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       【摘要】 
       目的建立锡类缓释贴膜中靛蓝的含量测定方法。方法采用Diamonsil C18柱；流动相为甲醇 -0.2 %醋酸(68∶32)；检测波长285 nm；结果靛蓝的线性范围为1.1～5.5 μg，r=0.999 9；平均回收率为97.0 %，RSD=1.01 %。结论该含量测定方法准确、稳定，可用于锡类缓释贴膜的质量控制。
       【关键词】  高效液相色谱法 锡类 口腔缓释贴膜 靛蓝
       Determination of Indigotin in Xilei Oral Sustained-release Mucoadhesive Films
       WANG Xiaoping，HE Xiaohui，JIN Huoxing
       (1.Jiangxi College of Chinese Medicine，Fuzhou 344000，China；2.The People"s Hospital of Fengcheng City，Fengcheng 331100，China）
       Abstract：ObjectiveTo establish a method for the determination of indigotin  in Xilei oral sustained-release mucoadhesive films. MethodsThe C18 column was used.The mobile phase was composed of methanol -0.2 %acetic acid solution(68∶32).The detection wavelength was 285 nm. ResultsThe calibration curve of indigotin was linear in the range of 1.1～5.5μg（r=0.9999）with average recovery 97.0% (RSD=1.01 %).ConclusionThe determination method is accurate，stable and can be used to control the quality of Xilei Oral Sustained-release Mucoadhesive Films.      
       Key words：HPLC；  Xilei；  Oral Sustained-release Mucoadhesive Films；    Indigotin
       锡类缓释贴膜是在传统古方“锡类散”的基础上，采用现代生物黏附材料制备而成的一种口腔黏膜缓释黏附制剂，即可定位释放药物，又可通过缓释作用而延长作用时间。其主要由牛黄、青黛、冰片、珍珠、象牙屑、人指甲等［1］组成，具有解毒化腐的作用，主要用于治疗咽喉糜烂肿痛、口腔溃疡，在缓解疼痛、收敛、生肌、促进溃疡愈合方面疗效显著。本实验对锡类缓释贴膜中靛蓝的含量测定方法进行了初步研究。
       1  仪器与材料
       1.1  仪器
       岛津LC-10ATvp高效液相色谱仪（岛津公司）；N2000色谱数据工作站（浙江大学智能信息工程研究所）；Tu-1901型紫外可见分光光度计（北京普析）；METTLER-TOLEDD  AB265-S型电子天平(瑞士)。
       1.2  材料 
       锡类缓释贴膜及阴性对照样品：自制；对照品：靛蓝（110716-200408，购自中国药品生物制品检定所）；硅胶G（中国青岛海洋化工集团公司），试剂除HPLC用甲醇为色谱纯外，其它均为分析纯。
       2  方法与结果
       2.1  色谱条件［2］   
       色谱柱：Diamonsil C18柱（5μm，4.6 mm×250 mm）；流动相：甲醇-0.2 %醋酸(68∶32)；流速1.0 ml/min；检测波长285 nm；柱温35℃。
       2.2  试液的制备
       2.2.1  对照品溶液的制备  
       精密称取靛蓝对照品适量，加三氯甲烷制成每毫升含0.5 mg的溶液，即得。
       2.2.2  供试品溶液的制备 
        
       取本品，剪细，取约1 g，精密称定，加40倍量0.2%氢氧化钠溶液温浸（60℃）2 h，加热回流1 h，滤过，滤液加三氯甲烷100 ml回流提取4次，1 h/次，合并三氯甲烷溶液，浓缩至约40 ml，用蒸馏水洗涤4次，40 ml/次，分取三氯甲烷溶液，蒸干，加醋酸乙酯2 ml溶解，4℃静置过夜，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷溶解于5 ml棕色量瓶中并稀释至刻度，摇匀，取上清液，用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。
       2.2.3   缺青黛阴性对照溶液的制备
       称取缺青黛阴性对照样品0.8 g，照“2.2.2”项下同法操作，即得。
       2.3  测定 
       取上述靛蓝对照品溶液、供试品溶液、缺青黛阴性对照溶液各20μl，进行色谱分析，记录色谱图。结果见图1～3。可知供试品中靛蓝与其它组分达到较好分离，分离度为9.97＞1.5，阴性对照样品无干扰。
       2.4  靛蓝线性关系考察   
       分别精密吸取已知浓度靛蓝对照品溶液1，2，3，4，5 ml置10 ml棕色量瓶中，加三氯甲烷稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取20 μl，依次注入液相色谱仪，测定。以进样量X（μg）对峰面积A进行线性回归，回归方程为： A=116 922×X+336.94，r=0.999 9，靛蓝在1.1～5.5μg范围内峰面积与进样量呈良好线性关系。
       2.5   精密度实验  
        
       吸取同一浓度的对照品溶液20 μl，重复进样测定5次，记录色谱图，结果靛蓝峰面积RSD=1.71%。
        
       2.6  稳定性实验   
       取同一供试品溶液，于室温放置0，2，4，6 h和8 h后分别取样测定，结果靛蓝峰面积RSD=2.30%，表明供试品溶液在8 h内稳定。
       2.7  重复性实验   
       精密称取同一批号的样品5份，分别照含量测定方法测定，结果样品中靛蓝平均含量为0.573 8 mg/g，RSD=1.81%。2.8  回收率实验    采用加样回收法，取锡类缓释贴膜样品共6份，精密称定，加入靛蓝对照品，依法制备供试品溶液，照含量测定方法测定，计算平均回收率。结果见表1。表1  回收率实验结果（略）
       2.9  样品的含量测定   
       取3批锡类缓释贴膜样品，照“2.2.2”项下操作。精密吸取对照品溶液与膜剂样品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。用外标法，以峰面积计算样品中靛蓝（C16H10O2N2）的含量，并折算为每片含量。结果见表2。表2  3批样品中靛蓝的含量结果（略）
       3  讨论
       3.1  提取方法的选择本品所选辅料均具有溶胀性，黏性较强，不利于有效成分的溶出，因此对提取方法进行了优选。分别采用水溶胀后三氯甲烷提取、0.1%与0.2%氢氧化钠溶液溶胀后三氯甲烷提取、0.1%盐酸溶液温浸后三氯甲烷提取、三氯甲烷回流提取，结果采用0.2%氢氧化钠溶液温浸2 h后再加热回流1 h，膜剂能充分溶胀，有利于有效成分的溶出。
       3.2  提取溶剂的选择参考有关文献［2］，本品采用三氯甲烷作为提取溶剂，但由含量测定方法学考察，结果缺味阴性样品有干扰。经进一步实验表明，干扰成分为可溶于三氯甲烷的水不溶性外膜所致，且该水不溶性外膜在醋酸乙酯中的溶解度较低，经醋酸乙酯溶解、冷藏后有白色块状物析出，消除了干扰。
       3.3  提取时间考察对溶胀后的样品溶液进行三氯甲烷回流提取的次数与时间进行了考察，首先比较了回流时间，结果表明提取2，3 h，样品溶液很难分层，并有部分乳化现象，因此选择回流1 h；同时对三氯甲烷提取次数进行了比较，结果提取4次后溶液基本无色，且经色谱分析表明靛蓝基本提取完全。
       【参考文献】
         　　［1］国家药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂，第2册［S］.1990：283.
       
       ［2］罗小健，张任，何雁.八味锡类散质量标准的研究［J］.中草药，2006，37（4）：537.