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       【摘要】 
       目的通过动物实验研究肝宁颗粒和大黄利胆抗炎的作用，进一步探讨肝宁颗粒的组方合理性。方法采用胆管引流法分别收集并计量给药后0.5，1，1.5，2，2.5 h的胆汁的方法观察肝宁颗粒和大黄对肝脏分泌胆汁的影响；采用测定小鼠胆囊重量的方法观察肝宁颗粒和大黄对胆囊的影响；采用小鼠耳肿胀、小鼠腹腔毛细血管通透性、小鼠琼脂肉芽肿、羧甲基纤维素钠致小鼠腹腔白细胞游走、大鼠蛋清性关节炎等炎症模型观察肝宁颗粒和大黄的抗炎作用。结果肝宁颗粒和大黄均能明显增强胆汁分泌量；促进胆囊收缩，降低胆囊重量；抑制二甲苯、蛋清所致急性炎症，降低腹腔炎症小鼠的毛细血管通透性，抑制腹腔白细胞游走，抑制肉芽组织增生。但肝宁颗粒的利胆抗炎作用均比大黄强。结论肝宁颗粒组方合理，利胆抗炎作用明显。
       【关键词】  肝宁颗粒 大黄 利胆作用 抗炎作用 比较研究
       Comparative Study on the Cholagogic and Anti-inflammatory Effect of Ganning Granule and Rhubarb
       LIU Wenping
       (Children"s Hospital of Zhengzhou，Zhengzhou 450053,China)
       Abstract:ObjectiveTo study the cholagogic and anti-inflammatory effect of Ganning granule and to discuss the rationality of Ganning granule in formulation.MethodsBiliary duct cannula bile at 0.5，1，1.5，2，2.5 h after intraduodenal administration in rats was collected and counted to observe the effect of Ganning granule and Rhubarb on biliary secretion;the weight of cholecyst in mice was counted to observe the effect of Ganning granule and Rhubarb on the cholecyst of mice.Anti-inflammatory effect of Ganning granule and Rhubarb was observed on the models of dimethyl benzene-induced auricular swelling in mice,celiac capillary permeability in mice,agaragar-induced granuloma in mice,chemotaxis of WBC induced by CMC-Na in mice and hind paw edema induced by fresh egg white in rats.ResultsGanning granule and Rhubarb could significantly increase the biliary secretion, decrease the weight of cholecyst in mice，inhibit the acute  inflammation induced by album and xylene，decrease the celiac capillary permeability，inhibit chemotaxis of leucocyte induced by CMC-Na and inhibit the proliferation of granuloma. Moreover, the cholagogic and anti-inflammatory effect of Ganning granule was better than that of Rhubarb.ConclusionThe formulation of Ganning granule is reasonable; Ganning granule has considerable choleretic and anti-inflammatory effect.
       Key words:Ganning granule ;  Rhubarb;   Cholagogic effect;   Anti-inflammatory effect;   Comparative study
       肝宁颗粒是由经典利胆验方中常用药物大黄，结合活血化淤理论，辅以川芎制成的复方制剂。其组方简单、合理，临床应用多年，对胆囊炎等疾患具有显著疗效。为了进一步阐明其药效机制，我们利用动物实验观察了该方药利胆消炎的药理作用，并与单味中药大黄作了对比。 
       1  器材
       1.1  动物 
       昆明种小鼠，雄性，体重18～22 g。Wistar大鼠，250～300 g，雄性。均购自河南省实验动物中心。
       1.2  实验用药与试剂 
       肝宁颗粒，由河南大学药学院中药药理实验室提供；大黄浸膏，由河南大学药学院中药药理实验室提供；地塞米松，浙江仙琚制药股份有限公司，批号：050127。伊文思兰，Fluka公司，批号050905；二甲苯，上海试剂三厂，批号051013；醋酸，广州新成化工厂，批号050728。
       1.3  仪器 
       AG－135型电子天平，梅特勒－托利多；UV-265FW型紫外分光光度计，日本岛津；LDZ4型台式自动平衡离心机，北京医用离心机厂。
       1.4   统计分析
       结果均以(±s)表示，组间差异性比较采用单因素方差分析，SPSS11.5自动处理，P<0.05为有显著性差异，P<0.01为有非常显著性差异。
       2  方法 
       2.1  对大鼠胆汁分泌的影响［1］
       雄性Wistar大鼠30只，体重250～290 g。随机分为3组，每组10只。分别为：①空白对照组；②肝宁组（3 g/kg）；③大黄组（2 g/kg）。药物用蒸馏水配制，给药量均为10 ml/kg,ig1次/d，连续给药7d。末次给药前12h禁食不禁水，实验以20%乌拉坦（0.5 ml/100 g）腹腔麻醉后，打开腹腔。找到胃幽门部，翻转十二指肠。对着亮处在十二指肠降部肠系膜中可清晰看到有韧性、里面流着黄色液体的胆管。用眼科镊将覆盖在表面的被膜连续剥离2 cm，以暴露出胆总管。在其下穿2根丝线，结扎乳头部，用5号静脉输液针头向肝脏方向做胆管穿刺，然后拔掉针头（该操作避免了传统用眼科剪作“V”形切口所易导致的胆管断裂现象，提高了实验成功率），从开口处向肝脏方向插入外径1 mm左右的塑料管（外科硬脊膜外麻醉导管在电炉上方加热拉细而成），结扎固定，收集胆汁（实验过程中创面用生理盐水纱布覆盖，并保持湿润）。待胆汁流量稳定后，按表1中分组及剂量从十二指肠进行末次给药（1 ml/100 g）。给药后每隔30min收集胆汁1次，共5次。记录每30min胆汁流量，并计算5次胆汁的总流量。
       2.2   抗炎作用研究 
       2.2.1  对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响［2］ 
       取体重18～22 g雄性小鼠40只，随机均分成4组，按表2中分组及剂量连续口服给药（0.2 ml/10 g）7 d，最后一次给药30min后，各鼠左耳两面涂二甲苯50 μl致肿,右耳不涂为正常耳。4h后脱颈椎处死小鼠，用7 mm打孔器取左耳和右耳同一部位的圆片，于电子天平上称重。左耳重量减去右耳重量为肿胀度。肿胀抑制百分率（%）= (空白对照组平均肿胀度－用药组平均肿胀度)/空白对照组平均肿胀度 ×100 %。 求算肿胀度及给药组的炎症抑制率。
       2.2.2  对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响［1，3］ 
       取体重18～22 g雄性小鼠40只，随机均分成4组，按表3中分组及剂量连续口服给药（0.2 ml/10 g）7 d，最后一次给药后1 h，各鼠尾静脉注射0.5%伊文思兰0.1 ml/10 g，并立即腹腔注射0.7%醋酸溶液0.1 ml/10 g。30 min后脱颈处死小鼠。剪开腹腔用6 ml生理盐水分数次冲洗腹腔，用吸管吸出冲洗液，合并后加生理盐水，稀释至10ml，混匀，3 000 r/min离心15 min，取上清液用UV-265FW型紫外分光光度计于590 nm处测吸收度。
       2.2.3  对蛋清致大鼠足肿胀的影响［4］ 
       取体重220～250 g雄性大鼠40只，随机均分成4组，按表4中分组及剂量连续口服给药（0.2ml/10 g）7 d。在大鼠右后足踝关节处标记，将右后足踝关节处标记后，将右后足放入刻度容器装置内，测量大鼠右后足容积。然后于最后一次给药后30 min，每鼠右后足跖腱膜下注入0.1 ml 10%蛋清致炎。分别于注入蛋清后0.5，1，2，3，4 h和5h测量右后足的容积，将给药后各时间内足容积减去致炎前容积，得足肿胀度。
       2.2.4  对羧甲基纤维素钠所致腹腔白细胞游走的影响［5］
       取体重18～22 g雄性小鼠40只，随机均分成4组，按表5中分组及剂量连续口服给药（0.2 ml/10 g）7 d，最后1次给药后1 h，每只小鼠腹腔注射1%的羧甲基纤维素钠溶液0.5 ml，30 min后处死动物，每鼠腹腔注射5 ml生理盐水，轻揉腹部，抽取腹腔液滴于白细胞计数板上，以加满白细胞计数板为准，于镜下计数白细胞数。
       2.2.5  对小鼠琼脂肉芽肿增生的影响［6］ 
       取体重18～22 g雄性小鼠40只，随机均分成4组，按表6中分组及剂量连续口服给药（0.2 ml/10 g）10 d。于给药第3天各组小鼠在乙醚轻麻醉下无菌操作，在各鼠背中线皮下注射2%琼脂0.5 ml。末次给药后第2天将各组动物处死。手术摘取完整肉芽组织，称重。
       3  结果
       3.1  对大鼠胆汁分泌的影响 
       研究结果表明：肝宁颗粒和大黄对大鼠肝脏胆汁分泌均有明显的促进作用，但肝宁的利胆作用强于大黄。结果见表1。表1  肝宁颗粒和大黄对大鼠胆汁分泌的影响(略)
       3.2  对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响 
       研究结果表明：肝宁颗粒和大黄均能显著抑制二甲苯所致的小鼠耳肿胀，但肝宁的抗炎作用强于大黄。结果见表2。表2  肝宁颗粒和大黄对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响(略)
       3.3  对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响 
       研究结果表明：肝宁颗粒和大黄均能显著降低毛细血管通透性，但肝宁的抗炎作用强于大黄。结果见表3。表3  肝宁颗粒和大黄对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响 （略）
       3.4  对蛋清致大鼠足肿胀的影响 
       研究结果表明：肝宁颗粒和大黄均能抑制蛋清所致大鼠足肿胀，但肝宁的抗炎作用强于大黄。结果见表4。表4  肝宁颗粒和大黄对蛋清致大鼠足肿胀的影响(略)
       3.5  对羧甲基纤维素钠所致腹腔白细胞游走的影响 
       研究结果表明：肝宁颗粒和大黄均能减少小鼠腹腔白细胞数目，但肝宁的抗炎作用强于大黄。结果见表5。表5  肝宁颗粒和大黄对羧甲基纤维素钠所致腹腔白细胞游走的影响（略）
       3.6  对小鼠琼脂肉芽肿增生的影响 
       研究结果表明：肝宁颗粒和大黄均能抑制小鼠琼脂肉芽肿增生，但肝宁的抗炎作用强于大黄。结果见表6。表6  肝宁颗粒和大黄对小鼠琼脂肉芽肿增生的影响(略)
       4  讨 论
       胆囊炎为常见急腹症之一，发病原因常与细菌感染及胆囊结石有关。主要病因病机：一为气机久郁，气滞血淤，胆腑气阻络痹；二为湿热久蕴，交蒸肝胆，胆腑疏泄不利；三为胆汁久滞，热邪煎熬成石，胆道痹阻；四为湿热炽盛，气滞血淤，胆汁滞而不通而致胁痛。故治疗当以行气开郁、活血化淤、疏肝利胆、清热化湿为主。大黄苦能祛湿，寒能清热，其性下行，又有保肝利胆之效。但从治疗胆囊炎的基本原则看，大黄缺乏疏肝理气之功能。而川芎则擅活血行气。肝宁颗粒由大黄、川芎经科学配比而成，不仅起到大黄清热化湿、保肝利胆之效，又发挥出川芎行气开郁之长，而且两味中药均具有活血化淤之效。活血化淤有助于降低血管的通透性，使渗出减少，促进吸收，有利于炎症的消退；还有助于改善血液的黏滞性，减少血管阻力，改善微循环，增加组织灌流量，提高或恢复对细胞器的氧气供应，有利于改善肝功能，促进胆汁分泌及炎症的修复。
       本实验对肝宁颗粒和大黄的利胆抗炎作用做了对比研究。实验结果进一步证明，无论在利胆还是抗炎作用上，肝宁颗粒药效均优于大黄。而且肝宁颗粒组方简单合理、作用机理明确，既符合现代医学的发展要求，又不失传统中医之基础。
       【参考文献】
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