴定法对鞣质含量进行测定。
        2.2总黄酮含量的测定
        2.2.1标准曲线制备精密称取芦丁对照品10 mg，置25 ml容量瓶中，加85%乙醇溶解，定容，精密吸取0.0，0.2，0.4，0.6,0.8，1.0 ml，分置于10 ml容量瓶中，加5%亚硝酸钠0.3 ml，放置6 min，再加10%硝酸铝0.3 ml，放置6 min,加4%氢氧化钠4 ml，加水至刻度，摇匀。进行全波长扫描，在510 nm处均有最大吸收。以510 mn处测得的吸收度A对浓度C回归，得回归方程：A=11.225C+0.002 7，r=0.999 13，在8～40 μg/ml的范围内，浓度与吸收度有良好的线性关系。
        2.2.2样品溶液制备精密称取样品2 g置于250 ml锥形瓶中，加入20倍量的85%乙醇，放在超声波仪中超声提取1 h，然后进行抽滤，把滤渣重新置于原锥形瓶中，再加入20倍量的85%乙醇，放在超声波仪中超声提取1 h，再抽滤，把两次所得滤液合并于100 ml容量瓶中，用85%乙醇定容，作为样品溶液。
        2.2.3样品测定精密吸取样品溶液2.0 ml，置于10 ml容量瓶中，按与标准曲线相同的方法显色测定。通过标准曲线，计算出样品中总黄酮的含量。结果见表1。
        表1旱莲草中总黄酮和鞣质含量（略）
        2.2.4回收率实验取已知总黄酮含量的供试品溶液2.0 ml于10 ml容量瓶中，再加入0.2 mg/ml的芦丁对照品溶液0.5 ml，依法测定，结果平均回收率为100.3%，RSD=1.77%(n=5)。
        2.2.5精密度实验精密称取旱莲草供试品3份，每份测试3次,±s=0.696±0.004，相对标准偏差(RSD)为0.517%(n=3)。
        2.2.6稳定性实验按样品测定方法操作，测定同一供试液在不同时间吸收度。结果表明，吸收度值在5～45 min内基本不变，因此测定应控制在45 min内完成。
        2.3鞣质含量测定
        2.3.1样品溶液的制备精密称取经过脱脂的干燥样品2 g于250 ml锥形瓶中，加入20倍量的50%丙酮，放在超声波仪中超声提取1 h，然后进行抽滤，把滤渣重新置于原锥形瓶中，再加入20倍量的50%丙酮，放在超声波仪中超声提取1 h，再抽滤，两次所得滤液即为鞣质提取液。精密吸取20 ml 1 mol・L-1醋酸锌标准溶液于500 ml容量瓶中，加14 ml浓氨水，摇匀使白色沉淀溶解。将鞣质提取液置于水浴上温热〔（35±2)℃〕15min，然后移入上述含醋酸锌的容量瓶中，并不断的振荡，继续在水浴上温热〔（35±2)℃〕30 min（间歇振荡数次），冷至室温，用50%丙酮定容，摇匀后用干滤纸过滤，收集的续滤液即为样品溶液。
        2.3.2样品含量测定精密吸取样品溶液20 ml于锥形瓶中，加150 ml蒸馏水，25 ml氨-氯化铵缓冲溶液（pH=10），加铬黑T指示剂少许，然后用0.05 mol・L-1的EDTA标准溶液滴定，溶液由酒红色至蓝色即为终点，记录数据。将数据代入0.155 6×(20×Ｍzn-25×ＭE×V)   W×100%公式计算结果，其中0.155 6由实验求得比例系数，Mzn为醋酸锌浓度(g/ml)， ME为EDTA浓度(g/ml)，V为EDTA消耗量(ml)，W为样品重量(g)。测定结果见表1。
        2.3.3稳定性实验吸取同一样品液，每隔1 h测定一份，测得结果中鞣质在6 h内变化不明显，表明样品在6 h内稳定。在测定鞣质含量时，最好在6 h内进行。
        2.3.4精密度实验精密称取旱莲草供试品3份，每份测试3次, ±s=4.778±0.096，相对标准偏差(RSD)为2.01%(n=3)。
           3讨论
        黄酮类化合物具有降脂、抗血栓、抗氧化、降糖等多种生理活性［7］。鞣质广泛存在于自然界，是多种中草药的有效成分之一，具有多种生物活性，如抗肿瘤、抗过敏、抗衰老等，鞣质类药物的研制引起了国内外学者广泛的关注［8］。我们运用超声技术从旱莲草中联合提取出旱莲草总黄酮（0.704％）和鞣质（4.82％），并对其含量进行了测定，反应时间缩短，旱莲草黄酮和鞣质的结构组成和生理活性有待进一步研究和探讨。
           参考文献：
        ［1］张金生，郭倩明.旱莲草化学成分的研究［J］.药学学报，2001，36（1）：3437.
        ［2］张梅，陈雅妍.旱莲草化学成分的研究［J］.中国中药杂志，1996，21（8）：480481.
        ［3］侯国斌.旱莲草的免疫活性［J］.中华医药丛刊杂志，2002，2（11）：6868.
        ［4］张代佳，刘传斌，修志龙，等.超声技术在植物细胞内有效成分提取中的应用［J］.中草药，2000，31(9):附56.
        ［5］孙佩霞,叶丽卡，张晓丽,等.比色法测定淫羊藿胶囊中总黄酮的含量［J］.沈阳药科大学学报，1999，16(1)：68705.
        ［6］江发寿，赵继红，但建明，等.沙枣鞣质的含量测定［J］.基层中药杂志，2002，16（2）：2526.
        ［7］韩公羽，沈企华.植物药有效成分的研究与开发［M］.杭州：杭州大学出版社，1991：94102.
        ［8］李荣芷，李霞，何为江.中草药中抗HBV多元酚类活性成份的研究［J］.北京医科大学学报，1994，26（2）：134135.
        (石河子大学师范学院，新疆 石河子832002)