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       【关键词】  分光光度法
        摘要：目的：运用分光光度法测定茯苓药材中有效成分总三萜的含量，从而控制药材质量。方法：以药材中有效成分多孔菌酸C为对照品，用50 mg・ml-1香草醛―冰乙酸溶液、高氯酸显色，在540 nm波长处测定样品吸收度。结果：多孔菌酸C在17.6～52.8 μg线性范围内，线性关系良好，其回归方程为：A=656.9C×10-5+0.003，r＝0.995 2。结论：该方法操作简便，结果稳定，重现性好，可作为茯苓药材质量的有效监控手段。
        关键词：分光光度法；多孔菌酸C；总三萜；含量测定；茯苓
        Determination of Total Triterpenes from Poria cocos(Schw.)Wolf by Spectrophotometry
        YI Zhonghong1,2,3, ZHENG Yimin1,2,3,  XU Xiuying1,2, FU Shanquan1,2
        (1.College of Bioengineer，Chongqing Institue of Technology ，Chongqing 400050，China; 2.Chonging Academy of Chinese Materia Medica，Chongqing 400065，China; 3.College of Chemistry and Chemical Engineering，Chongqing University，Chongqing 400044，China)
        Abstract:Objective:To establish a new method for the determination of total triterpenes from Poria cocos. Methods:Total triterpenes was measured by spectrophotometry with 50 mg・ml-1 vanillin-glacial acetic acid solution and perchloric acid as color-developing agent and detected at 540 nm wavelegth.Results:The calibration curve was linear (r=0.995 2) in the range of 17.6～52.8 μg and the curve was A=656.9C×10-5+0.003.Conclusion:The spectrophotometry is suitable for the determination of total triterpenes from Poria cocos.
        Key words:Poria cocos;Total triterpenes;Spectrophotometry;Polyporenic acid C;Content determination
        茯苓为多孔菌科真菌茯苓Poria Cocos (Schw.) Wolf的干燥菌核，为常用中药材。茯苓中主要含有茯苓聚糖、三萜、树胶、蛋白质以及脂肪酸等［1］。中外学者对茯苓的化学成分及生物活性进行研究，发现其所含的大量三萜类物质具有免疫调节、抗肿瘤、拮抗醛固酮，诱导分化白血病细胞系HL―60等药理活性［2］。建立茯苓三萜类的分析测定体系对于茯苓药材内在质量的控制具有重要意义。参考文献［3］并加以改进，建立了测定茯苓中有效成分总三萜类含量的比色法。该方法简便、快速，为中药材茯苓的质量控制提供科学依据。
           1仪器与试药
        1.1仪器7530G型紫外可见分光光度计(安捷伦科技上海分析仪器有限公司)。
        1.2试剂甲醇、高氯酸、冰醋酸和香草醛均为分析纯。
        对照品：多孔菌酸C (polyporenic acid C, 自制)；采用乙醇提取、醋酸乙酯萃取、硅胶柱层析和高效液相色谱制备等方法精制得到白色柱状晶体，经UV、IR、NMR、MS等鉴定为多孔菌酸C，经HPLC归一化法确认其纯度大于98.0％，可供含量测定用。
           2方法与结果
        2.1对照品溶液的制备精密称取多孔菌酸C对照品2.2 mg，置于25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。
        2.2测定波长的选择将多孔菌酸C对照品加显色剂后(同标准曲线项下方法)，于紫外可见分光光度计上扫描，多孔菌酸C在540 nm处有一吸收峰且空白对照无干扰，故确定 540 nm为测定波长（见图1）。
        图1对照品的吸收光谱图
        2.3显色剂使用条件的选择
        2.3.15％香草醛冰醋酸用量考察精密吸取多孔菌酸C对照品溶液0.2 ml 5份，水浴蒸干后各加5％香草醛冰醋酸0.1，0.2，0.3，0.4，0.5 ml，然后再各加高氯酸1.8 ml，于70℃中加热20 min，取出置冰水中冷却，加冰醋酸5 ml，摇匀后在540 nm处测定吸收值，结果见表1。
        表1不同香草醛用量结果5％香草醛（略）
        2.3.2高氯酸用量考察取多孔菌酸C对照品液0.2 ml 6份，水浴蒸干，各加5％香草醛―冰醋酸0.4 ml，再分别加高氯酸1.0，1.2，1.4，1.6，1.8，2.0 ml，于70℃水浴中加热20 min，取出置冰水中冷却，加冰醋酸5 ml，摇匀后在540 nm处测定吸收值，结果见表2。
        表2不同量高氯酸测定结果高氯酸量V/ml  （略）
        2.3.3水浴温度考察吸取多孔菌酸C对照品溶液0.2 ml 6份，同上法分别在40，50，60，70，80，90℃测定吸光度值，结果见表3。
        表3不同温度考察结果显色水浴温度T/℃  （略）
        2.3.4水浴时间的选择吸取多孔菌酸C对照品溶液0.2 ml 6份，同上法分别在5，10，15，20，25，30 min条件下观察、测定，结果见表4。
结果表明，水浴时间20 min为最佳时间。
        2.4标准曲线的制备精密吸取上述对照液0.2，0.3，0.4，0.5，0.6 ml，分别置具塞试管中，水浴挥去溶剂，冷却，准确加入0.4 ml 5％香草醛-冰醋酸溶液和1.8 ml高氯酸 ，混匀，密塞。置70℃恒温水浴中加热20 min，取出，冷却至室温，加冰醋酸5 ml，摇匀，在540 nm处测定吸光度，以试剂为空白。以吸光度为纵坐标，多孔菌酸C微克数为横坐标作标准曲线，回归方程为：Y＝656.9×105X+0.003，r＝0.995 2，线性范围为17.6～52.8 μg。
        2.5稳定性实验取供试品溶液，按含量测定项下分别在0～60 min内进行测定，显示在5～30 min内稳定，RSD为2.52％；30 min稳定性开始下降。表明：该方法测定需在显色后5～30 min内完成。
        2.6精密度考察取供试品溶液，按含量测定项下测定，RSD为0.93％。
        2.7回收率测定精密称取茯苓粉末(过40目筛)0.3 g分别加入对照品2.1 mg 6份，按“2.8”项下操作，测得回收率，结果见表5。
        表4不同时间考察结果时间t/min  （略）
        表5回收率测定结果取样量相当于多孔菌酸C/μg （略）
           3讨论
   
    茯苓中总三萜是其有效成分，对此的测定未见文献报道。冰醋酸一香草醛、高氯酸比色法是测定三萜类化合物常用方法，但其影响因素较多．试剂的用量、反应时温度以及反应后放置时间等因素影响较为显著。本实验结果表明：若在实验中严格控制反应条件，其结果仍较稳定，重现性好，可作为茯苓药材的质量控制手段。
           参考文献：
        ［1］国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草，上册［M］.上海：上海科学技术出版社，1999：554554.
        ［2］仲兆金，刘浚.茯苓有效成分三萜的研究进展［J］.中成药，2001，23（1）：5862.
        ［3］薛祥骥，李平池，丁煜，等.绞股蓝中皂苷和黄酮的含量分析［J］.中国中药杂志，1994，19(3)：142143.
        (1.重庆工学院 生物工程学院400050；2.重庆市中药研究院400065；3.重庆大学化学化工学院400044)