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       【摘要】 
       目的优选出牡丹皮的最佳产地加工方法。方法以丹皮酚为指标，用高效液相色谱（HPLC）色谱法测定不同产地加工方法样品中的含量，选用ODS 色谱柱，流动相为甲醇-水（45∶55），检测波长为274 nm，同时测定不同洗涤样品中灰分和酸不溶灰分的含量。结果确定最佳产地加工方法为：将牡丹皮药材水冲淋后去除木心，然后直接晒干或40℃烘干。结论该研究为牡丹皮的产地加工提供了依据，并为其质量控制提供了有效的方法。
       【关键词】  牡丹皮 产地加工 高效液相色谱 丹皮酚
       Study on the Processing Technologies of Cortex Moutan
       ZHOU Liyan , WANG Shumei，LIANG Shengwang, CUI Yongxia，FENG Suxiang
       1. Guangdong College of Pharmacology，Guangzhou，Guangdong 510006，China；
       2.Henan College of Traditional Chinese Medicine, Zhengzhou 450008，China
       Abstract：ObjectiveTo optimize the best method in the producing area of Cortex Moutan. MethodsThe contents of paeonol in Cortex Moutan collected by different methods were determined by HPLC, an ODS column was used with a mobile phase of methanol- H2O(45∶55) and  UV detector at the wavelength of 274nm. At the same time, the contents of ash and acid-insoluble ash in samples washed by different methods were tested. ResultsThe best processing technology was determined. We could wash the Cortex Moutan with water, abandon the core, and then dry them in the sun or in drying oven at the temperature of forty. ConclusionThis study provides a reference to the collection and process of Cortex Moutan, and an effective method for the quality control of Cortex Moutan.
       Key words：Cortex Moutan；  Processing technology；  HPLC；  Paeonol
       牡丹皮为毛茛科芍药属植物牡丹Paeonia suffruticosa Andr.的根皮。性微寒，味苦、辛。归心、肝、肾经。具有清热凉血、活血化淤之功效。目前，牡丹皮正作为一种传统中药被日益重视和广泛应用。自唐代以来，牡丹之盛，莫过于洛阳，以“洛阳牡丹甲天下”的美名流传于世，洛阳的牡丹皮产量较大，本文对洛阳牡丹皮的产地加工方法进行系统地研究，为洛阳牡丹皮的合理开发、利用提供依据，为其质量控制提供有效的方法。
       1  材料与试剂
       2010A高效液相色谱仪（日本岛津），PDAD检测器，Hypersil ODS 色谱柱(5 μm，4.6 mm×250 mm)；KQ3200DE型医用数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。
       甲醇（天津科密欧化学试剂开发中心，分析纯）；甲醇（天津四友生物医学技术有限公司，色谱纯）；水为娃哈哈纯净水；丹皮酚对照品（中国药品生物制品检定所，批号110708-200306）。
       2  牡丹皮的采收方法［1，2］
       牡丹皮的栽培方法通常有种子繁殖和分株繁殖两种，一般均在移栽后3～4年采收。每年的采收季节一般为春季和秋季，但目前多在秋分和寒露之间，地上枝叶变黄枯萎时采挖。
       选择晴天，将四周的土壤挖开，将挖出的根除去茎苗和泥土，用力碾转顶端使根皮一侧破裂，皮心略脱离，一手捻住不裂口的一侧，一手捏住木心，把木心顺破裂口往下边拉，边分离边剥出，除去木心后顺手把根条捻直，并撮合裂缝口，晒干，即为商品“牡丹皮”。
       3  产地加工方法的研究
       3.1  样品的采集 牡丹皮药材采自洛阳市土桥村，药材均为分株移植3年的牡丹皮，每份样品按照不同地点各采集3批。经河南中医学院生药教研室曹继华教授鉴定为毛茛科植物牡丹Paeonia suffruticosa Andr.的干燥根皮。
       3.2   各种加工品的制备
       3.2.1  不同洗涤样品的制备 
       挖取牡丹的根，分成3份，分别采用水淘洗、水冲淋及未洗涤3种方法，然后抽去木心，将根皮晒干，粉碎成粗粉，备用。
       3.2.2  不同干燥方法样品的制备 
       挖取牡丹的根，抽去木心，将根皮分成3份，分别采用直接晒干、40℃烘干与60℃烘干3种方法进行干燥，粉碎成粗粉，备用。
       3.2.3  不同部位样品的制备 
       挖取牡丹的根，用水迅速冲淋，晾至外表栓皮上无水分，刮取栓皮部，抽取木心，并按照木心的直径将其分为粗木心（直径为3～5 mm）、中木心（直径为1～3 mm）和细木心（直径为0.5～1 mm），将栓皮部、韧皮部及木心部（3种规格）分别晒干，粉碎成粗粉，备用。
       3.3   方法和结果
       3.3.1  色谱条件
       色谱柱：Hypersil ODS 色谱柱(5μm，4.6 mm×250 mm)；流动相：甲醇-水（45：55）；检测波长274 nm；柱温30℃；流速1.0 ml·min-1；进样量10 μl。
       3.3.2  对照品溶液的制备
       精密称取丹皮酚对照品适量，加甲醇溶解配制成23.7μg/ml的对照品溶液。
       3.3.3  供试品溶液的制备
       称取各份样品粗粉约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 ml，密塞，摇匀，称定重量，超声处理30 min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液1 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，用0.45 μm的滤膜滤过，即得各供试品溶液。
       3.3.4  线性关系考察 
       精密吸取对照品溶液各2，4，8，12，16，20 μl注入高效液相色谱仪，以对照品的量为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，Y＝5 318.622X－7 296.940，r＝0.999 9，表明丹皮酚含量在47.4～474.0 μg之间线性关系良好。
       3.3.5  精密度实验 
       精密吸取对照品溶液10μl ，按照上述色谱条件连续进样5次，依法测定，以丹皮酚峰面积计算，-X=1 255 127.4，RSD=0.42%，符合要求。
       3.3.6  重复性实验 
       取同一份样品粉末5份，按照供试品溶液制备方法制备，分别精密吸取各供试品溶液10μl，按照上述色谱条件连续进样5次，以丹皮酚峰面积计算，-X=1287 158.6，RSD=0.44%，符合要求。
       3.3.7  稳定性实验 
       精密吸取同一份供试品溶液10 μl，按照上述色谱条件在0，0.5，1，2，3，4 h进行测定，以丹皮酚峰面积计算，-X=1 284 990.8，RSD=0.72%，表明样品在4 h内基本稳定。
       3.3.8  加样回收率实验 
       取已知含量的牡丹皮生药粉末9份，每份0.25 g，分别精密称取，并分别精密加入高、中、低不同剂量丹皮酚对照品，按照供试品溶液的制备方法制备得到样品溶液，再照上述色谱条件进行丹皮酚的含量测定，计算加样回收率，结果见表1。表1  加样回收率实验结果（略）
       3.3.9  样品的测定
       分别精密吸取上述各供试品溶液（各3份）及对照品溶液各10μl，按照上述色谱条件进行测定，将所得丹皮酚峰面积带入回归方程计算，得到牡丹皮不同加工品中丹皮酚的含量。结果分别见表2～4。表2  不同洗涤样品中丹皮酚的含量（略）表3  不同干燥方法样品中丹皮酚的含量（略）表4  不同部位样品中丹皮酚的含量（略）
       3.4  不同洗涤丹皮样品中总灰分和酸不溶性灰分的测定
       3.4.1  测定方法
       分别取上述3种洗涤方法所得的牡丹皮样品约4 g，精密称定，置炽灼至恒重的坩埚中，称定重量，缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至550℃，使完全灰化并至恒重。根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量。另取以上所得灰分，在坩埚中加入稀盐酸约10 ml，盖上表面皿，水浴上加热10 min，表面皿用热水5 ml冲洗，洗液并入坩埚中，用无灰滤纸滤过，坩埚内的残渣用水洗于滤纸上，并洗涤至洗液不显氯化物反应为止。滤渣连同滤纸移至同一坩埚中，干燥，炽灼至恒重，根据残渣重量，计算供试品中酸不溶性灰分的含量。
       3.4.2  测定结果 
       结果见表5。表5  不同洗涤样品中总灰分和酸不溶性灰分测定结果（略）
       4  讨论
       由表2和表5可知，水淘洗丹皮样品与未洗涤样品比较，丹皮酚含量损失较多，水冲淋样品中丹皮酚含量损失不多，水淘洗和水冲淋样品与未洗涤样品比较，总灰分和酸不溶灰分均降低，《中国药典》2005年版Ⅰ部“牡丹皮”项下规定样品中总灰分不得多于5.0%，酸不溶灰分不得多于1.0%［3］，本实验中3种样品均符合规定，但未洗涤样品中的含量偏高，综合考虑，笔者建议采用水冲淋的方法洗涤药材。
       由表3中可知，不同干燥方法所得样品中丹皮酚的含量顺序为：晒干＞40℃烘干＞60℃烘干，由于丹皮酚的沸点约为50℃，因此60℃烘干样品中丹皮酚大量挥发损失较大，因此可采用晒干或40℃烘干来干燥样品，对于无条件进行烘干的可采用晒干的方法进行干燥，如果天气不好或样品急需干燥时可采用40℃烘干的方法来干燥样品。
       由表4可知，栓皮部与韧皮部比较，其丹皮酚的含量约高出1倍，不同粗细的木心部中含量差别不大，接近韧皮部的1/2，笔者通过测定重量，发现栓皮部、韧皮部、木心部分别占总重量的8.14%，81.42%和10.44%，因此考虑可以不去皮而只去心，既能简化产地加工的繁琐程序又能提高样品中丹皮酚的含量。
       【参考文献】
         　　［1］方成武. 安徽道地药材牡丹皮的采收及产地加工方法考察［J］.中药材，2000，23（2）：82.
       
       ［2］董维卿，周厚文.不同加工方法对牡丹皮饮片质量的影响［J］.基层中药杂志，1999，13（4）：46.
       
       ［3］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：119.