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       【摘要】 
       目的建立测定复方芩兰口服液中绿原酸和黄芩苷的含量分析方法。方法采用高效液相色谱法，色谱柱为C-18烷基硅烷柱，绿原酸：甲醇-0.4%的磷酸水溶液(24∶76)为流动相，检测波长327 nm；黄芩苷：甲醇-水-磷酸 (47∶53∶0.2)为流动相，检测波长274 nm；流速1.0 ml/min，柱温30℃。结果绿原酸在0.118～1.18μg范围内线性关系良好(r=1.000 0)，平均加样回收率为97.9%，RSD为2.6%（n=5)；黄芩苷在0.069 6～0.556 8 μg范围内线性关系良好(r=0.999 8)，平均加样回收率为98.2%，RSD为1.4%(n=5)。结论该法操作简单、准确、重现性好，可用于复方芩兰口服液的质量控制。
       【关键词】  绿原酸 黄芩苷 复方芩兰口服液 高效液相色谱法
       Determination of Chlorogenic Acid and Baicalin in Fufangqinlan Oral Solution by HPLC
       ZHANG Chengzhi
       （Leshan Normal College, Leshan, Sichuan 614000, China）
       Abstract:ObjectiveTo determine the contents of chlorogenic acid and Baicalin in fufangqinlan oral solution. MethodsHPLC was performed by using C-l8 column．The chlorogenic acid were separated with methanol-0.4% phosphoric acid solution(24∶76)as a mobile phase and detected at 327 nm.The baicalin were separated with methanol-water-phosphoric acid solution(47∶53∶0.2) as a mobile phase and detected at 274 nm . ResultsThe chlorogenic acid had good linear relationship(r=1.000 0) within the range of 0.118～1.18 μg and the average recovery was 98.5% with RSD of 1.8 %. The baicalin had good linear relationship(r=0.999 8) within the range of  0.069 6～0.556 8 μg and the average recovery was 98.2% with RSD of 1.4% .ConclusionThe method is simple,accurate and reprodueible.It can be used for guality control of Fufangqinlan oral solution.
       Key words：Chlorogenic acid；  Baicalin；  Fufangqinlan oral solution；  HPLC
       复方芩兰口服液主要由金银花、黄芩、连翘、板蓝根提取物组成，用于外感风热引起的发热，咳嗽，咽痛，由于紫外分光光度法专属性差，多采用高效液相色谱法测定绿原酸和黄芩苷含量［1～6］，结果表明，该法灵敏，专属性强，重现性好，可用于该制剂的质量控制。
       1  仪器与材料
       1.1  仪器
       岛津LC-2010AHT高效液相色谱仪（日本岛津），KQ-50B型超声清洗器（昆明市超声仪器有限公司），电子分析天平［梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司］。
       1.2   试剂
       1.2.1  对照品绿原酸(批号110753-200413，中国药品生物制品检验所提供) ；黄芩苷(中国药品生物制品检验所提供)。
       1.2.2  供试品市售复方芩兰口服液（黑龙江省珍宝岛制药有限公司），甲醇为分析纯，3次蒸馏水。
       2  色谱条件
       色谱柱：C-18烷基硅烷柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流动相：绿原酸：甲醇-0.4%的磷酸水溶液(24∶76)为流动相；黄芩苷：甲醇-水-磷酸 (47∶53∶0.2)为流动相。进样量5 μl。流速1.0 ml/min；检测波长：绿原酸为327 nm，黄芩苷为274 nm。柱温30℃。
       3  方法与结果
       3.1  实验条件的选择
       3.1.1  提取剂的选择分别采用体积分数为50%甲醇、体积分数为50%乙醇作为试样提取溶剂，结果表明体积分数为50%甲醇与体积分数为50%乙醇提取结果相似，所以选用体积分数为50%甲醇作为提取溶剂。
       3.1.2  流动相的选择曾采用乙腈-水-磷酸(10∶90∶0.1)、甲醇-0.4%的磷酸水溶液(24∶76)和甲醇－水－磷酸 (47∶53∶0.2)等作为流动相，结果以最后两种流动相得到的色谱图分离度好，保留时间适宜，所以采用其作为流动相。
       3.2  对照品溶液的制备 
       精密称取绿原酸对照品5.9 mg，置50.00 ml棕色容量瓶中，用50%的甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得浓度为0.118 mg/ml的对照品溶液。准确称取经干燥的黄芩苷对照品11.6 mg，置于50 ml容量瓶中，加50%甲醇适量，振摇，超声处理20 min使之溶解，放冷，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀即得浓度为0.232 mg/ml的对照品储备液。精密量取黄芩苷对照品储备液15 ml，置于50 ml容量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀即得浓度为0.069 6 mg/ml的黄芩苷对照品使用液。
       3.3  供试品溶液的制备
       3.3.1  绿原酸准确移取1 ml供试品于10 ml比色管中，加入50%的甲醇稀释到刻度线，摇匀，静置，过滤，取续滤液即可。
       3.3.2  黄芩苷准确移取1 ml供试品于100 ml容量瓶中，加入50%的甲醇稀释到刻度线，摇匀，静置，过滤，取续滤液即可。
       3.4   阴性溶液的制备称取连翘、板蓝根各10 g，加适量蒸馏水，煎熬30 min，然后过滤，浓缩，放置，冷却，再加入适量50%的甲醇即可。
       3.5  系统适用性实验在上述色谱条件下，分别以绿原酸对照品溶液，绿原酸供试品溶液，黄芩苷对照品溶液，黄芩苷供试品溶液和阴性对照品溶液在色谱仪上进样，记录色谱图（见图1～5）。图中，绿原酸对照品和供试品的保留时间分别为9.067和9.057 min，黄芩苷对照品和供试品的保留时间分别为8.352和8.305 min，阴性溶液无干扰。
       3.6  标准曲线绘制
       3.6.1  绿原酸标准曲线绘制取绿原酸对照品溶液(0.118 mg/ml)以1，2，4，6，8，10 μl在高效液相色谱仪进样, 记录色谱图见图6。以进样量为横坐标, 峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。线性回归方程：Y=3×106X+258.08，r=1.000 0。线性范围：0.118～1.18μg。
       3.6.2  黄芩苷标准曲线绘制取黄芩苷对照品使用溶液(0.0696 mg/ml)以1，2，4，6，8 μl在高效液相色谱仪进样, 记录色谱图见图7。以进样量为横坐标, 峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。黄芩苷线性回归方程为Y=2×106X +745，r=0.999 8，线性范围：0.069 6～0.556 8 μg。
       3.7  精密度实验取绿原酸对照品溶液(0.094 4 mg/ml)和黄芩苷对照品溶液(0.069 6 mg/ml)，分别重复进样5次，4 μl/次，分别测定绿原酸和黄芩苷峰面积。绿原酸峰面积测定值的相对标准偏差RSD=0.23%，黄芩苷峰面积测定值的RSD=0.81%，表明测定方法的精密度良好。
       3.8   稳定性实验取绿原酸和黄芩苷供试品溶液分别在1，3，5，7，24 h各进样1次，共进样5次，5 μl/次，记录色谱图。以绿原酸和黄芩苷的峰面积及以峰面积计算测定的相对标准偏差。
       绿原酸和黄芩苷两种测定样本的相对标准偏差RSD分别为3.2%和0.68%,表明测定对照品在24 h之内是稳定的。
       3.9   样品含量测定及重现性实验
       3.9.1  绿原酸含量测定及重现性实验取同一批样品，照绿原酸供试品溶液制备方法，制备供试品试样5份，在相同色谱条件下记录色谱图。以测定供试品溶液的峰面积和对照品线性方程按外标法计算测定溶液的绿原酸的含量和测定样本的RSD(%)，结果见表1。RSD=3.1%，表明该方法有较好的重现性。表1  绿原酸对照品含量及重现性测定结果（略）
       3.9.2  黄芩苷含量测定及重现性实验同样，取同一批样品，照黄芩苷供试品溶液制备方法，制备供试品试样5份，在相同色谱条件下记录色谱图。以测定供试品溶液的峰面积和对照品线性方程按外标法计算测定溶液的黄芩苷含量和测定样本的RSD(%)，结果如下表2所示。测定结果显示样品中的黄芩苷含量为9.540 mg/ml，RSD=2.6%，也显示出较高的重现性。表2  黄芩苷对照品含量及重现性测定结果（略）
       3.10  回收率实验　
       3.10.1  绿原酸回收率实验精密吸取绿原酸供试品稀释溶液适当体积，再精密加入绿原酸对照品溶液(0.118 mg/ml)适当体积，混匀后，在相同色谱条件下记录色谱图，以测得的峰面积计算绿原酸测得量和加标回收率，结果见表3。表3  绿原酸加标回收率测定结果（略）
       3.10.2  黄芩苷回收率实验精密吸取黄芩苷供试品溶液（0.095 4 mg/ml）适当体积，再精密加入黄芩苷对照品溶液(0.078 mg/ml)适当体积，混匀后，在相同色谱条件下记录色谱图，以测得的峰面积计算黄芩苷测得量和加标回收率结果见表4。表4  黄芩苷加标回收率测定结果（略）
       4  讨论
       本制剂中，黄芩苷的含量远高于绿原酸的含量，且用高效液相色谱法测定其含量，操作简单，快捷。
       黄芩苷和绿原酸在50%的甲醇中都能较好溶解，所以选用50%的甲醇作提取剂。
       【参考文献】
         　　［1］李应芬. HPLC测定双黄连口服液中绿原酸的含量［J］.华西药学杂志，2004，19(6)：465.
       
       ［2］范全民，孙冬云，周慧娟. HPLC测定黄连上清片中黄芩苷的含量［J］.中成药，2006，28(10)：1545.
       
       ［3］桑旭峰，吴海雯 ，徐奇超. HPLC同时测定银黄口服液中绿原酸和黄芩苷含量［J］.中成药，2005，27（1）：96.
       
       ［4］曲秀梅，金国威.高效液相色谱法测定银黄口服液中绿原酸和黄芩苷的含量［J］.黑龙江医药科学，2004，27（4）：57.
       
       ［5］钱江.HPLC法测定银黄口服液中绿原酸和黄芩苷的含量［J］.中成药，2003，25（2）：117.
       
       ［6］杨瑞芬，彭家钢，饶泽萍. 高效液相色谱法测定双黄连口服液中绿原酸和黄芩苷的含量［J］.中国医院药学杂志，2006：26(2)：240.