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       【摘要】 
       目的观察脑梗塞急性期大鼠血清中内皮素(endothelin,ET)-1、一氧化氮(nitricoxide,NO)的含量变化，探讨含植物雌激素中药的脑保护作用。方法采用线拴法复制急性脑梗塞动物模型，并于造模后6，12，24 h动态观察各组大鼠血清中ET-1，NO的含量变化。结果随着缺血时间的延长，各组大鼠血清中ET-1含量逐步增加，NO含量则不断下降，至24h 分别达到高、低峰值。同时段比较，去势组大鼠血清中ET-1含量显著高于正常组及去势加中药组(P<0.05或P<0.01)， NO含量则始终明显低于正常组及去势加中药组（P<0.05或P<0.01）。结论含植物性雌激素中药能明显下调脑梗塞大鼠血清中ET -1水平，提高NO的表达，有效对抗并减轻脑组织缺血性损伤。
       【关键词】  雌激素 中药 脑梗塞 内皮素-1 一氧化氮
       大量研究表明, 雌激素对于缺血性脑组织损伤具有明显的保护作用［1，2］。然而雌激素的应用会导致生殖系统肿瘤、乳腺癌发生、子宫内膜增生、高凝血状态等不良后果发生，限制了其推广应用。因此，天然有效的植物雌激素逐渐引起了众多学者的关注［3～4］。本实验即旨在研究含植物雌激素中药的脑保护作用，并进一步探讨其可能的作用机制。
       1  材料与方法
       1.1  材料
       1.1.1  药物含植物雌激素中药复方25剂，每剂含生药黄芪30 g，三七粉3 g（冲），银杏叶6 g，蒲黄15 g（包煎）。实验用药时，每剂水煎为200 ml的药液，再将其浓缩成所需浓度的混悬液。所需中药均购自石家庄市乐仁堂药店，由课题组自行煎制。
       1.1.2  动物体重200～250 g的雌性Wistar大鼠（鼠龄4个月）90只，由华中科技大学同济医学院实验动物学部提供（动物合格证： 鄂医动字第004-007号）。
       1.1.3  试剂内皮素、一氧化氮放免试剂盒购自解放军总医院科技开发中心放免所。
       1.2   方法
       1.2.1  实验分组及灌胃
       90只雌性Wistar大鼠，随机分为3组：正常组、去势组、去势加中药组， 30只/组。去势组、去势加中药组分别于适应性饲养3 d后行去势手术（切除双侧卵巢）。去势加中药组于术后第2天灌胃含植物雌激素中药方（黄芪、三七、银杏叶、蒲黄）。正常组及去势组则每日灌胃等量生理盐水。
       1.2.2  动物模型的复制3组动物灌胃两周后，分别采用线拴法复制脑梗塞动物模型。大鼠腹腔内注射10%水合氯醛(350mg·kg-1) 麻醉后，仰卧固定，颈部正中切口，分离并暴露右侧颈总及颈内、外动脉，并在颈内外动脉分叉处结扎颈外动脉，右侧颈总动脉剪口，插入头端烧成圆钝形直径为0.25 mm 的尼龙鱼线,进线长度约为18～19 mm，在大脑中动脉起始端堵塞大脑中动脉，然后将颈总动脉连同尼龙鱼线一起结扎，缝合皮肤，放回笼内，单笼喂养。手术过程中监测大鼠直肠温度,并保持在36.5～37.5 ℃。苏醒后表现为左上肢屈曲、行走时向左侧旋转或左侧肢体瘫痪的大鼠为造模成功，纳入统计结果，否则为造模失败，剔除实验。
       1.3  指标检测造模成功后6，12，24 h分别以放免法检测各组大鼠血清中ET-1及NO的表达情况（造模手术后共有72只大鼠进入指标检测：24只/组，其余均在造模过程中死亡或造模失败后剔除实验）。
       1.4  统计分析数据用±s表示，采用SPSS11.5软件进行单因素方差分析处理。方差齐，用q检验；方差不齐，则用秩和检验。显著性差异水平以P＜0.05，0.01为标准。
       2  结 果
       2.1   造模后各时段各组大鼠血清中ET-1表达情况由表1可见，造模后随着缺血时间的延长，各组大鼠血清中ET-1含量呈逐步递增趋势，至缺血24 h分别达到高峰。去势组大鼠血清中ET-1含量始终高于同时段正常组及去势加中药组（P<0.05或P<0.01），后两组之间无明显统计学意义（P>0.05）。表1  造模后6，12，4 h各组大鼠血清中ET-1表达情况比(略)
       2.2  造模后各时段各组大鼠血清中NO表达情况由表2可见，造模后随着缺血时间的延长，各组大鼠血清中NO含量呈进行性下降趋势，至缺血24 h分别达到最低水平。造模后各时段，去势组血清中NO含量均低于同时段正常组及去势加中药组，具有统计学差异(P<0.05或P<0.01)。而去势加中药组NO含量始终与正常组水平相当，无明显统计学意义(P>0.05)。表2  造模后6，12，24 h各组大鼠血清中NO表达情况比较（略）
       3  讨  论
       3.1  脑梗塞与ET和NO的相关性  
       ET和NO通过调节血管的舒缩功能共同参与脑梗塞的病理过程。ET具有强烈而持久的缩血管作用，而NO有明显的扩张血管作用，并能强烈地抑制血小板聚集。生理情况下，两者的合成与释放始终维持着一种动态平衡：既相互依赖，又相互拮抗，维持着血管的正常舒缩功能。急性脑梗塞发生时，由于缺血、缺氧等应激因素的突然刺激，这种平衡状态遭到破坏，以致血管舒缩功能失调。一方面，ET释放大量增加，刺激血管急剧收缩，局部血流供应减少，脑组织损伤加重；而脑梗塞后局部血管神经组织缺血缺氧致使损伤的脑血管内皮细胞及神经组织合成ET进一步增加,形成恶性循环［5］；另一方面，NO合成减少，其扩张血管作用减弱，同时血小板将不断聚集并释放血管收缩因子，导致血管痉挛，脑组织局部供血不足，使病灶区缺血缺氧状况进一步恶化。王荔等［6］推测ET水平升高可能既是脑梗塞的原因又是脑梗塞的结果。临床观察也表明，ET和NO参与了脑梗塞（ACI）的发生发展过程，它们与脑梗塞的具有明显的相关性［7，8］。本动物实验结果，在脑梗塞急性期，大鼠血清中ET-1含量随缺血时间延长而增加，NO则呈逐步减少趋势。这与吴海琴等［9］的临床研究不完全一致。推测与指标检测时间差异或动物实验与临床观察本身的差别有关。
       3.2  组方依据 
       本实验所选中药复方由黄芪、三七、蒲黄、银杏叶四药组成。其中重用黄芪，取其补气之功。气为血帅，气旺则运血有力。辅以三七、蒲黄、银杏叶活血散瘀。诸药合用，共奏补气行血之效。从药物化学成分角度分析，四味中药都含有黄酮和异黄酮，是具雌激素样活性的有效成分——植物雌激素。植物性雌激素是植物中可以与雌激素受体(ER)结合的一类化合物,在体内具有双向调节作用。当体内雌激素水平较高时发挥抗雌激素活性，而体内雌激素水平较低时具有拟雌激素作用［10］。因此含植物雌激素中药既可发挥脑保护作用又可避免长期、大量应用雌激素可能导致的各种不良后果，这为人类寻觅天然而有效的药物提供了新的线索。
       本实验结果表明含雌激素中药确实能有效减少血清中ET-1含量，增加NO释放，从而发挥较好的脑保护作用。
       【参考文献】
         　　［1］卞杰勇,王宇卉,张世明,等.雌激素对大鼠局灶性脑缺血的保护作用［J］.苏州大学学报（医学版）,2003,23（4）:399.
       
       ［2］陈俊峰,蒋 豪.雌激素的脑缺血保护作用［J］.中华麻醉学杂志,2002,22（9）:562.
       
       ［3］王若光,尤昭玲,冯光荣.中药植物性雌激素研究［J］.中国中西医结合杂志,2004,24(2):169.
       
       ［4］张博生,徐 运,朱文斌.含雌激素中药脑保护作用的实验研究［J］.中国临床康复,2004,8(34):7740.
       
       ［5］毕国荣,卢丽萍,周 卓.脑梗塞患者血浆内皮素和一氧化氮含量及相关性的研究［J］.中国误诊学杂志,2002, 2(1):20.
       
       ［6］王荔,成学恭.急性脑梗塞患者血浆内皮素含量的研究［J］.山西医科大学学报,1998,29(1):53转57.
       
       ［7］余运贤,梁 晖,黄 健,等.急性脑梗塞血瘀证与一氧化氮、内皮素相关性研究［J］.中国中西医结合杂志,2000,20(7):501.
       
       ［8］陈建国,芦 萌,颜万能,等.脑梗塞患者内皮素、一氧化氮含量的动态观察及临床意义［J］.标记免疫分析与临床,1999,6(3):155.
       
       ［9］吴海琴,张桂莲,徐 静,等.脑梗塞患者血清一氧化氮含量及其与内皮素的关系［J］.陕西医学杂志,2000,29(2)：73.
       
       ［10］贺红莉,金 焕,王继峰,等. 雌激素受体调节剂及其相关中药的研究进展［J］.中国中药杂志,2002,27（11）:805.