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       【摘要】 
       目的分析比较广西不同产地、不同加工方法山银花中绿原酸含量。方法采用高效液相色谱法(HPLC)进行测定。色谱柱为ODS-2 HYPERSIL (250 mm×4.6 mm,5μｍ),流动相为乙腈-0.4%磷酸(12∶88)，检测波长327 nm。结果绿原酸在0.25～2 μg范围内线性关系良好(r=0.999 90)，样品平均回收率为100.6%，RSD=2.98%（n=6）。结论南宁九塘、罗城怀群乡、罗城龙岸乡、融水杆桐乡的山银花绿原酸的含量较高；以脱水加工的山银花中绿原酸含量最高，蒸干、熏硫的次之。
       【关键词】  山银花 绿原酸 高效液相色谱
       Comparison of the Chlorogenic Acid Content of Flos Lonicerae with Different Origins and Different Processing Methods
       WANG Liuping, XIN Ning, ZHANG Shouping, PENG Yingkui, OUYANG Mingxiu
       1.Guangxi Traditional Chinese Medical University,  Nanning 530001, China;
       2.Dong"e Ejiao Company Limited, Shandong Liaocheng 252201, China
       Abstract：ObjectiveTo compare the chlorogenic acid content of Flos Lonicerae with different origins, different processing methods.MethodsExperiments were performed on ODS-2 HYPERSIL column (250 mm×4.6 mm,5 μｍ).The mobile phase was acetonitrile-0.4% H3PO4(12:88),and the detection wavelength was 327nm.ResultsThe standard curve of chlorogenic acid was linear with the regression coefficient of  0.999 90 in the testing range of 0.25～2μｇ.The average recovery was 100.6%,with RSD of 2.98%(n=6). ConclusionContent of chlorogenic acid in Flos Lonicerae from Jiutang，Huaiqun of Luocheng,Longan of Luocheng,Rongshui of Liuzhou was relatively higher.Chlorogenic acid in dehydrated Flos lnicerae was relatively higher,the steamed and the one smoked with sulphur followed.
       Key words：Flos Lonicerae；  Chlorogenic acid；  HPLC
       
       山银花为忍冬科植物灰毡毛忍冬 Lonicera macranthoides Hand.-Mazz.、红腺忍冬 Lonicera hypoglauca Miq.或华南忍冬 Lonicera confusa DC的干燥花蕾或带初开的花。夏初花开放前采收、干燥，在我国大部分地区均有分布。绿原酸为山银花中的主要有效成分，它是评价山银花质量优劣的主要指标之一，《中国药典》规定山银花中绿原酸的含量不得低于1.5%［1］。山银花为常用中药，性味甘寒，具有清热、解毒、凉散风热的功效。主要用于痈肿疔疮、喉痹、丹毒、热血毒痢、风热感冒等［2］。广西为山银花药材商品的主产区之一。本文采用HPLC法对广西不同产地、不同加工方法的山银花进行含量比较,为开发广西山银花的生药资源及进一步研究提供参考。
       1 仪器与试剂
           
       美国Agilent HP1100高效液相色谱仪；梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司AE100型电子分析天平；KQ-250型超声提取器；美国MILLIPORE公司Simplicity185超纯水系统；甲醇、乙腈为色谱纯，其余实验试剂均为分析纯，水为超纯水。绿原酸对照品，购自中国药品生物制品检定所，供量测定用。山银花样品分别采集于南宁九塘、马山县加芳乡、都安县龙湾乡、横县陶圩镇、罗城龙岸乡、罗城怀群乡、融安泗顶乡、融水杆桐乡、忻城北更乡、上林县，加工方法分别为熏硫、蒸干、阴干、脱水，山银花药材经广西中医学院刘寿养副教授鉴定均为忍冬科植物红腺忍冬Lonicera hypoglauca Miq.。
       2  方法与结果
       2.1  色谱条件色谱柱为美国Thermo ODS-2 HYPERSIL（4.6 mm×250 mm,5 μm）；流动相为乙腈-0.4%磷酸(12:88)；流速：1 ml/min；柱温：30℃；检测波长327 nm；进样量10 μl；理论塔板数按绿原酸峰计算应不低于1 000。
       2.2 对照品溶液制备精密称取绿原酸对照品10.0 mg，置50 ml棕色瓶中，用50%甲醇溶液溶解并定容至刻度，摇匀，备用。
       2.3  供试品溶液的制备精密称取山银花药材粉末(过4号筛)0.5 g，精密加入50%甲醇50 ml，称定重量，浸泡10 min，超声提取30 min，放冷，称重，用50%甲醇补足损失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 ml，置25 ml量瓶中，50%甲醇定容，0.45 μm滤膜滤过，备用。
       2.4  线性关系考察以浓度0.2 mg/ml的对照品溶液为原液，分别稀释成0.025，0.05，0.10，0.15 mg/ml的溶液，每个浓度进样10 μl，以峰面积（A）对浓度（C）进行线性回归，得回归方程为：A=19 383.83C-25.25，线性范围为0.25～2.00 μg，相关系数r=0.999 90。
       2.5  精密度实验取对照品溶液10 μl，连续进样6次，对峰面积进行考察，峰面积的RSD为0.41%，说明精密度良好。
       2.6  稳定性实验取同一份供试品溶液，于配制后0，2，4，6，12，24 h依法测定，对峰面积进行考察，峰面积的RSD为0.48%，表明样品在24 h内稳定。
       2.7  重复性实验取同一批样品6份，按“2.3”项下制备供试品溶液，在上述色谱条件下分别测定峰面积，峰面积的RSD为0.22%，表明重复性良好。2.8   加样回收率实验精密量取已知绿原酸含量的山银花样品提取液6份，分别精密加入绿原酸标准液，各进样10 μl，测定峰面积，计算加样回收率，结果平均回收率100.6%；RSD=2.98%，表明本方法准确度较好。
       2.9  样品的测定取广西不同产地及同一产地不同加工方法的山银花药材粉末，按“2.3”项下制备供试品溶液，测定绿原酸含量。结果见表1～2。表1  广西不同产地山银花中绿原酸含量（略） 表2  广西不同加工方法山银花中绿原酸含量（略）
       3 讨论
           
       实验表明，广西不同产地的山银花中绿原酸含量有很大差别。其中，南宁九塘、罗城怀群乡、罗城龙岸乡、柳州融水的山银花中绿原酸的含量较高；马山、上林和忻城的次之。而作为广西山银花主产区的马山、忻城山银花中绿原酸含量虽不是最高的，但其绿原酸含量均高于《中国药典》要求。
        
       山银花的加工技术是影响其中绿原酸含量高低的一个重要因素。热风干燥脱水技术是近年来在山银花加工中的一项新技术、新方法，该技术不但改革了传统熏硫、蒸干、阴干等加工技术效率低、耗时、产品外观色泽不理想等缺点，而且加工出来的山银花内在质量稳定，产品外观色泽金黄，保证了山银花的药效及药用安全，故该技术值得在产地进一步推广使用。
       【参考文献】
         　　［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［J］.北京:化学工业出版社，2005:152.
       
       ［2］李 仕,崔 瑛.金银花药理作用比较［J］.中药材,1999.22(1):37.