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       【摘要】 
       目的建立该制剂的质量标准。方法采用薄层色谱法对麝香酮、胆酸进行定性研究；采用HPLC-ELSD测定黄芪甲苷含量。结果在薄层色谱中检出了人工麝香和人工牛黄；黄芪甲苷在5.175～36.225 μg范围内呈良好线性关系，r=0.999 9，加样平均回收率为98.66%，RSD为1.99%。结论所建立的方法简便易行，专属性强，重现性好，可作为复方芪麝片的质量控制方法。
       【关键词】  复方芪麝片 黄芪甲苷 质量标准
       Studies on the Quality Control of Compound Qishe Tablets
       ZHANG Yuquan,    LIU Xinhua,ZHANG Ning, LIU Mei
       （Shanghai University of TCM,Shanghai,201203,China）
       Abstract：ObjectiveTo establish a quality control for Compound Qishe tablets.  MethodsMoschus  artifactus  and  Calcucus bovis artifactus were identified by TLC,and astragaloside IV in the tablets was determined by HPLC-ELSD. ResultsThe spots in the TLC were clear and distinguished well.The linear range was within the range of  5.175～36.225μg(r=0.999 9).The average recovery was   98.66%,and the RSD was 1.99%.ConclusionThis methods can be used for quality control of Compound Qishe tablets.
       Key words：Compound Qishe tablets;  Astragaloside Ⅳ；  Quality control
       复方芪麝片是中药复方制剂，具有益气化瘀、利湿通络、消肿止痛作用。处方由黄芪、人工麝香、人工牛黄等药味组成。参照《药品注册管理办法》的技术要求，对经过临床使用证明有效的方剂复方芪麝方进行新药药学研究，在完成制剂工艺研究的基础上，采用现代分析技术和方法进行研究，建立了该制剂的质量标准。分别采用薄层色谱（TLC）对制剂中麝香、人工牛黄进行鉴别。黄芪在该方剂中作为君药，其特征性成分为黄芪甲苷。《中国药典》1995年版和2000年版黄芪含量测定项下均收载了用薄层色谱法测定黄芪甲苷的含量，2005年版《中国药典》收载的测定方法为HPLC法［1］。由于该制剂为复方制剂，该成分的结构属于黄芪皂苷类［2］，在紫外区吸收较弱，采用HPLC测定时使用蒸发光散射检测器进行检测，以确保制剂的质量。
       1  仪器与试药
       1.1  仪器
       HP-1100HPLC  美国惠普公司；PL1000蒸发光散射检测器。
       1.2  试药黄芪甲苷为中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用; 批号0781-9706 ；麝香酮、胆酸均为中国药品生物制品检定所提供，供鉴别用；乙腈为色谱纯，水为过滤重蒸水，其余试剂均为分析纯。
       1.3  药品复方芪麝片，由上海中药制药厂生产，批号000315，000325，000330。
       2  方法
       2.1  薄层色谱鉴别
       2.1.1  麝香的鉴别取本品15 g,研细,加乙醚-丙酮（4∶1）25 ml超声提取15 min，滤过，滤液自然挥干,残渣加醋酸乙酯1 ml使溶解,作为供试品溶液。另取麝香酮对照品加醋酸乙酯制成每毫升含2 μg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版Ⅰ部附录YI B）实验，吸取供试品溶液3 μl，对照品溶液5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯为展开剂,展开,晾干,喷以二硝基苯肼试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图1。
       2.1.2  人工牛黄的鉴别取本品4片，研细，加乙醇5 ml超声处理5 min，滤过，滤液挥干，残渣加乙醇1 ml使溶解作为供试品溶液。另取胆酸对照品，加乙醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005年版Ⅰ部附录YI B）实验，吸取供试品溶液3 μl，对照品溶液2 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯-冰醋酸-甲醇（20∶25∶2∶3）为展开剂，展开，晾干，喷以10%的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性对照液无干扰。见图2。
       2.2  制剂中黄芪甲苷含量测定
       2.2.1  色谱条件 
       流动相：乙腈-水（32∶68）；流速1 ml/min；柱温：25℃；检测器条件：蒸发温度：100℃，汽化温度80℃，气体流速1.5 L/min。色谱柱C18（250 mm×4.6 mm,5 μm）
       2.2.2  系统适用性实验 
       制备供试品溶液，取该供试品溶液20 μl注入高效液相色谱仪，黄芪甲苷保留时间约为12 min，理论板数按照黄芪甲苷计不得低于4 500。
       2.2.3  线性关系考察 
       取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，摇匀，即得。分别吸取上述对照品溶液5，10，15，20，25，30和35μl进样并按拟定的色谱条件测定，得峰面积，以进样量自然对数为横坐标，峰面积自然对数为纵坐标，进行线性回归，回归方程为Y=1.621 6X+3.281 5，r=0.999 9， 表明黄芪甲苷在5 .175～36.225 μg范围内有较好的线性关系。
       2.2.4  精密度实验对同一供试品溶液依法测定5次，RSD=0.49%,结果说明进样的精密度及仪器精密度均较好。见表1。表1  精密度实验结果（略）
       2.2.5  重复性实验取同一批号供试品5份，按照含量测定条件操作并测定，RSD=1.32%，表明操作的重现性较好，结果见表2。表2  重复性实验结果（略）
       2.2.6  稳定性实验将某供试品溶液测定后，间隔一定时间再重复进样测定，RSD=0.49%，结果表明，供试品溶液在6 h内稳定，结果见表3。表3  稳定性实验结果（略）
       2.2.7  加样回收率实验准确量取黄芪甲苷对照品加入到已知含量的供试品（批号为000325）中，按照正文含量测定项下操作并测定，结果见表4。表4  回收率测定结果（略）
       回收率（%）=（测得黄芪甲苷量-已知黄芪甲苷量）加入黄芪甲苷量×100%
       2.2.8  供试品含量测定本品研细，取1.5 g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇40 ml，冷浸过夜，再加甲醇适量，回流4 h，提取液回收甲醇并浓缩至干，残渣加水10 ml微热使溶解，用乙醚振摇提取2次，10 ml/次，弃去醚液，用水饱和正丁醇振摇提取4次（20，20，20，10 ml），合并正丁醇提取液，用氨试液提取2次，20 ml/次，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至2 ml量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
       分别精密吸取对照品溶液与不同批号的供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定即得。对3批制剂含量测定的结果见表5。表5  含量测定结果（略）
       从所测定的3批制剂含量结果初步确定复方芪麝片每片含黄芪甲苷约为0.15 mg。
       3  讨论
       本实验供试品溶液的制备参考了《中国药典》2005年版Ⅰ部黄芪项下黄芪甲苷含量测定中供试品溶液的制备方法。为了避免处方中其他药味的干扰，在正丁醇萃取前增加了乙醚萃取的步骤，以去除脂溶性成分对测试的干扰，经实验考证乙醚萃取液中无黄芪甲苷成分存在；药典中对萃取液还采用了经大孔吸附树脂柱纯化的方法，但惟恐对所要测试的成分有吸附而影响回收率，故该实验略去了此步操作。实验结果证明这样操作测试时仍可达到理想的分离度。
       【参考文献】
         　　［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］. 北京：化学工业出版社，2005：212.
       
       ［2］杨 云，冯卫生. 中药化学成分提取分离手册［M］. 北京：中国中医药出版社，1998：302.