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       【摘要】 
       目的测定不同产地鱼腥草多糖的含量。方法用苯酚－硫酸法测定鱼腥草中多糖的含量。结果不同产地的鱼腥草中多糖含量为：15.73%～ 20.29%。结论不同产地鱼腥草多糖的含量有一定的差异。
       【关键词】  鱼腥草 多糖 含量测定 不同产地
       Determination of Polysaccharide in Houttuynia cordata from Various Cultivation Locations
       MENG Jiang，   ZHOU Yisheng ，LIAO Huawei
       (Guangdong Pharmaceutical University,Guangdong, Guangzhou ,510000, China)
       Abstract：ObjectiveTo determine the content of polysaccharides in Houttuynia cordata from various cultivation locations. MethodsThe contents of polysaccharide were measured by phenol-H2SO4 colorimetry. ResultsThe contents of polysaccharides in Houttuynia cordata from various cultivation locations varied from 15.73%～ 20.29%. ConclusionThere is great difference in polysaccharide content in Houttuynia cordata from various cultivation locations.
       Key words：Houttuynia cordata;   Polysaccharide;   Determination;   Various Cultivation Locations
       鲜鱼腥草为三白草科Saururaceae蕺菜属植物蕺菜Houttuynia cordata Thunb.的新鲜全草［1］，具有清热解毒、消肿排脓、利尿通淋的功效。主要用于肺脓疡、痰热咳嗽、热痢热淋、痈疮肿毒［2］等证。本课题组曾对鲜鱼腥草GC-MS、HPLC-MS指纹图谱、黄酮类、酚类化合物的化学研究方面进行报道［3～6］。药理研究发现鱼腥草水溶性多糖对羟自由基和超氧自由基有较明显的清除作用［7］。本课题对不同产地鱼腥草进行多糖含量测定，为鱼腥草资源的开发提供理论依据。
       1  器材
       1.1  仪器
       UV-7501型紫外可见光光度计(无锡科达仪器厂)，电热恒温水浴锅(上海仪表集团供销公司)，医用离心机（LD5-10型，北京医用离心机厂），电子天平（BS 210S，made by startorius）
       1.2  试药葡萄糖标准品Sigma公司产品；苯酚、硫酸、丙酮、乙醚、三氯乙酸、氢氧化钠试剂均为分析纯，医用乙醇（广州市新升华玻有限公司），苯酚试液参照文献［8］配制。
       鱼腥草购于广州清平市场，经广东药学院中药学院生药教研室陈幼竹博士鉴定为三白草科蕺菜属植物Houttuynia cordata Thunb.。
       2  方法与结果
       2.1  鱼腥草多糖的提取与精制 
       取鱼腥草干品200 g，以95%乙醇回流脱脂3次，药渣置通风处晾干，加水10倍量、8倍量、8倍量，于90～100℃依次提取3，2，1 h，过滤，合并滤液，浓缩至约200 ml，用95％乙醇调至含醇量为80%，静置过夜，离心，沉淀依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，得粗多糖。取粗多糖加水溶解至100 ml，加入等体积30%三氯乙酸溶液脱蛋白，4℃静置，离心，上清液用0.01 mol/L的氢氧化钠调pH＝7，溶液减压浓缩，将浓缩液装入透析袋置水中透析，透析液减压浓缩至100 ml，加入95%乙醇调含醇量为80%，静置，离心，沉淀用无水乙醇、丙酮、无水乙醚依次洗涤，真空干燥，得除蛋白精制鱼腥草多糖。
       2.2  标准品溶液与供试品溶液的制备
       2.2.1  标准品溶液的制备精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖0.096 4 g，加水溶解并定容至100 ml，再取1 ml，定容至10 ml的容量瓶中，即制得浓度为0.096 4 mg/ml的葡萄糖对照品贮备液。
       2.2.2  供试品溶液的制备取60℃干燥1 h的鱼腥草约10g，精密称定，用95%乙醇100，80，80 ml依次回流脱脂3，2，2 h，药渣用95%乙醇洗涤数次，药渣置通风处自然晾干后置烧瓶中，加水100 ml，精密称定，水浴（90～100℃）温提4 h。再精密称定，补足水至原重，振摇，趁热纱布过滤，离心除去沉淀，得上清液。精密量取上清液5 ml，放入透析袋中流水透析24 h，透析内液定容至25 ml，再精密量取5 ml，定容至50 ml，得供试液，冰箱中放置备用。
       2.3  标准曲线的制备 
       精密量葡萄糖标准品溶液0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7 ml，分别置10 ml具塞试管中，加蒸馏水补充至1.0 ml，摇匀，加5%苯酚溶液1 ml，浓硫酸5 ml，室温放置40 min。另取1 ml蒸馏水，加同量苯酚和浓硫酸，同法操作，作为空白对照。置7501型分光光度计中，于490 nm测定吸收度，以吸收度（Y）对葡萄糖含量（X）进行回归，得回归方程：Y = 9.107 3 X + 0.010 2，相关系数r2 =0.999 8。结果表明葡萄糖在0.019 3～0.096 4 mg/ml范围内呈良好的线性关系。
       2.4  换算因素的测定  
       精密称取60℃干燥至恒重的鱼腥草多糖101.2 mg，置100 ml容量瓶中，加入少量蒸馏水溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密量取此液1 ml，照标准曲线制备项下的方法测定吸收度，从回归方程中求出多糖供试液中葡萄糖的浓度。按下式计算换算因素：F = W/(C ×D)。F为换算因素；W为多糖重量（mg）；C为多糖稀释液中葡萄糖的浓度（mg/ml）；D为稀释因素。
       2.5   精密度实验
       取供试液，按上述方法操作，连续测定5次，RSD=2.61%。结果表明精密度良好。
       2.6  稳定性实验 
       取供试液，按上述方法操作，每隔30 min测定一次吸收度，连续5 h考察其稳定性，结果表明供试液在5 h显色稳定，RSD=2.61%。
       2.7  加样回收率实验精密称取鱼腥草样品20 g，加入适量葡萄糖对照品，置同一烧杯中，按供试液制备与含量测定法操作。测定结果葡萄糖的平均回收率为100.7%，RSD=3.78%(n=6)。
       2.8  样品测定方法取各供试品溶液，按“2.3”项下方法操作，测定吸收值，从回归方程中求出供试液中葡萄糖的含量，按下式计算样品中多糖含量：多糖含量（%）＝C×D×F ×100/W。结果见表1。表1  不同产地多糖含量测定（略）
       3  讨论
       从湖北、广东、广西和湖南产多糖含量测定结果来看，不同产地鱼腥草多糖含量有一定的差异，其中湖北的鱼腥草多糖含量最高，广东和湖南产的鱼腥草多糖含量相近。
       在鱼腥草多糖的含量测定中，因较难得到相应多糖对照品，采用葡萄糖代替对照品，测定样品中多糖的相对含量。文中以比色法测定样品中的单糖，通过单糖和多糖的换算因子计算药材中多糖。
       鱼腥草目前主要是开发挥发油类成分的制剂如鱼腥草注射液等相关产品，而对于水溶性多糖以废弃物处理，本课题对鱼腥草不同产地多糖的含量测定，对于鱼腥草资源的合理充分利用具有重要的意义。
       【参考文献】
         　　［1］国家药典委员会．中国药典［S］.北京：化学工业出版社，2005：155．
       
       ［2］李爽，于庆海，金佩珂．鱼腥草的有效成分、药理作用及临床应用的研究进展［J］.沈阳药科大学学报，1997，14(2)：144．
       
       ［3］Meng J, Dong XP, Zhao ZZ, et al. Establishment of GC-MS fingerprint of fresh Houttuynia cordata［J］.Chem Pharm Bull, 2005, 53(11): 1484.
       
       ［4］Meng J, Dong XP, Zhao ZZ, et al. Establishment of HPLC-DAD-MS fingerprint of fresh Houttuynia cordata［J］.Chem Pharm Bull, 2005, 53(12): 1604.
       
       ［5］孟 江，董小萍，赵中振，等．鲜鱼腥草的黄酮类化合物研究［J］.中国中药杂志，2006，31（15）：6．
       
       ［6］孟 江，董小萍，赵中振，等．鲜鱼腥草的酚类化合物研究［J］.中国中药杂志，2007，33（9）：37．
       
       ［7］张建新，微波提取鱼腥草水溶性多糖清除自由基特性的研究［J］.食品科技，2006，8：115
       
       ［8］余世春，徐金龙，汪海孙，等.苯酚－硫酸法测定小柴胡汤口服液多糖的含量［J］.中成药，1993，15：12.