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       【摘要】 
       目的建立沙枣中槲皮素（Quercetin）和异鼠李素（Isorhamnetin）的高效液相色谱测定方法。方法采用ODS柱，甲醇0.1%磷酸溶液（58∶42），检测波长370 nm。结果槲皮素在0.042～0.84 μg范围内线性关系良好，异鼠李素在0.041 2～0.824 μg范围内线性关系良好；该法回收率槲皮素为98.98％，异鼠李素为99.27％；RSD槲皮素为1.56％，异鼠李素为0.86％（n=6）结论该方法为沙枣的含量测定提供了一种快速和准确的方法，为蒙药植物资源的进一步开发提供了可靠的依据。
       【关键词】  沙枣 槲皮素 异鼠李素 含量测定 高效液相色谱法
       Determination of  Quercetin and Isorhamnetin in  Fructus Elaeagni.  by HPLC
       DU Ruifang, WANG Yumei, LIU Weidong, MA Li
       ( Inner Mongolian Autonamy Institute of Medicine and Industry, Huhhot 010010, China)
       Abstract:ObjectiveTo establish an HPLC method for determination of quercetin and isorhamnetin in Fructus Elaeagni.MethodsThe separation was performed on Kromasil C18 Column(250 mm×4.6mm, 5μm) and the mobile phase was methanol-0.1%phosphoric acid(58∶42). Quercetin and isorhamnetin was detected at 370nm. ResultsThe standard curve was linear within the concentration range of 0.042～0.84 μg for quercetin and 0.0412～0.84 μg for isorhamnetin , respectively. The recovery was 98.98％ for quercetin and 99.27％ for isorhamnetin, respectively. ConclusionThis method is rapid and accurate for determination of quercetin and isorhamnetin. It could be used for further exploitation of Mongolia herbal resources.
       Key words:Fructus Elaeagni；  Quercetin；  Isorhamnetin；  Assay；  HPLC
       
       沙枣，为胡颓子科植物沙枣Elaeagnus angustifolia L.的干燥成熟果实，具有补虚，安神，健脾，止泻等功效，用于治疗身体虚弱，神志不清，消化不良，腹泻［1］。在西部地区，沙枣被称为“百树宝”，果实营养丰富，含糖量较高，干品为62%～70%，主要为果糖，蛋白质、维生素C也比较丰富。另外，果实中还含有鞣质、黄酮类和黏液质［2］。人们对其枝、叶及花进行研究，发现各部分都含有黄酮类化合物［3，4］，果实中所含黄酮类化合物的测定未见报道。本研究首次采用HPLC法测定沙枣果实中槲皮素和异鼠李素含量，操作简便，测定灵敏度、准确度均较好，对更好地开发沙枣药用植物资源具有一定的意义。
       1  器材
       1.1  仪器
       Agilent1100液相色谱仪，Agilent1100紫外检测器，AS3120超声波清洗机，AG135电子分析天平。
       1.2  试药
       槲皮素对照品和异鼠李素对照品均由中国药品生物制品检定所购入；水为双蒸水，甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。
       1.3  药材沙枣采自内蒙古巴彦淖尔、乌海，由内蒙古大学生命科学学院赵立清博士鉴定为沙枣Elaeagnus angustifolia L.的果实。
       2  方法和结果
       2.1  色谱条件
       Kromasil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm，100A）；流动相：甲醇 0.1％磷酸溶液（58∶42）；检测波长370 nm；体积流量：1.0 ml/min；柱温：室温；进样量：20 μl。在此条件下供试品中槲皮素成分、异鼠李素成分能与其它成分达到较好分离。见图1。
       2.2  对照品溶液制备精密称取槲皮素对照品和异鼠李素对照品适量，加80％甲醇分别制成每毫升含槲皮素和异鼠李素200 μg的溶液。精密量取上述对照品溶液各0.5 ml，置10 ml量瓶中，加80％甲醇制成每毫升含槲皮素和异鼠李素10 μg的混合对照品溶液。
       2.3  供试品溶液制备取本品粗粉约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加80%甲醇50 ml，称定重量，加热回流30 min，放冷，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25 ml，置具塞锥形瓶中，加25%盐酸溶液10 ml，摇匀，置水浴加热回流30 min，立即冷却，转移至50 ml量瓶中，用适量80%甲醇洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加80%甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
       2.4  标准曲线制备取槲皮素对照品和异鼠李素对照品各约10 mg，精密称定，分别置不同的50 ml量瓶中，用80％甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。各精密量取10.0 ml置25 ml量瓶中，加80％甲醇至刻度，摇匀，即得对照品混合溶液。精密量取对照品混合溶液0.25，0.5，1.0，2.0，5.0 ml置于10 ml量瓶中，80％甲醇稀释至刻度，摇匀，分别进样20 μl测定峰面积。以对照品峰面积Y为纵坐标，相应对照品的量X(μg)为横坐标得槲皮素回归方程为：Y=1E+07X－79 055，r=0.999 9，线性范围0.042～0.84 μg；异鼠李素回归方程为Y=7E+06X-49 467，r=0.999 9，线性范围0.041 2～0.824 μg。
       2.5  精密度实验对照品混合溶液，重复进样5次，测定峰面积。结果槲皮素峰面积RSD为2.06％，异鼠李素峰面积RSD为2.50％。
       2.6  稳定性实验取同一供试品溶液，间隔一定时间进样，依法测定峰面积。结果异鼠李素峰面积RSD为2.61%（n=5）；槲皮素峰面积RSD为2.20%（n=5）。供试品溶液在8 h内稳定。
       2.7  重复性实验取同一批药材5份，按供试品溶液制备方法，分别测定槲皮素、异鼠李素峰面积。结果槲皮素峰面积RSD为2.36%，异鼠李素峰面积RSD为2.95%。
       2.8  加样回收实验精密称取已知含量的样品0.5 g，分别精密加入一定量的槲皮素及异鼠李素对照品，按“供试品溶液制备”方法进行测定并计算回收率，结果槲皮素平均回收率为98.98％，RSD为1.56%(n=6)，异鼠李素平均回收率为99.27％，RSD为0.86%(n=6)。
       2.9  样品测定取不同批次的沙枣药材粉末，按“2.3”项下方法处理，进样测定。结果见表1。表1  沙枣中槲皮素和异鼠李素测定（略）
       3  讨论
       我们针对异鼠李素、槲皮素进行紫外光谱扫描，发现异鼠李素在（370±2）nm 处有最大吸收；槲皮素在（372±2）nm 处有最大吸收。因此将 370 nm作为检测波长，在同一色谱条件下，异鼠李素和槲皮素分离较好。
       提取药材时，以80％甲醇为提取溶媒，分别尝试超声提取60 min，回流提取60 min，从色谱图来看，两种提取方法测定所得供试液的色谱峰基本一致，但测定结果回流提取异鼠李素含量明显大于超声提取。同时还考察了超声提取时间，加酸水解时间，结果以30 min提取，30 min水解为最佳提取条件。
       在上述波长条件下，由于提取过程中盐酸的加入，以一定比例的磷酸溶液作为流动相，结果以甲醇0.1%磷酸溶液（58∶42）分离较好。
       沙枣作为蒙古族习用药材，在本实验中建立了含量测定的方法，作为分离测定研究尚属首次。从实验结果可以看出，不同批次的药材两种黄酮类成分的含量高低有一定的相关性。因此，本实验的方法可以作为今后质量控制及其他方面研究的基础，以便更好地开发利用这一蒙药资源。
       【参考文献】
         　　［1］朱亚民.内蒙古植物药志［M］.呼和浩特：内蒙古人民出版社,1989：227.
       
       ［2］黄俊华,买买提江,杨昌友,等.沙枣研究现状与展望［J］.中国野生植物资源,2005,24（3）:26.
       
       ［3］石玉平,王永宁,郭 珍.沙枣花中黄酮类化合物的提取［J］.南京林业大学学报·自然科学版,2005,29（2）:106.
       
       ［4］阎 娥,王永宁,张 弢.沙枣枝中总黄酮提取条件的研究［J］.中国中医药信息杂志,2005,12（11）:42.