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       【摘要】 
       目的研究砂生槐水提取物对免疫抑制型小鼠免疫功能的影响。方法通过给小鼠腹腔注射环磷酰胺，建立免疫功能抑制模型，并灌服砂生槐水提取物［0.6～2.4 g/(kg·d)］。以胸脾指数，B淋巴细胞的增殖，抗绵羊红细胞特异抗体的生成，腹腔巨噬细胞的吞噬作用为测定指标。结果与模型对照组比较，砂生槐水提取物3个剂量组均可提高免疫抑制小鼠脾脏指数（P<0.01），可协同LPS促进免疫抑制小鼠B淋巴细胞的增殖（P<0.01），高、中剂量组可促进免疫抑制模型小鼠抗绵羊红细胞特异抗体的生成（P<0.01，P<0.05），3个剂量组均能增强免疫抑制小鼠巨噬细胞的吞噬功能（P<0.05，P<0.01，P<0.01）。结论 砂生槐水提取物对免疫抑制型小鼠B淋巴细胞功能和巨噬细胞吞噬功能有增强作用。
       【关键词】  砂生槐 水提取物 免疫抑制 B淋巴细胞 巨噬细胞
       The Effect of Aqueous Extracts of Sophora moorcroftiana on Immune Function in Immunosuppressive Mice Induced by Cyclophosphamide
       AN Fangyu ，LIU Ying, MA Xingming, TIAN Weihua， GUO Jun ,LUO Yanping
       1.Department of Immunology of Basic Medicine,Lanzhou University 730000,China;
       2.  Pulmonary Branch Hospital of Lanzhou 730000, China；
       3.Key Laboratory of Preclinical Study for New Drugs of Gansu Province,Lanzhou 730000,China
       Abstract:ObjectiveTo explore the effect of Sophora moorcroftiana  on the immune-function in the model of immunosuppressive mice. MethodsThe mouse model of inhibition was established induced by cyclophosphamide. After taken orally the aqueous extracts of sophora moorcroftiana〔0.6～2.4 g/(kg·d)〕, antagonistic experiments were observed in vivo, the spleen index and thymus gland index, proliferation index of B lymphocyte , the production of sheep red blood cell (SRBC) specific antibody ,phagocytosis of the phagocytes were used as evaluated indexes. ResultsThe low, middle, high doses of the aqueous extracts of Sophora Moorcroftiana could significantly improve immune function, compared with model groups ,Sophora moorcroftiana 〔0.6～2.4  g/(kg·d)〕 could obviously increase the spleen index; antagonize inhibition of immunological function caused by cyclophohphamide, promote B lymphocyte proliferation , the phagocytosis of  the phagocytes. Sophora moorcroftiana 〔1.2～2.4g/(kg·d)〕 could also increase the production of sheep red blood cell (SRBC) specific antibody. ConclusionThe aqueous extracts of Sophora moorcroftiana seed has much promotion effect on immunity and phagocytosis of the phagocytes in suppressed mice.
       Key words：Aqueous of Sophora moorcroftiana;   Cyclophsphamide;   Immunosuprpression;   B lymphocyte;   Phagocyte
       砂生槐Sophora moorcroftiana又名“西藏狼牙刺”“刺柴”，豆科槐属多年生矮灌木，其茎尖和托叶硬化为尖长刺，为西藏高原一特有植物种。在雅鲁藏布江河谷呈大片分布，具有极强的抗旱、耐瘠薄、抗风沙等生态适应性和很好的防风固沙、保持水土功能［1］。藏医药记载［2］，砂生槐多以种子入药，味苦性凉，消炎解毒、催吐，主治湿热黄疸、白喉、痢疾、赤巴病、消化不良、虫病等，是一种极为宝贵的植物药用资源。本实验首次研究砂生槐水提取物对免疫抑制型小鼠B淋巴细胞功能、腹腔巨噬细胞吞噬功能等的影响，为充分开发其药用价值提供实验依据。
       1  材料和方法
       1.1  动物与试剂 
       昆明种小鼠，清洁级，体重18～22 g，雌雄各半，由兰州大学实验中心提供（合格证：医动字第14-005号）。环磷酰胺（Cyclophosphamide CY）由江苏恒瑞医药股份有限公司提供（批号06122221）；RPMI1640培养基为美国GIBCO公司产品；脂多糖（LPS）、噻唑蓝(MTT)购自美国Sigma公司；小牛血清为杭州四季清公司产品；砂生槐水提取物由兰州大学基础医学院免疫学研究所提供。
       1.2  方法
       1.2.1  建立动物模型及给药［3，4］将昆明种小鼠随机分为5组，每组10只。分别为①空白对照组：生理盐水0.4 ml/（20 g·d）腹腔注射，连续3 d，第4天给予生理盐水灌胃0.2 ml/（20g·d），连续10 d；②模型对照组：环磷酰胺0.4 ml/（20 g·d）［ 80 mg/（kg·d）］腹腔注射，连续3 d，第4天给予生理盐水，用量与给药天数同上；③药物（炒生槐水提物低、中、高剂量）组：环磷酰胺的剂量用法同上，第4天开始灌服砂生槐子水提取物0.2 ml/（20 g·d），剂量分别为0.6，1.2，2.4 g/（kg·d），连续10 d。同时于第5天和第9天分别给各组小鼠腹腔注射10%绵羊红细胞（SRBC） 0.4 ml/（20 g·d）免疫2次，给药结束后次日眼球采血，分离血清并经56℃30 min灭活备用。同时分离胸腺和脾脏并称量湿重，计算胸、脾指数［5］，胸腺指数或脾脏指数=胸腺或脾脏重量（mg）/体重（10 g）。
       1.2.2  小鼠血清抗绵羊红细胞抗体效价测定
       参考文献［6］，血清抗绵羊红细胞抗体效价测定采用直接凝集反应。将分离的血清加在24孔 U型板上，用生理盐水对倍稀释，每孔加入1%SRBC 0.5 ml，37℃水浴1 h 后，观察结果，以出现明显凝集（++）的最高稀释度作为其凝集效价。同时用生理盐水作阴性血清对照。
       1.2.3  B 淋巴细胞增殖反应
        
       小鼠分组及给药方法同上。采用噻唑蓝(MTT) 比色法［7］，常规制备脾细胞悬液（2×106/ml），取100 μl 加入96孔细胞培养板内。每样本设8个平行孔，其中4孔加脂多糖（LPS）的完全培养液（终浓度为10 mg/L，100 μl/孔），4孔则只加完全培养液100 μl/孔，于37℃，5%CO2培养箱中培养68 h，加MTT（5 g/L）10 μl/孔，振荡混匀，继续培养4h后加酸化异丙醇100 μl/孔，振荡混匀，用酶联免疫测定仪（DG-3022型）测OD值（检测波长578 nm，630 nm为参比波长）。计算刺激指数=（实验孔OD均值/对照孔OD均值）。
       1.2.4   小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红能力的检测
       小鼠分组及给药方法同上。参照文献［8，9］在无菌条件下，每只小鼠腹腔注射灭菌生理盐水10 ml ，轻轻按揉腹部2～3 min， 抽回腹腔液。用不完全RPMI1640洗涤离心后。再用 含10%小牛血清的 RPMI1640 培养液调细胞浓度至1×107/ml，取100 μl于96孔板，另加完全RPMI 1640 100 μl 为空白对照孔，37℃5%CO2培养箱培养4 h ，甩去培养基，贴壁细胞即为腹腔巨噬细胞单层，每孔加入0.1% 中性红生理盐水100 μl ，继续培养30 min，弃上清液，用PBS液洗2遍，每孔加入细胞溶解液（醋酸∶无水乙醇=1∶1）100 μl，室温下放置过夜。待细胞溶解后，于570 nm酶标仪上测吸光度。
       1.3  数据处理
       采用SPSS 10.0 软件的 One-Way 方差分析（ANOVA），最小显著差（LSD）进行统计处理。
       2  结果
       2.1  砂生槐水提取物对免疫抑制模型小鼠体液免疫功能的影响
       小鼠抗绵羊红细胞抗体效价及胸腺指数和脾脏指数见表1。结果显示砂生槐水提取物可以抵抗环磷酰胺对体液免疫功能的抑制作用，与空白对照组比较，砂生槐水提取物组的脾脏指数无统计学差异（P>0.05），尤其砂生槐水提取物中、高剂量组的使脾脏指数恢复为正常水平，但对胸腺的影响不明显（P>0.05）。环磷酰胺能明显抑制小鼠的抗体形成能力（P<0.01），砂生槐水提取物3个剂量组均可以促进免疫抑制模型小鼠产生抗体的能力，与环磷酰胺组比较，高、中剂量组小鼠抗体形成能力增强，具有显著性差异（P<0.05或P<0.01）。表2显示环磷酰胺组（模型对照组）小鼠在有无脂多糖（LPS）的刺激下B淋巴细胞增殖反应均降低，有显著性差异；同时给予砂生槐子水提取物后，小鼠B淋巴细胞的自身增殖和脂多糖（LPS）诱导的增殖及刺激指数均较环磷酰胺组增高，差异有显著性。表1   小鼠抗绵羊红细胞抗体效价及胸腺指数和脾脏指数(略)
       2.2   砂生槐水提取物对免疫抑制模型小鼠巨噬细胞功能的影响表2显示模型对照组小鼠巨噬细胞吞噬中性红能力（A值）减弱（P<0.01），砂生槐水提取物低、中、高剂量组小鼠的巨噬细胞吞噬中性红的能力均较模型组增强，有显著性差异（P<0.05或P<0.01），但各剂量组相比无显著性差异（P>0.05）。表2  小鼠B淋巴细胞增殖反应及腹腔巨噬细胞吞噬功能(略)
       3  讨论
       在早前研究中，崔建芳等［10］用薄层光密度法分析得出结论：砂生槐种子中至少含有4种生物碱，即1.64%氧化苦参碱，0.5%氧化槐果碱，0.172%苦参碱，0.005%槐果碱。研究证明上述生物碱具有调节Bcl-2蛋白表达、抗肿瘤、抑菌、抑病毒、抗心率失常、正性肌力、抗缺氧、扩血管、降血脂、调节免疫功能等多种 药理作用［11～14］。马兴铭等［15～17］也证明砂生槐生物碱具有抑菌，抗寄生虫、抗肿瘤活性，因此，特有植物砂生槐具有重要的药物开发价值。               
       
       本实验首次研究砂生槐水提取物对免疫抑制型小鼠免疫功能的影响。从实验结果可以看出，砂生槐水提取物［0.6～2.4 g/（kg·d）］均能在不同程度上提高免疫抑制模型小鼠的B淋巴细胞产生抗体和体外增殖能力，不同剂量的砂生槐水提取物对免疫抑制小鼠的脾重量均有不同程度的提高。高剂量组淋巴细胞的抗体产生能力、增殖能力与对照组相近，表明该药在高剂量时可将受抑制小鼠的体液免疫功能上调接近正常水平，促进B淋巴细胞产生抗绵羊红细胞抗体，因此，砂生槐水提取物能够对抗环磷酰胺对体液免疫功能的抑制作用，提示砂生槐水提取物对免疫功能低下者的B淋巴细胞功能有增强作用通过进一步观察砂生槐水提取物对免疫抑制型小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响。发现此药对免疫抑制小鼠的腹腔巨噬细胞的活性有显著的提高作用，其细胞活性的提高率与药物剂量也存在依赖关系，且均有统计学意义，提示此药物对免疫功能低下机体的腹腔巨噬细胞吞噬功也有显著的提高作用。
       
       本实验从体液免疫和腹腔巨噬细胞吞噬功能两方面证明，砂生槐水提取物对免疫抑制型小鼠的免疫功能具有明显的增强作用。通常情况下，机体处于一种稳定状态，阴阳调和，当这种平衡被破坏，机体就会产生疾病，即失稳状态。本实验证明，砂生槐水提取物对失稳状态下的机体免疫功能降低状态有显著的提高作用，甚至可使其恢复至正常状态，体现了中药的调节效应。但是，砂生槐水提取物是一种粗提物，这种粗提物中具体含有哪些有效成分，以及何种成分对免疫抑制模型动物的免疫功能有增强作用，尚需对该提取物进行分离纯化后进一步研究。
       【参考文献】
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