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       【摘要】 
       目的研究土三七对食管癌细胞（Ec-109）超微结构的影响。方法培养的Ec-109细胞分别与土三七提取液作用3，6 h后， 通过透射电镜观察各实验组和对照组食管癌细胞的超微结构。 结果电镜下可见实验组Ec-109细胞出现粗面内质网消失，核糖体减少；线粒体呈空泡状，大部分嵴消失。药物对癌细胞的杀伤作用随时间延长而增强。结论 土三七对食管癌细胞超微结构有明显的破坏作用。
       【关键词】  土三七 食管癌细胞 超微结构
       The Effect of  Tusanqi on Ultrastructure of Esophageal Carcinoma Cells
       FU Yurong, BO Aihua, SUN Li, GUO Chunyan，BAI Xuemei， LI Haifeng
       Medical College of Hebei North University,Zhangjiakou, 075000,China
       Abstract:ObjectiveTo study the effect of  Tusanqi on ultrastructure of esophageal carcinoma cells（Ec-109）.MethodsAfter treated with Tusanqi for 3, 6 hours respectively , the ultrastructure of esophageal carcinoma cells in experimental groups and control groups were observed under transmission electron microscope. ResultsTusanqi resulted in disappearance of rough endoplasmic reticulum and the most of mitochondrial cristaes, reduction of ribosome, appearance bubble in plasmosome. The severity of injury of membranous structures increased with the time prolonging of Tusanqi action. ConclusionTusanqi has damage effect to ultrastructure of esophageal carcinoma cells.
       Key words: Tusanqi；  Esophageal carcinoma cell；  Ultrastructure
       土三七为景天科景天属植物，是一种药食两用的植物，别名较多，如景天三七、费菜、养心草、血散、吐血草等。它在我国分布较广，尤其是河北、山西和内蒙等地更为多见。在临床和民间早有应用，具有凉血止血，散淤、消炎、安神、镇痛等作用［1，2］ 。目前土三七的药用开发工作刚刚起步，关于土三七制剂的抗肿瘤作用，鲜见报道。我们利用电子显微技术，观察了土三七水提液对人源性食管癌细胞（Ec-109株）超微结构的影响，阐明土三七对癌细胞的杀伤作用，为开发中草药抗癌制剂提供科学依据。
       1  材料与方法
       1.1  原料与试剂
       土三七采自河北张家口市区，经本校药师鉴定确认。EC-109细胞（北京市肿瘤研究所）；RPMI-1640（Gibco BRL公司）；胎牛血清（天津川页生化制品有限公司）。其余试剂均为分析纯，实验用水为二次去离子水。
       1.2   仪器与设备透射电子显微镜（ JEM100CX-Ⅱ，日本）； 超薄切片机（KD1508,日本）；高效液相色谱仪(简称HPLC, 型号HP1100，美国Agilent公司）。
       1.3  土三七提取液的制备精密称取干燥粉碎土三七0.8484g，加水20 ml，沸水浴30 min,取上清液，药渣加水10 ml，再次提取30 min。合并两次提取液，定容至25.00 ml。过大孔树脂处理，除去色素，得无色水溶液。无菌条件下过0.22μm微孔滤膜，密封4℃冰箱保存。经HPLC检测没食子酸含量为126.7 μg·ml-1［3］。
       1.4  电镜样本制作选择对数生长期人源性食管癌细胞株Ec-109, 调整细胞数为浓度5×104/ml，接种于6孔培养板， RPMI-1640完全培养液(含15%胎牛血清,庆大霉素100μg·ml-1)，置37℃,5%CO2孵箱中培养。待24 h后癌细胞呈对数生长时,分对照组、加土三七提取液250 μl（相当于分别加入生药15.9 mg，含没食子酸31.7 μg［3］) 。再分别培养3  h和6 h。将细胞剐起，细胞经离心后常规2.5%戊二醛及1%锇酸双重固定和Epon 812包埋；超薄切片，厚度40～50 nm。常规铀-铅染色，JEM100CXⅡ透射电镜观察摄像。
       2  结果
       对照组癌细胞呈圆形，周围有较多微绒毛，胞质中有粗面内质网、核糖体、线粒体等。其中线粒体呈棒状或球形，其膜和嵴清晰可见；细胞核呈球形，常染色质多，异染色质少，呈中等电子密度，核仁大而较多见，图像见图1。3 h组与6 h组无明显差异。
       药物作用3 h后，癌细胞周围微绒毛减少，或大部分消失，或缩短。胞质中粗面内质网消失；核糖体减少；线粒体呈空泡状，大部分嵴消失。损伤较严重的细胞则有质膜断裂现象。细胞核异染色质明显增多，核仁可见。见图2。
       药物作用6 h后癌细胞微绒毛消失，而且大部分细胞质膜断裂或消失，细胞器溢出，有较多细胞碎屑。部分细胞的胞质中有较多空泡，其他细胞器很少见到。部分细胞的胞质中出现牛眼样次级溶酶体。胞核出现凹陷，核膜结构不清或大部分消失，核仁变形或消失。见图3。
       3  讨论
       据报告景天三七Sedum aizoon L.，富含多种营养成分，如蛋白质、脂肪、糖和维生素C，B；同时含有钙、磷、铁及锌、硒、铜等微量元素，因此作为新兴的保健蔬菜得到人们的重视和推广［4］。更可喜的是土三七中有丰富的药用成分没食子酸、多种酚酸、齐墩果酸、熊果酸、β－谷甾醇、黄酮类成分和生物碱等［5］。 有报道在临床利用土三七汁治疗肺癌咯血，取得明显疗效［6］；治疗心血管疾病方面表明土三七具有改善微循环、化淤降压和宁心安神作用［7］。
       将药物作用3 h，EC-109癌细胞出现膜性结构如质膜、线粒体膜和内质网受到损伤，说明药物对磷脂成分为主的结构有破坏作用。核内异染色质增多，说明核酸合成及代谢受阻。加药6 h，部分细胞解体，形成碎屑；部分细胞中空泡增多和细胞器明显减少，胞核与胞质界限不清，说明药物对癌细胞具有杀伤作用，以细胞坏死为主。我们曾用药物作用24 h，培养液中已很难找到癌细胞，提示药物对癌细胞的杀伤作用随着药物作用时间延长而增强。
       总之，通过本实验说明土三七对食管癌细胞超微结构有明显的破坏作用。今后有望利用土三七在抗癌防癌工作中另辟新径。
       【参考文献】
         　　［1］国家中医药管理局《中华草本》编委会. 中华草本，第3册［M］.上海：上海科学技术出版社，1999：765.
       
       ［2］韩敏，赵莉. 景天属植物研究进展［J］.安徽农业科学，2005，33（11）：2129，2141.
       
       ［3］付煜荣，张万明，陈桂敏，等.景天三七中没食子酸和总酚酸含量测定［J］.中成药，2006，28（7）：1016.
       
       ［4］尚成武. 景天三七的应用及栽培［J］.中国林副特产，2000，53（2）：52.
       
       ［5］国家医药管理局中草药情报中心站. 植物药有效成分手册［M］.北京：人民卫生出版社，1986：479.
       
       ［6］王蕴蕴. 景天三七治疗肺癌咯血20例［J］.实用中西医结合杂志，1990，3（4）：232 .
       
       ［7］车苏容, 郭素华, 竺叶青. 景天三七的药学研究进展［J］.福建中医药，2004,35(3)：51.