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       【摘要】 
       目的测定芩黄喉症胶囊中盐酸小檗碱的含量,为该制剂制定质量标准提供依据。方法采用HPLC法测定,色谱条件： Kromasil ODS C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm)；流动相： 乙腈-0.033 mol/L磷酸二氢钾溶液（30∶70）；流速1.0 ml/min；检测波长265 nm；柱温(30±2)℃。结果盐酸小檗碱在0.1992～1.1952 μg之间呈线性关系,r=0.999 8;平均回收率为97.3%,RSD=0.82%(n=6)。结论该方法简便准确,重现性好,可用于芩黄喉症胶囊的质量控制。
       【关键词】  芩黄喉症胶囊 高效液相色谱 盐酸小檗碱 含量测定
       Determination of the Content of Berberine Hydrochloride in Qinhuang Houzheng Capsule by HPLC
       JIANG Yingying ,CHEN Kaifeng
       (Guangxi Institute of Materia Medica,Nanning 530022,China)
       Abstract：Objective To determine the content of Berberine Hydrochloride in Qinhuang Houzheng Capsule and to provide evidence for its quality criteria.MethodsAn HPLC method was established as follows:the column was Kromasil ODS C18 cloumn(4.6 mm×250 mm,5μm) with Acetonitrile-0.033mol/L potassium dihydrogen phosphate（KH2PO4）aqueous solution (30:70) as the mobile phase，the flow rate was 1.0 ml/min ,detection wavelength was at 265 nm,column temperature was at (30±2)℃.ResultsThe linear range of Berberine Hydrochloride was 0.1992～1.1952μg (r＝0.999 8).The average recovery rate was 97.3%, RSD=0.82% (n=6).ConclusionThe method is simple,accurate,repeatable,and can be used for the quality control of Qinhuang Houzheng Capsule.
       Key words：Qinhuang Houzheng Capsule;  HPLC;  Berberine Hydrochloride;  Content determination
       
       芩黄喉症胶囊收载于国家中成药标准汇编中成药地方标准上升国家标准部分，是由黄连、人工牛黄、冰片、黄芩、栀子等中药组成的复方制剂，具有清热解毒，消肿止痛之功效，用于热毒内盛引起的咽喉肿痛［1］，原质量标准中含量测定部分仅有黄芩苷的含量测定，方中黄连用量较大，为君药，具有清热燥湿、泻火解毒的作用［2］，故选用黄连中主要活性成分盐酸小檗碱作为指标成分，建立高效液相色谱法，测定该产品中盐酸小檗碱的含量。结果表明该法简便准确、灵敏度高、专属性重现性好，可作为该产品质量控制指标。
       1  仪器与试药
       LabAlliance高效液相色谱仪，SeriesⅢ泵，Model500紫外检测器，十八烷基硅烷键合硅胶柱(Kromasil ODS C18柱，瑞典诺贝尔公司)，4.6 mm×250 mm，5μm；UV-2100紫外分光光度计（日本岛津）；SZ-93自动双重纯水蒸馏器（上海亚荣生化仪器厂）； B2200S-T超声提取器［必能信超声（上海）有限公司］，HH-S数显恒温水浴锅（江苏省金坛市医疗仪器厂）。乙腈为色谱纯；甲醇、盐酸、磷酸二氢钾为分析纯；水为重蒸水。盐酸小檗碱对照品由中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号：110713-200208；芩黄喉症胶囊为市售品，批号：050401，050611，050617，050623。
       2  方法与结果
       2.1  色谱条件 
       色谱柱： Kromasil ODS C18柱（5μm，4.6 mm×250 mm，瑞典诺贝尔公司）；流动相：乙腈-0.033 mol/L磷酸二氢钾溶液（30∶70）；流速：1.0 ml/min；检测波长265 nm；进样量20μl。
       2.2  对照品溶液的制备 
       精密称取盐酸小檗碱对照品24.9 mg，置25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液（0.996 mg/ml）。精密吸取以上对照品储备液1 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，混匀，再从中吸取3 ml溶液至10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，作为对照品溶液（29.88 μg/ml）。
       2.3  供试品溶液的制备 
       取本品10粒内容物，混匀，取约80 mg，精密称定，置100 ml量瓶中，加入盐酸-甲醇（1∶100）70 ml，60℃水浴浸泡1 h，取出，放冷至室温，加流动相至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液即得。
       2.4  阴性对照溶液的制备 
       以相同的处方比例称取适量药材（黄连除外），按本品制备工艺制备不含黄连的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。
       2.5  系统适应性实验 
       分别吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液（不含黄连）各20μl，注入液相色谱仪，绘制色谱图。试验结果表明，供试品及对照品溶液有一保留时间相同的色谱峰，供试品色谱中盐酸小檗碱与其他组分达到基线分离，阴性对照溶液在盐酸小檗碱峰附近都无干扰。结果见图1。
       2.6  线性关系考察 
       精密吸取对照品储备液（0.996    mg/ml）5 ml，置50 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，混匀，再从中分别吸取1，2，3，4，5，6 ml分别置于10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，制得9.96，19.92，29.88，39.84，49.80，59.76 μg/ml的对照品溶液。分别精密吸取上述溶液各20 μl 注入液相色谱仪测定，以峰面积Y对进样量X进行线性回归分析，得回归方程Y = 2E+06X+21 065，r=0.999 8，表明盐酸小檗碱在0.199 2～1.195 2 μg范围内线性关系良好。
       2.7  精密度实验 
       精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液（浓度为29.88 μg/ml）20 μl，连续测定5次，测定盐酸小檗碱峰面积值，RSD为0.2% (n＝5)。结果表明精密度较好。
       2.8  稳定性实验
       对同一供试品溶液（050401批），每隔2 h测定1次，共测定5次，结果盐酸小檗碱含量的平均值为16.404 mg/粒，RSD为0.13%（n=5）。结果表明，在8 h内，供试品溶液稳定。
       2.9  重复性实验 
       取同一批样品（050401批）5份，按供试品溶液制备方法制备，然后测定，结果测得盐酸小檗碱含量的平均值为16.50 mg/粒（RSD＝0.66%，n＝5）。结果表明重复性较好。
       2.10  加样回收率实验 
       精密称取己知含量的芩黄喉症胶囊（050401批，含量为16.50 mg/粒）约40 mg，分别精密加入一定量的盐酸小檗碱对照品储备液（0.996 mg/ml ）1.7 ml，按供试品溶液制备方法制备、测定，计算回收率，结果盐酸小檗碱平均回收率为97.30%，RSD为0.82%（n＝6）。结果见表1。表1  盐酸小檗碱加样回收率实验数据（略）
       2.11  样品含量测定 
       取本品3个批次按供试品溶液制备项下方法操作，得供试品溶液，并按上述色谱条件测定盐酸小檗碱的含量。结果见表2。表2  3批样品测定结果（略）
       3  讨论
       流动相的选择：曾比较不同比例及不同磷酸二氢钾浓度的乙腈-磷酸二氢钾系统，并曾加入磷酸、二乙胺调节pH值以改善峰形，最后以乙腈-0.033 mol/L磷酸二氢钾溶液（30∶70）分析时间适宜，峰形及分离效果最佳。
       供试品溶液的制备：盐酸小檗碱可溶于水、甲醇、乙醇等，文献报道［3～5］，采用盐酸-甲醇（1∶100）作为提取溶剂，试用了3种提取方法：a温浸1 h；b超声处理30 min；c温浸20 min后超声处理30 min。经含量测定并计算比较，样品温浸1 h提取最为完全，重复性好，故将提取方法定为用盐酸-甲醇（1∶100）温浸1 h。
       本实验中柱温对盐酸小檗碱峰的出峰时间及与其他峰的分离度影响较大，柱温过高或过低均可能达不到分离度的要求而影响含量测定。实验证明柱温在30℃时分离度最佳，因此设定柱温为（30±2）℃。
       【参考文献】
         　　［1］国家药品监督管理局.国家中成药标准汇编·中成药地方标准上升国家标准部分·眼科 耳鼻喉［S］.皮肤科分册，2002：123..
       
       ［2］冉先德.中华药海［M］.哈尔滨：哈尔滨出版社，1993：441.
       
       ［3］吕曙华，徐 刚，吕归宝，等.离子对高效液相色谱法测定春血安胶囊中盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的含量［J］.中草药，2003，34（4）：332.
       
       ［4］谢 敏，柯雪红，陈彩英，等.反相高效液相色谱法测定胃肠舒胶囊中盐酸小檗碱的含量［M］.中药新药与临床药理，2004，15（2）：113.
       
       ［5］欧阳荣，廖建萍，胡铁骊.高效液相色谱法测定鼻咽解毒胶囊中盐酸小檗碱的含量［M］.中国医院药学杂志，2005，25（2）：132.