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       【摘要】 
       目的确定鹰嘴豆中总黄酮的优选超声提取工艺。方法采用正交实验法，考察溶剂量，提取次数，超声时间，溶剂浓度对提取率的影响，用分光光度标准曲线法测定含量。结果所考察的因素中，鹰嘴豆总黄酮的提取影响程度为：溶剂浓度＞提取次数＞溶剂量＞超声时间。结论超声提取的最佳条件为：A1B3C3D3 。
       【关键词】  鹰嘴豆 总黄酮 正交实验法
       Study on the Ultrasonic Extraction Technology of the Flavonoids in Cicer arietinum L.
       Hailiqian·Taoerdahong，  Batur·Maimaitiming,Palida, Mayila
       School of Pharmaceutical Sciences ,Xinjiang Medical Univesrsity,Urumqi 830054,China
       Abstract:ObjectiveTo optimize the ultrasonic extraction condition for the flavonoids from Cicer arietinum L. MethodsThe extraction rate of flavonoids was used as index and the experimental conditions, such as ethanol concentration , ultrasonic time, solvent quanity and extraction times was optimized by orthogonal design. UV-Spectrophotometry was used for the determination.ResultsThe order of factors to affect the flavonoid extraction was  ethanol concentration ＞ extraction times ＞  solvent quanity ＞  ultrasonic time.ConclusionThe optimum ultrasonic extraction are：A1B3C3D3.
       Key words:Cicer arietinum L.；   Flavonoids；  Orthogonal test
       鹰嘴豆(Semen Ciceris Ariefini)为豆科Leguminosae植物 ,因其籽实尖如鹰嘴，故名鹰嘴豆。是维吾尔族习用药材，维吾尔语里叫“Nukut”直译 “奴乎提”或“诺胡提” ［1］。在医药方面的应用已有悠久的历史。维吾尔族用它治疗支气管炎、粘膜炎、霍乱、便秘、痢疾、消化不良、肠胃气胀、毒蛇咬伤、糖尿病、高脂血症、性欲降低、皮肤瘙痒、中暑等疾病［2］。据报道，新疆鹰嘴豆中含铁、铜、锌、锰、锶等5种微量元素［3］，含有11种氨基酸。鹰嘴豆发芽的种子胚芽部分和植物幼苗中含有黄酮类化合物。药理研究证明，鹰嘴豆对人体具有增加胆固醇终端产物的排泄作用，可降低血糖、血脂、［4］血压及肝组织脂质含量，鹰嘴豆及其制品是糖尿病、高血脂、高血压等特殊人群的首选健康食品。到目前为止，对鹰嘴豆中总黄酮的超声提取工艺研究及含量测定尚未见报道，本实验以总黄酮为考察指标，采用L9（34）正交实验法考察超声提取鹰嘴豆总黄酮的最佳工艺。旨在为鹰嘴豆进一步研究提供理论依据，也可用于鹰嘴豆的质量控制。
       1  仪器与材料
       TU-1800型紫外可见分光光度计，SK8210HP型超声清洗机，芦丁对照品（中国药品生物品检定所），电子天平（梅特勒-托利多上海仪器有限公司生产），所用试剂均为分析纯。鹰嘴豆购于佳家乐超市，产于新疆木垒县，将鹰嘴豆磨碎成粉,60℃烘干粉粹后过60目筛备用。
       2  方法
       2.1  样品的提取 
       精密称取鹰嘴豆粉1.000 g，加70%乙醇20 ml，提取2次，超声提取30 min，过滤，摇匀。再精密吸取2 ml置25 ml量瓶中，加60%乙醇稀释至刻度，摇匀，作为供试备用。
       2.2  总黄酮的测定
       2.2.1  标准曲线制备 
       精密称取120℃干燥至恒重的无水芦丁20 mg，置100 ml的容量瓶中，加60%的乙醇至刻度。精密吸取2，3，4，5，6 ml，分别放置25 ml的容量瓶中，加5%亚硝酸钠1.0 ml，摇匀，放置6 min，加1.0%硝酸铝1.0 ml放置6 min，加4%的氢氧化钠10.0 ml，用60%乙醇稀释至刻度，放置10 min后于510 nm处测吸收度，得回归方程为A=7.235C+0.020 1，r=0.999 7。
       2.2.2  样品的测定  
       量取供试品约10 ml于离心试管中，离心4 000 r/min，10 min，取上清液5.00 ml按“2.2.1”项下方法处理，测定吸光度值，代入回归方程，计算总黄酮含量。
       3  结果［5］
       3.1  提取工艺的单因素实验考察
       3.1.1  不同乙醇浓度对提取效果的影响分别用30%，50%，70%，95%乙醇溶液15 ml，对1 g鹰嘴豆提取两次，20 min/次，所得总黄酮的浓度为0.066 0%，0.068 0%，0.203 0%，1.768%，表明鹰嘴豆在95%乙醇溶液提取效果较好。
       3.1.2  不同提取时间对提取效果的影响溶剂量为15 ml，乙醇浓度为70%，对1g鹰嘴豆提取两次，分别用10，20，30，40 min,结果所得总黄酮的浓度为0.255 0%，0.298 0%，0.147 0%，0.125 0%，表明鹰嘴豆在提取时间20 min效果较好。
       3.1.3  不同溶剂量对提取效果的影响乙醇浓度为70%，20 min/次，对1 g鹰嘴豆提取两次，分别用10，15，20，25  ml溶剂来提取。结果所得总黄酮的浓度为0.142 0%、0.297 0%，0.264 0%，0. 247 5%, 表明鹰嘴豆在提取溶剂15 ml效果较好。
       3.1.4  不同提取次数对提取的效果影响乙醇浓度为70%，20 min/次，溶剂量为15 ml来提取1 g鹰嘴豆，提取次数分别为1次，2次，3次，4次。结果所得总黄酮的浓度为 0.040 0%，0.282 0%，0.288 0%，0.117 0%， 表明鹰嘴豆在提取次数3 次时效果较好。表1  因素水平 （略）
       3.2  正交实验及其结果在实际操作中，由于各因素之间相互交叉影响，因此为全面考察乙醇提取法的工艺参数，确定乙醇浓度，提取时间，溶剂量，提取次数等4种因素进行正交实验设计。见表1。
       从表2中的K1，K2，K3，Sj分析得到：乙醇浓度、提取时间、溶剂量、提取次数等4因素对黄酮提取量影响的主次顺序为：乙醇浓度-提取次数-溶剂量-超声提取时间，并且最佳提取工艺条件为乙醇浓度95%，提取次数为3次，溶剂量为25 ml，超声提取时间为40 min，即A1B3C3D3 。在最佳提取工艺条件下测得新疆维药鹰嘴豆中总黄酮的含量为4.012%。本研究为进一步开发利用新疆维药鹰嘴豆黄酮类化合物奠定了坚实基础。表2  正交实验结果（略）
       3  讨论
       通过研究得到的最佳提取工艺为乙醇浓度95%，提取次数为3次，溶剂量为25 ml，超声提取时间为40 min。在最佳提取工艺条件下测得新疆维药鹰嘴豆中总黄酮的含量为4.012%。
       【参考文献】
         　　［1］江苏新医学院.中药大辞典（上册）［M］.上海：上海人民出版社，1977：887.
       
       ［2］刘勇民.维吾尔药志（上册）［M］.乌鲁木齐：新疆科技卫生出版，1999：599.
       
       ［3］古丽克孜，阿日甫，阿依古丽，等.ICP-AES法测定新疆鹰嘴豆粉只5种微量元素［J］.光谱实验室，2000，17，（4）：411.
       
       ［4］侯水薇，王志勇，王厚冰，等.鹰嘴豆对小鼠的血糖及血脂的影响［J］.新疆师范大学学报（自然科学版），2005，24，（04）：62.
       
       ［5］王卓慧，张沐新，杨晓虹，等.洋葱中总黄酮乙醇提取工艺研究［J］.中草药杂志，2006，37（3）：387.