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       【摘要】 
       目的观察小鼠和大鼠分别灌胃给予定喘颗粒的急性毒性作用和长期毒性作用。方法采用Bliss法测定小鼠灌胃定喘颗粒的LD50以及大鼠连续灌胃定喘颗粒60 d，观察给药60 d的生长、发育，血液学，血液生化学，组织病理变化及停药21 d时上述指标的变化。结果昆明种小鼠灌胃定喘颗粒的LD50为171.09 g/kg。定喘颗粒大鼠给药60 d的毒性试验，剂量分别为72.6，36.3，18.2 g/kg（指含生药量，下同）（相当于临床50 kg人用量的52.6，26.3和13.2倍），给药期间各组大鼠毛色、活动、二便均无异常变化，但给药组大鼠摄食、饮水、体重以及部分血液学、血液生化学指标和脏器系数有异常变化，停药后，上述异常变化指标均已恢复正常。给药期和恢复期重要脏器病理组织检查均未发现明显异常变化。结论定喘颗粒小鼠灌胃的LD50为171.09 g/kg；长期毒性研究表明，长期大剂量灌胃给予定喘颗粒对大鼠有一定毒性，但停药后均已恢复。
       【关键词】  定喘颗粒 急性毒性实验 长期毒性实验
       Experimental Studies on the Toxicity of Dingchuan Granule
       XIAO Xiaohua，ZHU Lingyuan, XU Liying，DING Qi，GUO Sheng，FANG Lü
       Jiangxi Institute of Materia Medica, Nanchang, Jiangxi, 330029, China
       Abstract:Objective To observe the acute toxicity of Dingchuan granule (DCG) in mice and the long-period toxicity in rats,respectively.MethodsLD50 of DCG were tested in mice by Bliss methods.Rats were administered with repeated gastric infusion of DCG for 60 days and body weight,hematological and hematobiochemical parameters,coefficient and histomorphological figure of organs were examined in 60 days and 21 days after the cessation of DCG. ResultsThe LD50 of KM mice was 171.09g/kg .In the long-period toxicity test, DCG was administered repeatedly for 60 days, the dose were 72.6，36.3，18.2 g/kg respectively(It refered to the dose of material,which amounted to 52.6，26.3，13.2 times of 50 kg human clinic use). There is no other abnormal changes about color patem,action,urine and stool,but cibation, hydroposia, body weight and index part of hematological and hematobiochemical parameters,coefficient and histomorphological figure of organs were examined during administration phase.The rats were examined  in 21 days after the cessation of DCG, the abnormal changes of index was completely recovered. After administered repeatedly for 60 days and in 21 days after stopping the drug, there had no obvious abnormality for the important organ pathology examination. ConclusionThe LD50 of mice is 171.09 g/kg. DCG administration by long-period large dose has a certain effect on rats ,but the changes can completely recovery after drug withdrawal.
       Key words:Dingchuan granule;   Acute toxicity test;  Chronic toxicity test
       定喘颗粒是在明《摄生众妙方》中定喘汤基础上改变剂型的新药，由白果、麻黄、苏子、甘草、款冬花、杏仁、桑白皮、黄芩、半夏等中药组成。其功能宣肺清热、祛痰定喘，在临床上广泛地用于风寒外束、痰热内壅、痰多气急、咳嗽哮喘等证。本次实验目的是观察小鼠灌胃给药的急性毒性反应以及大鼠连续给药60 d所产生的毒性反应和严重程度，以及停药后的发展和恢复情况，为临床安全用药提供依据［1，2］。
       1  器材与方法
       1.1  材料
       1.1.1  动物 
       Wistar大鼠，清洁级，体重100～120 g，雌雄各半，由中国科学院上海实验动物中心提供，合格证号：中科动管第99-004号。昆明种小鼠，清洁级，体重18～22 g，雌雄各半，由中国科学院上海实验动物中心提供，合格证号：中科动管第99-006号。
       1.1.2  药物 
       定喘颗粒  由本所制剂室提供，批号：990515。实验前用蒸溜水配成不同浓度的溶液供灌胃使用。
       1.1.3  仪器 
       BT-224半自动生化分析仪，意大利产；BT-2100血细胞分析仪，意大利产。
       1.2  方法
       1.2.1  小鼠LD50测定 
       动物按体重随机分为6组，每组10只，雌雄各半，按0.7 ml/20 g灌胃给定喘颗粒，一天内共灌胃3次，每次间隔6 h。剂量分别为76.49，101.98，135.96，181.26，241.65，322.17 g/kg，连续观察14 d，记录小鼠毒性反应和死亡情况，死亡动物进行尸检，记录病变情况，按Bliss法计算半数致死量（LD50）和95%可信限。
       1.2.2  大鼠长期毒性实验 
       取80只大鼠，雌雄各半，按体重均匀随机分为对照组，定喘颗粒18.2，36.3 g/kg和72.6 g/kg剂量组，每组20只，雌雄各半，每天分别灌胃给药，空白对照组给予等体积蒸馏水，每天给药1次，连续60 d。在给药期间每天观察动物行为、毛色、二便等一般情况，每周测体重和摄食量、饮水量1次，给药结束后每组各取雌雄各5只大鼠，测其凝血时间、血常规、血小板计数、血液生化指标（ALT，AST，ALP，BUN，CRE，TP，TCHO，GLU，ALB，TRIL），然后拉断颈椎处死动物，进行尸检，取其心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、睾丸、子宫、卵巢、脑，用电子天平称其重量，并计算其脏器系数，同时取其心、肝、脾、前列腺、气管、胃作病理切片，记录其组织学改变情况，并摄下彩色图片，各项测得数据分别按性别分组进行统计学处理，用t值法进行组间对比。
       
       留下的动物停药观察21 d后，重复上述检查。
       2  结果
       2.1  小鼠的急性毒性实验
       各组死亡小鼠均为灌胃24 h内死亡，死亡前小鼠小便较黄，大便溏稀，少动，死亡后大体解剖见胃、肠道膨胀充气外，其他脏器如心、肝、脾、肺、肾、胸腺等无异常变化，其余存活小鼠色泽、外观、摄食、二便均正常，无异常发现。用Bliss法计算定喘颗粒灌胃给药小鼠的（LD50）和95%可信限，结果为LD50是171.09 g/kg，LD5095%的可信限为143.21～204.38 g/kg。
       2.2  大鼠的长期毒性实验
       2.2.1  一般情况 
       各组大鼠给药期间行为、步态、毛色、粪便性状与空白组相比，未见异常变化，停药观察21 d亦无改变。高剂量雄性大鼠在给药期间摄食量比空白组减少。高剂量组雄雌大鼠饮水量与空白组比较有所增加。
       2.2.2  体重情况 
       高剂量雄性大鼠在给药期间体重增长明显降低，与空白组比较，差异有非常显著性意义（P<0.01），高剂量组雌性大鼠在给药第4、5周体重增长与空白组比较也显著减慢（P<0.05），其他组体重增长均正常。见表1。表1  定喘颗粒对雄性大鼠体重的影响(略)
       2.2.3   血液学检查 
       给药组给药后，进行血液学检查，其中Hb，RBC，WBC值与对照组比较，均无显著差异。高剂量雌性大鼠凝血时间显著延长，高剂量雌雄性大鼠PLT数显著减少，与空白组比较差异有显著性差异（P<0.05）。见表2。停药21 d后检查，除高剂量雄性大鼠凝血时间明显缩短，与空白组比较差异有显著性意义（P<0.05）外，其余各给药组凝血时间，WBC，RBC，PLT，Hb与空白组比较均无明显差异（见表3）。表2  定喘颗粒对大鼠给药末期血液学指标的影响(略)表3  定喘颗粒对大鼠恢复期血液学指标的影响(略)
       2.2.4   血液生化学指标检查 
       在给药结束后，低剂量雄性大鼠GLU下降，低剂量雌性大鼠TCHO增加；中剂量雌性大鼠GLU值增加，高剂量组雄性大鼠ALT，AST值增加，高剂量ALT增加，与对照组比较差异有显著性意义（P<0.05和P<0.01），其他组与空白组比较均无显著差异（见表4）。停药21 d后，除低、中剂量组雌雄性大鼠GLU值均下降，高剂量雄性大鼠TBIL值下降，与空白组比较差异有显著性和非常显著性意义（P<0.05和P<0.01），其余各组各项检查与空白组比较均无显著差异（见表5）。表4  定喘颗粒对大鼠给药末期血液生化学指标的影响(略)表5  定喘颗粒对大鼠恢复期血液生化学指标的影响(略)
       2.2.5  主要脏器检查 
       在给药结束后，解剖各组大鼠，肉眼检查，除少量动物肺部有淤血现象外，其余各组动物均未见异常，各组脏器系数比较，高剂量组雌性大鼠肾系数，子宫系数增加，与空白组比较差异有显著性和非常显著性意义（P<0.01和P<0.05）。高剂量组雄性大鼠肝系数增大，与对照组差异有显著性意义（P<0.01）（见表6）。停药21 d后，高剂量组雌性大鼠脾、肺系数增加，中剂量雌性大鼠肺系数增加，与空白组比较差异有显著性和非常显著性意义（P<0.01和P<0.05），雄性大鼠与空白组比较无显著差异（P>0.05）。见表7。表6  定喘颗粒对大鼠给药末期脏器系数的影响(略)表7  定喘颗粒对大鼠恢复期脏器系数的影响(略)
       2.2.6   重要脏器病理组织学检查 
       在给药结束后，处死大鼠，取心、肝、脾、肺、肾、脑、胃、肾上腺、胸腺、甲状腺及性腺等组织用10%福尔马林固定，常规脱水，石蜡切片，HE染色观察结果如下：实验组（高剂量组、中剂量组和低剂量组）实质性脏器（心、肝、肾、脑）的实质性细胞无损伤；气管及肺未见明显异常，消化管道和胃未见损伤。性腺及子宫未见损伤；内分泌腺（肾上腺、甲状腺、胸腺）未见损伤，脾未见异常。停药21 d后，各组大鼠组织同样行病理组织学检查，除少数动物肺脏有出血外，未见其它发现。
       3  讨论
       3.1  小鼠的急性毒性实验 
       定喘颗粒灌胃给药小鼠的（LD50）和95%可信限，结果为LD50是171.09 g/kg，LD5095%的可信限为143.21～204.38 g/kg。
       3.2  大鼠的长期毒性实验 
       从大鼠的长期毒性实验结果中分析，定喘颗粒大剂量（有相当于人日用量的52.6倍）长期给药（60 d）对大鼠的影响主要有体重减轻、血小板数降低、凝血时间延长、ALT、AST升高，但停药后均可恢复，其余如胆固醇、血糖值和总胆红素的异常变化与给药无关；病理检查各给药组无明显器质性病变，表明在相当于人用量52.6倍（72.6 g/kg）以下的剂量组，未出现上述明显毒副反应，提示该药是安全的。
       【参考文献】
         　　［1］中华人民共和国卫生部.中药新药指南［S］.1993：203.
       
       ［2］王治乔，袁伯俊.新药临床前安全性评价与实验［M］.北京：军事医学科学院出版社，1997：43.