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       【摘要】 
       目的测定半夏块茎不同粒径总生物碱的含量，为半夏质量标准控制提供理论依据。方法采用氯仿提取，依据酸性染料比色法的原理，在417 nm波长下测定，并作方差分析。结果获得良好的线性关系(r=0.998 9)和回收率(100.1%)，RSD为2.3%。不同粒径总生物碱含量的差异显著（F=79.23，P<0.01）。结论测定方法简单快速；不同粒径总生物碱含量和产量以直径为2 cm的块茎最高，在半夏收购过程中应将块茎粒径控制在2.0 cm左右为宜。
       【关键词】  半夏 块茎 总生物碱
       Studies on the Total Alkaloid Content from Pinellia ternate Tuber with Different Particle Diameters
       ZENG Jianhong,   PENG Zhengsong,CHEN Xu，WANG Xiaohua,SHU Liqing
       1.School of Pharmacology, Guilin Medical College, Guilin 541000，China；
       2. Life Scientific Institute,West China Normal University, Nanchong 637000，China；
       3. Yiling Disctrict Personnel Bureau， Yichang, Hubei 443100，China
       Abstract：ObjectiveTo determine the content of total alkaloids from Pinellia ternate  tuber with different particle diameters for quality control. MethodsThe alkaloid was extracted by chlorolform from Pinellia ternate and tested at 417nm with the spectroscopy by acid dye. The result was analyzed in One-Way ANOVA. ResultsThe calibration curve of alkaloid was linear(r=0.998 9).The recovery rate was perfect(100.1%).The alkaloid content of different particle diameter had very significant difference(F=79.23，P<0.01).ConclusionThis method is simple and quick. The alkaloid content and output is the highest when the Pinellia ternate tuber is 2cm which is considered as the best purchase standard.
       Key words：Pinellia ternate(Thunb.)Breit；  Different particle diameter；  Alkaloids
       中药半夏为天南星科多年生草本植物半夏Pinellia ternate (Thunb.) Breit 的干燥块茎，在我国大部分地区及朝鲜半岛和日本均有分布。半夏入药首载于《神农本草经》，《中国药典》2005年版收载为唯一的半夏类药材植物。半夏块茎主要含有生物碱、β-谷甾醇、多糖、半夏蛋白、氨基酸、挥发油及无机元素等多种化学成分［1,2］，具有燥湿化痰，降逆止呕，消痞散结之功效。目前市售镇咳类中药复方制剂中多含有半夏，而生物碱在众多的化学成分中具有明显的生物活性和生理功能，是中药半夏中主要有效成分之一。国内外对半夏生物碱含量的测定已做了大量工作［3～8］，但对半夏块茎不同粒径生物碱含量的研究尚未见报道，《中国药典》2005年版中也未见半夏块茎的粒径指标。本研究采用酸性染料比色法测定半夏块茎不同粒径生物碱的含量，为半夏质量标准控制提供依据。
       1  材料与仪器
       1.1  样品
       材料来自西华师范大学生命科学学院半夏基地，经本教研室鉴定为半夏的干燥块茎。材料均系同一植株的块茎和珠芽通过无性繁殖生长，无病虫害。材料共取5个批次，按块茎单粒直径分为5级，分别用Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ，Ⅴ表示。块茎采收后去皮，洗净，105℃烘箱中烘4h后置于60℃烘箱中烘干至恒重，游标卡尺量取直径，粉碎过60目筛置干燥器备用。
       1.2  试剂
       对照品盐酸麻黄碱(中国药品生物制品检定所，批号714- 9903) ，氨水、二氯甲烷、柠檬酸钠缓冲液(pH= 6. 0) ，0.1%溴麝香草酚蓝溶液等均为市售分析纯。
       1.3  仪器
       GT3C916紫外可见分光光度计：(澳大利亚GBC科学仪器有限公司)，旋转式蒸发仪(上海申科电子有限公司)。
       2  方法和结果
       2.1  对照品溶液的制备
       精密称取105℃干燥至恒重的盐酸麻黄碱对照品16. 4 mg，置 250 ml容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀制得含盐酸麻黄碱浓度为0.065 6 mg/ ml对照品溶液。
       2.2  样品供试液的制备
       精密称取半夏粉末，加入12%氨水将材料搅拌至湿润，加入样品量18倍的氯仿浸泡25 h，置70℃水浴锅中回流提取5 h，过滤，残渣以10 ml氯仿分3次洗涤，合并提取液，移置50 ml容量瓶中，用氯仿稀释至刻度，摇匀，精确吸取提取液2 ml置旋转式蒸发仪浓缩至干，加入pH 6. 0缓冲液5 ml，精密加入氯仿10 ml，加0.1 %溴麝香草酚蓝溶液1 ml，充分振荡，移置60 ml分液漏斗，静置30 min，分取氯仿层，作为样品供试液。
       2. 3  实验条件的选择
       2.3.1  最大吸收光谱波长的选择
       精密称取样品，按“2. 2”项方法制备样品供试液，并将对照品溶液和样品供试液在380～ 600 nm波长范围内进行光谱扫描，结果两者在417 nm波长处均有最大吸收值，两者的吸收峰完全相同，吸收光谱一致，故选定417 nm作为测定波长。
       2.3.2  稳定性考察
       精密称取样品，按“2. 2”项制备样品供试液和空白对照液，在波长417 nm处进行测定，并在室温下每隔20 min测定1次，实验结果表明供试样品液在80 min内显色稳定，RSD= 0.3%(n= 5)。本实验只考察了80 min内供试液的显色稳定性，因80 min 内完全可以完成测定。
       2.3.3  标准曲线的绘制
       精密吸取对照品溶液0.1，0. 3，0. 5，0. 7，0. 9 ml，分别加蒸馏水至1. 0 ml，加入5 ml pH6. 0柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，精密加入氯10 ml和0. 1 %溴麝香草酚蓝溶液1 ml充分振荡，移置60 ml分液漏斗，静置30 min，分取氯仿层，制得对照品供试液。另取1 ml水，以同样方法操作，作空白对照液，在417 nm波长处测定吸光值。
       
       以浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，求得回归方程为：Y=0. 157  6X+ 0. 024 5,r= 0.998 9(n= 5)，表明盐酸麻黄碱在0.39～ 3. 47 μg 范围内与吸收度呈良好的线性关系，符合Beer:定律。
       2.4  精密度与回收率考察
       2.4.1  精密度实验精密吸取0. 7 ml对照品溶液，按“2. 2”项制备对照品供试液和空白对照液，在417 nm处连续测定吸收度5次，RSD= 0.06%，表明仪器有较好的精密度。
       2.4.2  回收率实验取半夏块茎粉末0. 657 g左右，精密称定5份，加入盐酸麻黄碱适量，按“2.2”项制备供试液，在417 nm波长处测定其吸收度，平均回收率为100.1%，RSD为2. 3%。
       2.5  样品含量的测定 
       精密称取不同粒径半夏样品，按“2. 2”项方法制备样品供试液及空白对照液，在417 nm波长处分别测定其吸收度和计算含量，并用方差分析。结果见表1和图1。
       从表1中可知，不同粒径总生物碱含量的差异较大，经方差分析达到极显著水平（F=79.23>F0.01，其显著性概率Sig.=0.000<0.01）。不同粒径总生物碱含量的高低依次为：块茎直径为2，1.5，2.5，3，1 cm。对单粒总生物碱产量进行方差分析表明，单粒平均总生物碱产量达到极显著水平（F=30.41>F0.01，其显著性概率Sig.=0.000<0.01）。不同粒径总生物碱产量的高低依次为：2，2.5，3，1.5，1 cm。从生物碱含量和产量的因素来考虑，块茎粒径在2 cm左右时，其生物碱含量和产量最高。表1  半夏块茎不同粒径总生物碱含量和产量（略）
       3  讨论
       本实验采用溴麝香草酚蓝试液为显色剂测定总生物碱含量，是因为酸性染料在一定pH介质中生物碱类与氢离子成盐，一些酸性染料在此条件下可与上述盐离子定量结合成有色络合物而被某些有机溶剂定量地提取的原理。该显色剂灵敏度高，干扰较小。
       用盐酸麻黄碱作对照品，计算时无法考虑其它生物碱分子量大小，都是以盐酸麻黄碱为标准，较重量法得到的数据有所差异。
       《中国药典》对半夏块茎粒径没有具体的要求，在商品半夏收购过程常以直径为1～1.5 cm作为商品收购标准。从本实验来看，来自同一基因型的半夏块茎，直径在2.0 cm小块茎的总生物碱含量最高。究其原因，与半夏块茎的生理活动和生理年龄有关，因为在动态的代谢反应过程中，生物碱不是惰性的最终产物，而是相当积极的参加者，在植物早期生长阶段，生物碱的代谢作用旺盛。此外，直径在2.0 cm小块茎主要是一些以珠芽为种质发育而来的，大多是新生组织，生命力强，出苗后，生理活动势旺。而大块茎(直径大于等2.5 cm)主要是由小块茎发育而来的，生理年龄较长，组织已趋于老化，生理活动势弱［9］。因而从生物碱含量和产量的因素来考虑，在半夏收购过程中应将块茎粒径控制在2.0 cm左右为宜。
       【参考文献】
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