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       【摘要】 
       目的建立欧洲葡萄中齐墩果酸的薄层色谱鉴别方法和含量测定方法。并测定不同产地的欧洲葡萄中齐墩果酸的含量。方法采用薄层色谱法（TLC）鉴别，并采用高效液相色谱（HPLC）法测定其含量。结果测得欧洲葡萄中齐墩果酸含量为0.36%以上,平均回收率为98.33% ,相对标准偏差RSD为1.59%。结论该方法操作简便,结论可靠,可用于欧洲葡萄的质量控制。
       【关键词】  欧洲葡萄 齐墩果酸 薄层色谱 高效液相色谱
       Studies on the Quality Standard of Vitis vinifera L.
       LI Zhanjun, BU Ren, ZHANG Jinhua, XUE Peifeng
       Department of Pharmaceutical Science, Inner Mongolian Medical College, Hohhot, 010059,China
       Abstract：ObjectiveTo establish a TLC method for identification and an HPLC method for content determination of oleanolic acid from Vitis vinifera L.MethodsTLC was used to identify and HPLC was employed to determine the content. ResultsContent of oleanolic acid in Vitis vinifera L. was above 0.36%, the average recovery was 98.33% with RSD 1.59% (n=5). ConclusionThe method is simple, convenient and accurate and can be used for the quality control of Vitis vinifera L.
       Key words：Vitis vinifera L；   Oleanolic acid；   TLC；  HPLC
       “欧洲葡萄”名称源于其植物名，蒙药名“乌珠木”［1］，为欧洲葡萄Vitis vinifera L.的干燥果实。欧洲葡萄以蒙药“贡布如木”载于《认药白晶鉴》，《无误蒙药鉴》称其“茎长，状如铁线莲，缠绕，叶圆且大，花红色很小，故难碰见，果实红紫色，果皮极薄，每串果实近百粒……大小如黄豆，黄色，无核者为佳”。《中华本草·蒙药卷》以“葡萄干”（蒙药名“乌珠木”）收载本品［1］。《内蒙古植物药志》《内蒙古植物志》亦收载本品［2～3］。据《中华本草·蒙药卷》记载，本品可清肺热，止咳平喘，滋补强身。主治肺热咳嗽，痰盛气喘，肺水肿，疹热，湿热烦渴［1］。欧洲葡萄广泛运用于蒙医临床和生产，但目前对欧洲葡萄尚无完善的质量标准。
        欧洲葡萄果实中含有葡萄糖、果糖，少量蔗糖、木糖，酒石酸、草酸、枸橼酸、苹果酸，各种花色素的单葡萄糖苷和双葡萄糖苷，亦含蛋白质、钙、磷、铁、锰、胡萝卜素、硫胺素、核黄色、尼克酸、维生素C。葡萄皮中含矢车菊素、芍药花素、飞燕草素。种子含脂肪油。又含焦性儿茶酚、没食子儿茶酚、没食子儿茶精、没石子酸盐等。尚含亮氨酸、酪氨酸。另含矢车菊酚低聚物［1］。此外，含白藜芦醇、齐墩果酸、原花青素［4］。齐墩果酸做为欧洲葡萄中的生物活性成分之一，其含量高低与欧洲葡萄的功效具有直接的关系，故以齐墩果酸为对照品，分别建立欧洲葡萄的薄层色谱鉴别方法和高效液相含量测定方法。
       1  器材
       1.1  仪器
       大连依利特公司提供依利特高效液相色谱仪（P230高压恒流泵，UV230+紫外-可见检测器，EC2000色谱数据处理系统）；北京慧易德公司提供kromasil色谱（kromasil100-5C-18, 5 μm, 250 mm×4.6 mm）；
       1.2  试剂试药
       齐墩果酸对照品购自中国药品生物制品检定所（批号110709-200304）;流动相所用甲醇为Fisher公司提供的色谱纯试剂;水为市售娃哈哈纯净水;硅胶G（青岛海洋化工公司）；其他试剂试药均为分析纯。
       1.3   欧洲葡萄药材
       于200608～10分别采摘于呼和浩特土左旗和托克托县，部分采购于呼市天力药材公司，经内蒙古医学院药学院生药学教研室庞究生教授鉴定，均为蒙医习用欧洲葡萄正品。
       2  方法和结果
       2.1  薄层色谱鉴别取本品粉末约1 g，精密称定，置具塞三角瓶中，加甲醇10 ml,密塞，静置30 min，超声提取15 min，滤过，用20 ml甲醇分次洗涤容器和残渣，水浴挥干溶剂，残渣用3 ml甲醇溶解，摇匀，作为供试品溶液。另取齐墩果酸对照品适量，加醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述供试品溶液、对照品溶液各5～10 μl，分别点于同一0.5%羧甲基纤维素钠水溶液制成的硅胶G薄层板上，以环己烷丙酮醋酸乙酯(5∶2∶1)为展开剂，预饱和30 min，展开，取出，晾干，置日光或紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点。见图1。
       2.2  含量测定
       2.2.1  色谱条件色谱柱为kromasil色谱柱（ kromasil100-5C-18, 5 μm, 250 mm×4.6 mm）；柱温20℃。甲醇-水-磷酸（94∶6∶0.1），流速1 ml/min，检测波长为220 nm。
       2.2.2  对照品溶液的配制
       精密称取28.0 mg齐墩果酸标准品，置10 ml容量瓶中，加甲醇溶解，稀释至刻度，摇匀，作为储备液。分别精密吸取上述储备液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 ml置10 ml容量瓶，加甲醇至刻度，摇匀，制成不同浓度的对照品溶液。
       2.2.3  供试品溶液的配制
       称取干燥的欧洲葡萄粉末约1 g，精密称定，置具塞三角瓶中，加甲醇10 ml,密塞，静置30 min，超声提取15 min，滤过，用20 ml甲醇分次洗涤容器和残渣，水浴挥干溶剂，用甲醇转溶于10 ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得。
       2.2.4  线性关系的考察
       分别精密量取上述对照品溶液各20 μl进样,以色谱峰面积(Y)对浓度(X)进行回归，齐墩果酸的线性回归方程为Y =2 465.6X +51.159, r =0.999 7，线性范围为0.140～0.700 mg/ml。
       2.2.5  精密度实验
       取同一份本品供试品溶液，连续进样5次，20 μl/次，测得齐墩果酸峰面积RSD为0.34% ，表明仪器进样精密度良好。
       2.2.6  稳定性实验
        
       取一份本品供试样品溶液，分别在0, 3, 6, 12, 24 h进样20 μl， 测定齐墩果酸的峰面积RSD为0.50% ,表明样品溶液在24 h内稳定。
       2.2.7  重复性实验
       取同一批欧洲葡萄药材5份，按供试品溶液方法制备，分别进样20 μl，测定齐墩果酸的含量RSD为1.73% ，表明该方法的重复性较好。
       2.2.8  加样回收率实验
       取同一供试品5份，分别加入齐墩果酸对照品，按供试品溶液制备方法制备，进样20 μl，计算得回收率分别为98.33% ，RSD1.59%。结果见表1。表1  加样回收率测定结果（略）
       2.2.9  样品含量测定
        
       按供试品制备方法制成样品溶液，每次进样20μl,测定峰面积,分别测定了样品5批，由线性方程计算得齐墩果酸的含量（见表2）,对照品及供试品色谱图见图2。表2  样品含量测定结果（略）
       3   讨论
       3.1  流动相pH值选择
       本实验考察了不同浓度的冰醋酸和磷酸，最终确定以甲醇-水-磷酸（94∶6∶0.1）的峰形最好，且无干扰峰。
       3.2  方法学考察
       本实验考察了不同种类和不同浓度的溶媒，不同溶媒量，不同的提取时间；对超声提取与加热回流两种方法也作了比较。最后确定以10 ml甲醇为溶媒，静置30 min后超声15 min提取效率最高。
       齐墩果酸是中蒙药中一种重要的药效成分。 欧洲葡萄为常用蒙药之一，以齐墩果酸为对照品的薄层色谱法的建立，为欧洲葡萄的定性鉴别提供了一种快速有效的方法。采用HPLC法测定欧洲葡萄中齐墩果酸的含量，方法稳定、快速、重现性好、杂质干扰小，适合欧洲葡萄中齐墩果酸的含量测定，可作为欧洲葡萄的一种质量控制手段。
       【参考文献】
         　　［1］国家中医药管理局，中华本草编委会.中华本草·蒙药卷［M］.上海：上海科学技术出版社，2004：369.
       
       ［2］朱亚民. 内蒙古植物药志，第2卷［M］.呼和浩特:内蒙古人民出版社，1993：191.
       
       ［3］内蒙古植物志编辑委员会.内蒙古植物志，第2版，第3卷［M］.呼和浩特：内蒙古人民出版社，1989：494.
       
       ［4］王劲松.葡萄与葡萄酒中白藜芦醇的含量及其影响因素［J］.宁夏农林科技,2003,6:81.