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       【摘要】 
       目的探讨消脂健肝饮治疗非酒精性脂肪肝的作用机制。方法采用高脂饮食喂饲大鼠复制非酒精性脂肪肝模型，实验分组为模型组、消脂健肝饮高剂量组、消脂健肝饮低剂量组、东宝肝泰对照组和正常对照组。以高、低剂量消脂健肝饮和东宝肝泰进行干预，然后测定各组大鼠血清、肝组织中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活性及丙二醛（MDA）的含量。结果模型组大鼠血清、肝组织中SOD，CAT活性均较正常组明显降低（P＜0.01），MDA含量均较正常组明显升高（P＜0.01）。与模型组比较各治疗组大鼠血清，肝组织中SOD，CAT活性均明显升高（P＜0.05或P＜0.01）；MDA含量均明显降低（P＜0.05或P＜0.01）。高剂量组与低剂量组在升高SOD，CAT活性和降低MDA含量方面作用明显优于东宝肝泰对照组（P＜0.05）。结论消脂健肝饮可显著提高大鼠SOD，CAT活性，降低MDA含量，提示该药物能够清除自由基，提高机体抗氧化能力。
       【关键词】  消脂健肝饮 非酒精性脂肪肝 大鼠 超氧化物歧化酶 过氧化氢酶 丙二醛
       The Effect of Xiao ZhiJianGanYin on SOD, CAT and MDA Contents in Serum and Liver in Non-alcohol Adiposis Hepatica Rats
       ZHANG Lianxiang,LIU Yuwen,ZHAO Xiaoping
       (Traditional Chinese Medical Hospital,Hebei Medical University,050011,China)
       Abstract:ObjectiveTo study the effect of XiaoZhiJianGanYin on non-alcohol adiposis hepatica.MethodsNon-alcohol adiposis hepatica rat model was made by feeding hyperlipemia forage.Rats were divided into at random model group,XiaoZhiJianGanYin high dosage group,XiaoZhiJianGanYin low dosage group,GongBaoGanTai control group and normal control group.Medicine was interfered and the activities of SOD,CAT and MDA content in serum and liver tissue were examined.ResultsCompared with normal group,the activities of SOD and CAT in other four groups were obviously lower than those in blank group(P＜0.01).The content of MDA was obviously increased (P＜0.01).The activities of SOD and CAT in treatment groups were obviously increased (P＜0.05;P＜0.01). The content of MDA was obviously decreased(P＜0.05;P＜0.01).The effects of high and low dosage groups surpass than that of control group(P＜0.05).ConclusionXiaoZhiJianGanYin can elevate the SOD,CAT activities, reduce the MDA content.
       Key words:XiaoZhiJianGanYin;  Non-alcohol adiposis;  Hepatica;  SOD;  CAT;  MDA
       消脂健肝饮系经过多年临床应用筛为选治疗非酒精性脂肪肝有较好疗效的经验方。有资料表明，氧应激与脂质过氧化损伤在脂肪肝的形成和发展中具有一定的作用［1］。为了进一步验证其药效，探讨其作用机理，以东宝肝泰为对照，观察了对非酒精性脂肪肝大鼠血清和肝组织中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活性及丙二醛（MDA）含量变化的影响。现将其对非酒精性脂肪肝大鼠血清、肝组织中SOD，CAT活性及MDA含量的影响报道如下。
       1  器材 
       1.1  药物
       消脂健肝饮由柴胡、炒白术、绞股蓝、丹参、泽泻、虎杖、枳实、生大黄、生山楂等药物组成。实验时，水煎浓缩至所需浓度。
       东宝肝泰片：通化东宝药业股份有限公司出品，批号为430110。实验时用0.5%的羧甲基纤维素钠配制成所需浓度的混悬液。
       1.2  动物健康雄性SD大鼠60只,体重180～200 g，由河北省实验动物中心提供。
       1.3  试剂SOD试剂盒（批号20010724）、CAT试剂盒（批号20010722），MDA试剂盒（批号20010628）均由南京建成生物工程研究所提供。
       1.4  仪器722型光栅分光光度计（上海精密科学仪器有限公司），MSE-25 型高速冷冻离心机（上海安亭科学仪器厂），分析天平（A&D. Company. Limited. Tokyo.Japan）。
       2  方法
       2.1   实验分组SD大鼠自由饮水进食,饲养于18～22℃明暗各12 h的清洁级动物实验室内，正常喂养1周后，随机分为5组。⑴正常对照组：灌服生理盐水；⑵模型对照组：灌服生理盐水；⑶消脂健肝饮低剂量组(简称低剂量组)：每日用东宝肝泰片，剂量为1.6 g/100 g ；⑷消脂健肝饮高剂量组（简称高剂量组）：每日用东宝肝泰片，剂量为3.2 g/100 g；⑸阳性对照组：每日用药剂量为0.1 g/100 g。各组1次/d灌胃，每次用药体积均按1 ml/100 g计算。
       2.2  模型复制及标本制作 除正常组喂饲普通饲料外，其余各组均喂饲高脂饲料。同时，各治疗组灌服对照药或治疗药，正常组、模型组灌服等量生理盐水。10周末，于最后一次给药禁食12 h后断头取血，取材备检。将血样低温离心，分离血清，密封，-20℃冷存待检。在肝脏最大叶距边缘1 cm处取小块肝组织用冰生理盐水冲洗，滤纸吸湿后，称取湿重0.3 g左右，加入预冷的生理盐水，冰水中制成10%匀浆，4℃ 4 000 r/min离心10 min，提取上清液，-20℃冷存待检。 
       2.3   高脂饲料配方［2］胆固醇1.5%（北京奥博星生物技术责任有限公司，批号20010330），10%猪油，胆盐0.5%（北京奥博星生物技术责任有限公司，批号20010330），基础饲料88%。高脂饲料由河北省实验动物中心加工制作。
       2.4   检测方法SOD采用黄嘌呤氧化酶法、CAT采用可见光法，MDA采用硫代巴比妥酸（TBA）比色分析法。严格按试剂盒说明书检测。
       2.5   统计学处理数据用±s表示，采用方差分析和q检验。
       3  结果
       3.1  消脂健肝饮对非酒精性脂肪肝大鼠血清及肝组织SOD活性的影响    结果显示，模型组大鼠血清、肝组织中SOD含量均较正常组明显降低（P＜0.01）；给药后各治疗组血清、肝组织中SOD含量均高于模型组（P＜0.05或P＜0.01）；低剂量组与高剂量组血清、肝组织中SOD含量均高于对照组（P＜0.05）；而低剂量组与高剂量组之间未见明显差异（P＞0.05）。结果见表1。表1   各组大鼠血清及肝组织中SOD活性测定结果比较(略)
       3.2  消脂健肝饮对非酒精性脂肪肝大鼠血清及肝组织中CAT活性的影响结果显示，模型组大鼠血清、肝组织中CAT的含量均较正常组明显降低（P＜0.01）；给药后各治疗组血清、肝组织中CAT含量均高于模型组（P＜0.05或P＜0.01）；低剂量组、高剂量组血清和肝组织中CAT的含量均高于对照组（P＜0.05），而低剂量组与高剂量组之间未见明显差异（P＞0.05）。结果详见表2。表2   各组大鼠血清及肝组织中CAT活性测定结果比较(略)
       3.3  消脂健肝饮对非酒精性脂肪肝大鼠血清及肝组织中MDA含量的影响结果显示，模型组大鼠血清及肝组织中MDA较正常组均异常升高（均P＜0.01）； 给药后低剂量组、高剂量组和对照组均能显著降低模型大鼠血清及肝组织中MDA 的含量，与模型组比较均具有显著性差异（P＜0.01）。低剂量组与高剂量组血清、肝组织中MDA含量均低于对照组（P＜0.05）；而低剂量组与高剂量组之间未见明显差异（P＞0.05）。结果见表3。表3  各组大鼠血清及肝组织中MDA含量测定结果比较(略)
       4  讨论
       4.1  消脂健肝饮的组方依据脂肪肝在中医学中无独立的病名，根据其病因、病机及临床表现，大致可归属于中医的“胀满”“痰证”“淤血”等范畴。我们在临床实践中体会到非酒精性脂肪肝的发生原因多是由于长期嗜食肥甘厚味、或情志失调、或多逸少劳，致脾失健运，湿聚痰生；肝失调达，气机郁滞，血脉淤阻，痰淤互结于肝而形成。以疏肝健脾，消痰化淤，利湿化浊为治疗大法，精选诸药研制成消脂健肝饮，方以柴胡、虎杖疏肝利胆，清利湿热，促使脂肪降解；白术、绞股蓝补气健脾，燥湿利水，以助痰淤的排出，而且也体现了“见肝之病，当先实脾”的治疗法则；泽泻除水湿、消痰浊，阻脂质生成；丹参活血通络，祛肝经之淤，增强肝脏血运，消除积聚脂肪；生大黄通腑导滞，降浊祛脂，与泽泻配用，分流疏导，使邪有去路；生山楂祛淤消积，消化脂肪；枳实行气消痞，理脾导滞，且与升散之柴胡相配，一升一降，条畅气机，以利于气血运行；诸药合用，痰淤得除，肝脾功能得复，从而达到抗脂肪肝的目的。
       4.2  非酒精性脂肪肝动物模型的复制本研究利用高脂饲料成功复制了大鼠肥胖、非酒精性脂肪肝模型,其特点是动物体重和血脂（TC，TG）较正常组显著增加，血清转氨酶呈升高趋势，光镜下可见肝细胞中度细胞水肿,少量的肝细胞坏死,多数肝细胞内可见大小不等、数量不一的脂滴空泡（脂肪变性），重度变性者，脂滴空泡融合，呈现中至重度脂肪变性，与文献报道相近［3］。该模型与人类肥胖、非酒精相关性脂肪肝的表现极为相似，因此，该模型适用于药物治疗非酒精性脂肪肝的作用机制研究。
       4.3  消脂健肝饮可显著提高大鼠抗氧化损伤能力本研究显示,采用高脂饮食复制的大鼠非酒精性脂肪肝动物模型,其血清，肝组织中MDA含量均较正常组明显升高,血清、肝组织中SOD，CAT含量均较正常组明显降低(P＜0.01)，表明模型组大鼠肝细胞耗氧量明显增加,体内产生大量自由基,脂质过氧化反应增强,致使其反应产物MDA增多；而肝脏脂肪变性又使得机体抵抗力降低,抗自由基能力减弱,不能产生足够的SOD和CAT。MDA含量增多,SOD，CAT活性下降,意味着机体进入失代偿状态。通过模型组与正常组的结果比较显示,抗氧化能力下降是非酒精性脂肪肝的一个重要发病机制。经用药治疗,高剂量组、低剂量组及对照组动物血清及肝组织中MDA含量均低于模型组(P＜0.05或P＜0.01),显示出治疗各组药物均能抑制脂质过氧化反应,抑制血清及肝组织中MDA含量的升高。高剂量组、低剂量组及对照组动物血清、肝组织中SOD，CAT含量均高于模型组(P＜0.05或P＜0.01),说明治疗各组药物均能增强S0D，CAT的活性,提高机体抗氧化损伤能力。
       从实验结果尚可看出,用药物对非酒精性脂肪肝大鼠进行干预,对于抑制血清、肝组织中MDA含量的升高, 提高血清，肝组织中SOD，CAT活性，高剂量组、低剂量组优于对照组(P＜0.05),而高剂量组与低剂量组之间无明显差异。
       综上所述,经动物实验证实,非酒精性脂肪肝时,SOD，CAT活性显著下降,提示血清和肝内SOD，CAT缺乏，抗氧化能力下降，可能是非酒精性脂肪肝的重要发病机制之一。消脂健肝饮能显著提高大鼠SOD，CAT活性,降低氧自由基代谢产物MDA的含量。说明该药物具有清除机体自由基,增强抗氧化能力的作用,可以调节和改善自由基代谢平衡。此可作为消脂健肝饮治疗非酒精性脂肪肝的作用机制之一。
       【参考文献】
         　　［1］范建高，曾民德，王国良.脂肪肝的发病机制［J］.世界华人消化杂志，1999,(1)：3.
       
       ［2］戴宁，曾民德，李继强，等.非酒精性脂肪肝肝细胞色素P450ⅡEⅠ的表达与氧化抗氧化的关系［J］.中华肝脏病杂志，1999，7（2）：7.
       
       ［3］李文彪，王毅仁.清源调脂胶囊治疗非酒精性脂肪肝实验研究［J］.中西医结合肝病杂志，2001，11(3)：150.