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       【摘要】 
       目的观察壮药白莲Ⅰ号方对小鼠移植性肉瘤S180的抑瘤作用和其对小鼠血浆白细胞介素18（IL18）的影响，以探讨该药抑制肿瘤的作用是否与诱生小鼠血浆中IL18的含量有关。方法建立小鼠移植肉瘤S180模型。用大、中、小剂量壮药白莲Ⅰ号方及环磷酰胺治疗肉瘤S180小鼠，观察其抑瘤率及血浆IL18的含量。结果白莲Ⅰ号方在一定剂量范围内对荷瘤小鼠的抑瘤率>30％，并且白莲Ⅰ号方各剂量组均有促进荷瘤小鼠IL-18生成的作用趋势，改善荷瘤小鼠的生存质量。结论白莲Ⅰ号方能有效抑制小鼠S180实体瘤的生长，存在量效关系；白莲Ⅰ号方具有诱生荷瘤S180小鼠血浆IL-18的作用，具有良好的免疫调节作用。
       【关键词】  壮药白莲Ⅰ号方 S180癌细胞 白细胞介素-18
       Effect of Zhuang Yao Bai Lian Prescription No.1 on IL-18 in Sarcoma S180 Mice
       DOU Xibin，QIN Xingle，SU Xiahui
       Youjiang Medical College for Nationalities, Baise 533000，China
       Abstract：ObjectiveTo study the effect of Bai Lian Prescription No.1 on tumor and IL-18 level in sarcoma S180 mice. MethodsSarcoma 180 tumor mice were treated with high，medium and low doses of Bai Lian Presription No.1 and cyclophosphamide (CTX) . The inhibiting rate and the content of IL-18 were assayed in mice. ResultsThe tumor inhibiting rate on tumor  mice was over 30％， and it could promote the prduction of on IL-18 in sarcoma S180 mice, improve living quality of the tumor mice.ConclusionBai Lian Prescription No. 1 can inhibit the growth of transplanted S180 tumor of mice significantly in a dose-dependent manner promote the production of IL-18 in sarcoma S180 mice, which has a good immunoloregulation effect.
       Key words：Bai Lian Presription No.1；  Transplanted sarcoma 180 tumor；  Interleukin-18
       
       壮药白莲Ⅰ号方是广西民族医药研究所历经十余年在全区范围内开展民族医药普查工作，收集并整理出来的广西壮族地区民间常用的抗肿瘤验方，组方依据壮医治疗肿瘤调气解毒补虚的基本原则而设，具有清热解毒、活血化淤、软坚散淤、益气补虚之功。临床初步应用有着抑制肿瘤生长、改善症状、延长生命、提高生存质量的效果，对放化疗还有减毒增效作用。为深入探讨壮药白莲Ⅰ号方的抗肿瘤药效学作用，为其临床用药提供理论依据，笔者进行了以下的实验研究。现报道如下。
       1  器材
       1.1  动物与瘤株
       昆明种雄性小鼠60只，体重（20±2）g，由广西中医药研究所提供。小鼠S180肉瘤，由广西中医药研究所提供，瘤株按常规传代保种。
       1.2 药物
       壮药白莲Ⅰ号方由白花蛇舌草、半枝莲、白花丹、叶下珠、广莪术、三棱、黄花倒水莲、旱莲草、五指牛奶、黄芪、党参组成，第1次加冷水至液面漫过药物2 cm ，浸泡30 min，武火急煎，煮沸后再用文火煮60 min，第2次加冷水至液面与药物齐平，武火急煎，煮沸后再用文火煮45 min，将两次所得药液过滤后混匀，置60℃水浴锅中浓缩至每100 ml药液中含生药160 g，置冰箱备用。注射用环磷酰胺（CTX），上海华联制药有限公司生产，200 mg/支，产品批号：012034，用生理盐水配制成3 mg/ml, 置冰箱备用。
       1.3  试剂及仪器 
       白介素-18检测试剂盒（北京北方生物技术研究所产品）；FJ2008型放射免疫计数器（国营二六二厂产品）；DL-8R型冷冻离心机（上海离心机械研究所产品）。
       2  方法
       2.1  分组昆明种雄性小鼠60只，称重编号后，按随机区组分为白莲Ⅰ号大剂量组（A组）、白莲Ⅰ号中剂量组（B组）、白莲Ⅰ号小剂量组（C组）、西药阳性对照组（D组）、生理盐水组（E组）、正常饲养组（F组），共6组，每组10只动物。
       2.2  造模在无菌条件下，抽取接种后7 d的S180小鼠的腹水，用无菌生理盐水稀释至2×106/ ml，于A～E组50只小鼠的右前肢腋下皮肤，每鼠接种0.2 ml S180瘤细胞悬液。
       2.3  给药接种后第2天开始给药。A组壮药白莲Ⅰ号方大剂量组（按30 ml/kg灌胃给药）、B组壮药白莲Ⅰ号方中剂量组（按20 ml/kg灌胃给药）、C组壮药白莲Ⅰ号方小剂量组（按10 ml/kg灌胃给药）、D组环磷酰胺组（按60 ml/kg腹腔注射）、E组生理盐水组（按0.2 ml/20 g灌胃）、F组为正常饲养组（自由饮食、饮水）。给药1次/d，连续给药10 d。
       2.4  检测指标 
       2.4.1  白细胞介素-18（IL-18）含量的测定末次给药后24 h称体重，摘眼球取血，离心15 min（3 500 r/min），取血清，采用抗原竞争放免方法，按IL-18试剂盒说明书方法测定IL-18的含量。
       2.4.2  荷瘤小鼠的抑瘤率末次给药后24 h称体重后，颈椎脱臼处死小鼠，取肿瘤组织，精密电子天平称重，按下列公式计算抑瘤率［1］。抑瘤率（％）＝（对照组平均瘤重－给药组平均瘤重）/对照组平均瘤重×100％
       2.5  统计学方法实验结果计量资料以±s表示，多组间多个样本均数的比较采用方差分析，选用SPSS 11.5医学统计软件进行统计学处理。
       3  结果
       3.1  对荷瘤小鼠的一般状况的影响各组小鼠接种前活泼度、体毛致密度无明显差别。随着肿瘤的生长，各组小鼠日进食量、进水量逐渐减少，活泼度下降，环磷酰胺组出现掉毛现象，其余组无掉毛现象。
       3.2  对移植性S180实体瘤抑制作用环磷酰胺组及白莲Ⅰ号高、中、低剂量组S180荷瘤小鼠的平均瘤重均明显低于模型对照组（P<0.01或P<0.05），环磷酰胺组及白莲Ⅰ号高、中、低剂量组抑瘤率分别为51.40％，43.32％，37.13％，29.76％，其中白莲Ⅰ号高、中剂量组抑瘤率均大于30％，符合《现代肿瘤治疗药物学》关于抗肿瘤中草药有效性的标准(抑瘤率>30%)，因此可初步认为白莲Ⅰ号方具有一定的抗肿瘤作用，并且存在量效关系。结果见表1。表1  各组小鼠体重、肿瘤抑制率的比较（略）
       3.3  对荷瘤小鼠血浆IL-18的影响 与正常饲养组比较，白莲Ⅰ号3个剂量组均有促进荷瘤小鼠IL-18生成的作用趋势（P＜0.01)，CTX组相有抑制荷瘤小鼠IL-18生成的作用趋势（P＜0.01)。白莲Ⅰ号3个剂量IL-18含量均高于NS组、CTX组 (P<0.01) ，CTX组IL-18含量低于NS组，但两者无统计学差异(P>0.05 )。由此说明白莲Ⅰ号能激活与肿瘤免疫相关的细胞因子IL-18的活性，使荷瘤小鼠淋巴细胞对IL-18的生物活性的反应性提高，从而通过细胞因子调节机体的免疫功能。表2  各组小鼠外周血IL-18含量比较（略）
       4  讨论
       细胞因子（cytokine）由造血系统、免疫系统或炎症反应中的活化细胞产生，能调节细胞分化增殖和诱导细胞发挥功能，是高活性多功能的多肽、蛋白质和糖蛋白［2］。细胞因子可作为恶性肿瘤生长的直接调节剂，可以杀伤肿瘤细胞而不影响正常细胞，可以通过作用于肿瘤的血管和营养供应系统影响宿主/肿瘤关系，也可以激发宿主对肿瘤的免疫反应。
       IL-18作为近来发现的多功能细胞因子，是生物学活性最强、作用最持久的细胞因子［3］，具有诱生IFN-γ、 增强NK和CTL细胞活性、促进T细胞增殖、诱发Th1类细胞因子产生、促进免疫细胞表达FasL、增强Fas介导的细胞毒作用等多种生物学功能，在抗肿瘤、抗感染及免疫调节等方面有着积极的作用［4，5］。特别是其抗肿瘤作用，在肿瘤治疗和肿瘤基因治疗方面具有潜在的应用前景，已成为目前广泛研究的热点。大量的实验研究证实，IL－18的抗肿瘤作用及其作用机制， IL－18首先激活NK细胞，使其能够特异地杀伤肿瘤细胞，然后在NK细胞的调节下，CD8+和CD4+T细胞逐渐活化，CTL发挥杀伤作用，CD4+T细胞参与形成肿瘤特异性免疫记忆。另外，IL－18通过抑制肿瘤组织的血管生长从而抑制肿瘤的生长［6］。
       壮药白莲Ⅰ号方广西壮族地区民间常用的抗肿瘤验方，它依据肿瘤病机特点及调补的治疗原则进行组方。方中白花蛇舌草、半枝莲、白花丹、叶下珠在《中国壮药学》［7］中均列为解毒药。四药相配伍，可收清内热解癌毒之功。现代研究认为清热解毒药在体内和体外均有一定程度的直接或间接抗癌抑瘤作用。广莪术、三棱破血消积；黄花倒水莲、旱莲草、五指牛奶《中国壮药学》均谓其为调气补虚之良药；黄芪、党参，益气健脾补虚。诸药合用，既清热解毒，软坚散淤，又益气补虚；既可培补正气，又使邪有出处；既重视局部病位，又重视全身机能的调节。组方攻补兼施，寒温并用，调解补相结合，气血同治，构思严谨，切中肿瘤病机，颇为相宜。
       本实验研究表明，壮药白莲Ⅰ号方具有明显的抗肿瘤作用，在一定剂量范围内对荷瘤小鼠的抑瘤率大于30％。同时，白莲Ⅰ号方有促进荷瘤小鼠IL-18生成的作用趋势，由此说明白莲Ⅰ号能激活与肿瘤免疫相关的细胞因子IL-18的活性，使荷瘤小鼠淋巴细胞对IL-18的生物活性的反应性提高，从而通过细胞因子调节机体的免疫功能。另外，白莲Ⅰ号方改善小鼠的一般生存状况，提高其生存质量，有利于荷瘤机体的治疗，明显优于化疗药物。综上所述，壮药白莲Ⅰ号方是一个有效的抗肿瘤壮药复方,值得进一步研究开发。
       【参考文献】
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       ［3］宋希林, 徐忠法, 陈玖玲.IL-18的抗肿瘤作用［J］.肿瘤防治杂志,2001,8(2):187.
       
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       ［5］Lebel-Binay S , Berger A , Zinzindohoue F , et al. Interleukin-18 : biological properties and clinical implications［J］. U R Cytokine Netw , 2000 , 11(1) : 15.
       
       ［6］杨永杰,白细胞介素18与肿瘤［J］.现代免疫学，2005，25（3）:259.
       
       ［7］梁启成,钟 鸣.中国壮药学［M］.南宁：广西民族出版社，2005：1.