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       【关键词】  高效液相色谱法
       摘要：目的：建立高效液相色谱(HPLC)法测定胆香鼻炎片中欧前胡素含量的方法。方法：色谱柱：HP ODSHypersil(4.6 mm×200 mm，5 μm)，柱温：20℃，流动相：乙腈∶水(45∶55)，流速：0.8 ml/min，检测波长：249 nm。结果：欧前胡素在0.007 8～0.25 μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系，相关系数r=0.999 8，加样回收率为98.6%，RSD为2.77%。结论：该方法快速、准确，可作为胆香鼻炎片的质量控制方法。
       关键词：高效液相色谱法；  胆香鼻炎片；  欧前胡素
       Determination of Imperatorin in Danxiang Biyan Tablets by HPLC
       PIAO Huishun, JIN Zaijiu, SHEN Yingai
       (Medical Research Centre,College of Pharmacy, Yanbian University, Yanji, Jilin 133000,China)
       Abstract:Objective:To establish the determination of Imperatorin Danxiang Biyan Tablets by HPLC.Methods:The determination was carried out by HPLC.The mobile phase was acetonirilewater(45∶55)and UV detection wavelength was set at 249 nm.The flow rate was 0.8 ml・min-1. The column temperature was 20℃.Results:In the range of 0.007 8～0.25 μg for Imperatorin, the coefficacy was 0.999 8 the average recovery was 98.6%(RSD=2.77%).Conclusion:The method was accurate and reliable. It could be used for determination in Danxiang Biyan Tablets.
       Key words:HPLC;  Danxiang Biyan Tablets;  Impetatorin
        胆香鼻炎片由广藿香、白芷、苍耳子、鹅不食草等9味中药组成。具有消炎清热，祛风散寒、通窍止痛功能。用于慢性单纯性鼻炎、过敏性鼻炎。白芷为方中主药之一，欧前胡素为白芷的主要有效成分，欧前胡素具有抗菌、抗炎、抗病原微生物作用［1，2］。关于白芷中欧前胡素成分的测定已报道多种方法［3，4］。本文在此基础上建立了高效液相色谱法对胆香鼻炎片中欧前胡素含量进行测定的方法，并以其为更好地控制胆香鼻炎片的内在质量提供实验基础。
       1  仪器与试药
       1.1  实验用仪器美国惠普HPll00高效液相色谱仪，HPll00色谱工作站；AS超声波清洗器(天津奥特恩斯仪器有限公司)；UV2201型紫外分光光度仪(日本岛津)。
       1.2  实验用试药胆香鼻炎片(吉林涌源药业股份有限公司，批号：040603，040604，040605)；欧前胡素对照品(上海友思生物技术有限公司，批号：040412)；乙腈(高效液相色谱纯)；其他试剂均为分析纯。
       　　2  实验方法与结果
       2.1  欧前胡素检测波长的选择取欧前胡素对照品适量，加甲醇制成每毫升中含50 μg的溶液，照紫外分光光度法，在200～500 nm波长范围内进行扫描，结果在249 nm波长处有最大吸收，故选定检测波长为249 nm。
       2.2  色谱条件色谱柱：HP ODSHypersil(4.6 mm×200 mm，5 μm)柱温：20℃，流动相：乙腈∶水(45∶55)，流速：0．8 ml/min，检测波长：249 nm。
       2.3  供试品溶液的制备取胆香鼻炎片5片，剥去糖衣后，研细，精密称取0.1 g，置磨口圆底烧瓶中，加氯仿50 ml,超声提取30 min，在水浴中挥干氯仿，残渣加甲醇溶解并定容于10 ml容量瓶中，摇匀，微孔滤膜过滤，即得。
       2.4  阴性对照实验为进一步考察实验设计及测定方法的可行性，取不含白芷的处方，按制备工艺制成缺白芷的阴性对照品，再按供试品溶液的制备方法项下制成阴性对照品溶液。精密吸取对照品、供试品及阴性对照溶液各5 μl注入高效液相色谱仪，按上述方法测定，结果表明阴性对照品的色谱图在欧前胡素相应的保留时间附近几乎无干扰峰(见图1～3）。
       2.5  标准曲线的绘制精密称取欧前胡素对照品一定量，加甲醇溶解并配成50.0，25.0，12.5，6.25，3.125，1.563 μg/ml溶液，分别取5 μl进样，以进样量(μg)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程为Y=57 243-1.330 6，r=0.999 8。结果表明欧前胡素在0.007 8～0.25 μg与峰面积积分值呈良好的线性关系。
       2.6  稳定性实验精密吸取同一供试品溶液，每隔1 h注入液相色谱仪各5 μl法测定5次，以欧前胡素峰面积积分值为指标，测定其稳定性。结果见表l。表1  稳定性考察进样（略）
 
    结果表明，供试品溶液在5 h内稳定。
       2.7  精密度实验精密吸取欧前胡素对照品溶液，重复进样5次，5 μl/次，以欧前胡素峰面积积分值为指标，测定其精密度，结果平均值为175.118，RSD=0.740％，表明，本实验方法精密度较高。
       2.8  重现性实验精密称取同一批(批号：040605)样品5份，按供试品溶液项下制备，依法测定，计算样品含量，以考察本法的重现性，结果欧前胡素的平均含量为0.584(mg/g)，RSD为2.82％，本法重现性良好。
       2.9  加样回收率实验精密称取已知含量(0.584 mg/g)的样品共5份，分别精密加入0.030 mg欧前胡素对照品，按2.3项下方法操作并按2.2条件测定，计算加样回收率。结果见表2。表2  回收率实验样品称样量（略）
       结果表明，本法平均回收率为98.6％，RSD=2.77％，表明本法准确度较好，方法可行。
       2.10  样品含量测定取3批样品，按2.3项下的方法制备供试品溶液，每批两份，分别精密吸取供试品溶液5 μl注入液相色谱仪中，测定峰面积积分值，计算3批样品的含量。结果见表3。表3  3批样品中欧前胡素的含量测定结果（略）
       　　3  讨论
       3.1  流动相的选择分别选择乙腈水(55∶45)，乙腈水(45∶55)，甲醇水(62∶38)作为流动相进行实验，结果发现以乙腈水(45∶55)为流动相时被测物分离效果较好，杂质干扰少，故选择其为本法的流动相。
       3.2  供试品制备时选用两个提取溶剂，即一个是醋酸乙酯，另一个是氯仿，分别超声振荡提取处理，结果以氯仿提取时欧前胡素含量较高，杂质量少，重现性好，故选择氯仿为提取溶剂。
       3.3  本法简单可靠，易于操作，重现性好，可作为胆香鼻炎片的质量控制的有效方法。
       　参考文献：
       ［1］黄泰康.常用中药成分与药理手册［M］.北京：中国医药科技出版社，1995：752752.
       ［2］张富强，聂红，韦艺，等.白芷的化学与药理研究进展［J］.南京中医药大学学报(自然科学版)，2002，18(3)：190192.
       ［3］张丽英，任艳春，仲昭庆，等.白芷中欧前胡素的含量测定［J］.中医药信息，2002，19(4)：2424.
       ［4］温莉萍，王秀兰，郜宁.HPLC测定通窍鼻炎胶囊中欧前胡素的含量［J］.华西药学杂志，2003，18(1)：6566.
       作者简介：朴惠顺(1964)，女(朝鲜族)，吉林延吉人，现任延边大学药学院医药研究中心高级工程师，硕士学位，主要从事天然药物化学及中药制剂研究工作.
       (延边大学药学院医药研究中心，吉林 延吉  133000)
       收稿日期：20050314