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       【摘要】 
       目的观察玉液汤对胰岛素抵抗大鼠骨骼肌中葡萄糖转运子-4 mRNA（GLUT-4 mRNA）表达的影响。方法采用逆转录多聚酶链式反应（RTPCR）方法检测大鼠骨骼肌中GLUT-4 mRNA的水平。结果玉液汤高剂量组能显著增加大鼠骨骼肌中GLUT-4mRNA的表达(P<0.01)。 结论玉液汤通过增强骨骼肌中GLUT-4 mRNA的表达改善胰岛素抵抗。
       【关键词】  玉液汤 胰岛素抵抗 葡萄糖转运子-4
       Effect of Yuye Tang on the Expression of GLUT-4 mRNA in Muscle of Insulin Resistance Rats
       FU Xueyan,  DONG Lin,ZHANG Yiwei,YU Fusheng
       1.Ningxia Medical College, Yinchuan, 750021, China;
       2.Heilongjiang Agricultural Settlement Hospital,Haerbin, 150088, China
       Abstract：ObjectiveTo observe the effect of Yuye Tang on the expression of GLUT-4mRNA in muscle of insulin resistance rats. MethodsRT-PCR method was employed to determine the express of GLUT-4mRNA in rat"s muscle. ResultsThe high Yuye Tang dose could increase the express of GLUT-4mRNA in muscle(P<0.01).  ConclusionYuye Tang can improve insulin resistance through inereasing the expression of GLUT-4mRNA in muscle.
       Key words：Yuye Tang;  Insulin resistance ;  GLUT-4
       本实验在前期工作基础上利用大鼠胰岛素抵抗动物模型，观察玉液汤对胰岛素抵抗大鼠骨骼肌中GLUT-4 mRNA表达的影响，现将结果报道如下。
       1  器材与方法
       1.1  动物  
       Wistar大鼠，体重(200±20)g，雄性，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供。
       1.2  药材　
       玉液汤由生山药、生黄芪、知母、生鸡内金、葛根、五味子、天花粉组成，均购于黑龙江省世一堂中药饮片厂，水煎提取浓缩至每毫升含生药0.828 g，置冰箱保存备用。
       1.3  试剂　
       Trizol,RNA提取试剂由美国Invitrogen公司提供；Taq酶、RT-PCR试剂盒由美国Promega公司提供； MgCl2 ，10×bufev，琼脂糖，PCR Marker由原平皓生技术公司提供；GoldView染料由Buffer公司提供；罗格列酮购自人民同泰药店，灌胃时用生理盐水配成混悬液。
       1.4  仪器
       RT-PCR仪，日本日立；BACKMAN DU-640型蛋白质核酸分析仪，美国；OLYMPUS电光源显微镜(CH30)，日本；TGL-16G台式高速离心机，上海医用分析仪器厂； 引物设计使用Primer5.0软件设计，上海捷倍思基因技术公司合成。
       1.5  方法
       取正常大鼠10只为正常对照组，普通饲养。其他大鼠利用高脂饲料复制胰岛素抵抗动物模型，模型复制成功后，将大鼠随机分为4组，分别为模型组、阳性药组、玉液汤高低剂量组，每组10只。玉液汤高剂量组按1.35 g/kg生药（低剂量组为其1/2）灌胃给药；阳性对照组给罗格列酮，按0.20 g/kg给药；正常对照组、模型组给同体积的生理盐水10 ml/kg。给药时间为两周，两周后将大鼠处死，取其四肢骨骼肌，置低温冰箱中，备用。
       提取总RNA：RNA提取使用Trizol RNA提取试剂，按常规方法进行。
       RT-PCR反应：取一定量的RNA，加入混和液体，包括5×缓冲液、dNTP、逆转录酶、上、下游引物、MgSO4，并加入去Rnase的蒸馏水等，离心，在42℃水浴箱中温育合成cDNA，95℃水浴箱中灭活逆转录酶。模板cDNA合成后，进行PCR扩增反应，反应体系中包括5×缓冲液，10 mmol/L dNTP，Taq酶，上下游引物并加入双蒸水，振荡，离心。经94℃变性后，共做30个循环。
       RT-PCR产物分析：取PCR扩增产物以1.5%琼脂糖凝胶、100V电压电泳，GoldView染料染色，在紫外灯下观察结果、拍照。采用Kodak2.0软件对PCR产物琼脂糖凝胶电泳进行扫描分析及数据处理。
       1.6  统计学处理各组样本中GLUT-4/β-actin mRNA电泳产物灰度扫描比值的变化以±s表示，显著性检验采用t检验。
       2  结果
          
       RT-PCR产物在琼脂糖电泳凝胶紫外灯下均可见，各组β-actin电泳条带亮度一致，扩增片段均为542 bp，见图1；GLUT-4 mRNA为350 bp片段，但各组电泳条带亮度有明显差异，见图2。与模型组比较玉液汤高剂量组和罗格列酮组GLUT-4 mRNA表达均增加（P﹤0.01）。结果见表1。表1  GLUT-4/β-actin mRNA RT-PCR电泳产物灰度扫描比值的变化（略）
       3  讨论
       胰岛素抵抗（Insulin Resistance， IR）是指胰岛素（INS）作用的靶器官、组织对INS作用缺乏正常反应，其敏感性或反应性降低的一种病理和临床表现，即INS促进葡萄糖摄取作用受损，导致代偿性INS分泌增多，其重要标志为高INS血症。由此派生的糖、脂代谢紊乱，可导致糖尿病、肥胖症、高血压病、脂类代谢异常、动脉粥样硬化等多种疾病，IR是其共同的病理机制和联系纽带。噻唑烷二酮（TZD）类和双胍类药物是目前临床上用于改善胰岛素抵抗的主要药物，但这两类药物都存在着一些不足之处，特别是长期服用，会产生一些毒副作用。
       中医药重视辨证论治，通过整体调节，改善人体的病理状态，其多途径、多环节、多靶点的作用机制与公认的降糖、调脂、纠正代谢紊乱等综合因素的干预来改善胰岛素抵抗的治疗原则不谋而合，在改善胰岛素抵抗方面有着广阔的前景和一定的优势。但目前临床上还没有一种安全有效的中药新药可以选择用来干预胰岛素抵抗达到中西医优势互补，以取得最佳的临床疗效。本实验研究证实玉液汤有增加胰岛素抵抗大鼠骨骼肌中GLUT-4  mRNA表达的作用，笔者认为，玉液汤正是通过增加GLUT-4mRNA的表达来改善胰岛素抵抗的。本研究为中药改善胰岛素抵抗作用机制的深入探讨奠定基础，为进一步开发改善胰岛素抵抗的新药提供实验依据。