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       【摘要】 
       目的分析测定芒果苷原料药中高芒果苷的含量。方法采用C18柱（大连依利特分析仪器有限公司，Hypersil ODS 5 μm，4.6 mm×250 mm），流动相为甲醇-0.1％磷酸(32∶68)，流速1 ml/min，检测波长258 nm。结果高芒果苷在0.042 4～0.848 μg范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系（r =0.999 9），平均回收率为97.8%，RSD=2.2%(n=6)。结论该方法简便，灵敏，重复性好，可作为芒果苷原料药中高芒果苷的含量测定方法。
       【关键词】  高芒果苷 芒果苷原料药 高效液相色谱
       Determination of Impurity of Homomangiferin in Raw Medicine of Mangiferin by HPLC
       FENG Xu, DENG Jiagang, QIN Jieping,XI Jiaxi，ZHONG Weidong, WANG Shengbo
       （Guangxi Traditional Chinese Medical University, Nanning 530001, China）
       Abstract：ObjectiveTo determine Homomangiferin in raw medicine of Mangiferin by HPLC.MethodsHomomangiferin was separated on Hypersil ODS 5μm column (4.6 mmID×250 mm) with a mobile phase of methanol-0.1% phosphoric acid solution (32∶68) and detected at a wavelength of 258 nm.  ResultsThe calibration curve was linear in the range of 0.042 4～0.848μg (r=0.999 9). The average recovery rate was 97.8% and RSD=2.2% (n=6). ConclusionThe method is simple, sensitive and precise. It can be used for the determination of Homomangiferin in raw medicine of Mangifierin.
       Key words：Raw medicine of Mangiferin；  The content of Homomangiferin；  HPLC
       
       芒果苷(mangferin)是一种四羟基吡酮的碳糖苷，属双苯吡酮类黄酮类化合物，在多种植物中存在，如漆树科芒果树(Manifera indica )，扁桃树(Mangifera periscformis）的叶、果实、树皮等。现代药理研究表明，芒果苷具有抗氧化、抗细菌、抗病毒、免疫调节及抗肿瘤等多方面的生理活性和药理作用［1，2］。目前，“广西特色药用资源芒果叶深加工关键技术及产品的研究”已经被列入国家科技攻关“西部开发”计划项目。芒果苷原料药是从芒果叶中提取的高纯度芒果苷，拟进一步开发成具有抗病毒等作用的新药。在进行芒果苷原料药的成分分析时，在其高效液相色谱图中除芒果苷峰外，还有一个在各批次原料药中反复出现的杂质色谱峰，其峰面积占相当比例且保留时间固定。该杂质经制备色谱分离纯化，并用紫外光谱、红外光谱、核磁共振波谱、质谱等方法确定其结构为高芒果苷（Homomangferin），其分析方法将另文发表。本文采用HPLC法分析测定芒果苷原料药中杂质高芒果苷的含量，为控制芒果苷原料药的质量提供实验依据。
       1  仪器与试药
       美国Agilent 1100 Series高效液相色谱仪：四元泵、在线脱气机、自动进样器(G1313A)、柱温箱、可变波长检测器，超纯水系统(MILLIPORE)，SB3200-T超声清洗仪（功率：250W，频率50 kHz）［必能信超声（上海）有限公司］。甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为高纯水。高芒果苷对照品（由制备色谱分离得到，并经UV，IR，NMR，MS鉴定为高芒果苷，经HPLC按峰面积归一化法检查纯度为100%）。芒果苷原料药从芒果叶中提取得到，为本院自制。
       2  方法与结果
       2.1  色谱条件C18柱（大连依利特分析仪器有限公司，Hypersil ODS 5 μm，4.6 mm×250 mm），流动相：甲醇-0.1％磷酸(32∶68)，流速1ml/min，柱温30℃，检测波长258 nm。进样量10 μl。理论塔板数以高芒果苷峰计应不低于2 000。结果见图1～3。
       2.2  对照品溶液的配制精密称取高芒果苷对照品10.60    mg，置25 ml量瓶中，加40％甲醇溶解并定容至刻度，即得高芒果苷对照品储备溶液。
       2.3  供试样品溶液的制备取芒果苷原料药粉末约15 mg，精密称定，置25 ml量瓶中，加入40％甲醇溶解，稀释至刻度，摇匀，0.45μm滤膜滤过，即得。
       2.4  线性关系考察精密吸取高芒果苷对照品储备液各0.1，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0 ml置10 ml量瓶中，加40％甲醇稀释至刻度，配置成系列浓度对照品液，按“2.1”项下色谱条件测定峰面积。以峰面积A对进样量m(μg)进行回归，得标准曲线：A=4141.08 m-0.810，r=0.999 9，其线性范围为0.0424～0.848 μg。
       2.5  精密度实验取对照品溶液，连续进样6次，对峰面积进行考察，峰面积的RSD为0.11%，说明仪器精密度很好。
       2.6  稳定性实验取同一份供试品溶液，分别于0，1，2，4，6，12 h不同时间间隔点进样分析，对峰面积进行考察，峰面积的RSD为0.13%，结果表明样品溶液在12 h稳定。
       2.7  重复性实验取同一芒果苷原料药粉末6份精密称定，分别按“2.3”项下供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下分别测定其色谱图，并计算其高芒果苷的含量，结果高芒果苷的平均含量为72.3 mg/g，RSD为1.3％（n=6），说明该法重复性较好。
       2.8  加样回收率实验精密称取已知高芒果苷含量的芒果苷原料药粉末6份各7.5 mg，分别精密加入高芒果苷对照品储备液1.25 ml，其余操作同“2.3”项中的方法，精密吸取10 μl注入高效液相色谱仪，按所设定的HPLC条件进行测定，结果表明高芒果苷平均回收率为97.8%，RSD=2.2%(n=6)，说明本方法准确度较好。结果见表1。表1  高芒果苷加样回收率实验结果 （略）
       2.9  样品测定取芒果苷原料药粉末，按“2.3”项下方法制备各供试品溶液。取高芒果苷对照品溶液和供试液各10 μl，注入高效液相色谱仪，按所设定的HPLC条件进行测定，每个样品重复测定3次，按外标法计算各样品中高芒果苷的含量。结果见表2。表2  芒果苷原料药样品中高芒果苷含量测定结果（略）
       3  讨论
           
       高芒果苷与芒果苷的分子量接近，结构相似，物理化学性质都较相近，分离较困难。在分析测定中发现，各批次芒果苷原料药中均含有高芒果苷，只是含量不同。目前关于高芒果苷的药效学研究尚未见报道，因此无法确证其功效。今后应在其药理毒理方面进行更深入地研究，并寻找其含量与主要药效作用间的相关性，在此基础上建立其含量控制指标，这对于控制芒果苷原料药质量、提高制剂工艺水平以及临床用药的安全有效具有重要的意义。
        
       将高芒果苷对照品溶液在200～800 nm范围进行扫描，结果高芒果苷的最大吸收波长为258 nm，故选择258 nm作为高芒果苷的检测波长。
       从分析结果可知，各批次芒果苷原料药中高芒果苷的含量差别较大，原因可能与不同批次芒果叶原料中高芒果苷含量不同有关，也可能与提取工艺不够稳定有一定的关系。今后应从芒果叶原料和提取纯化工艺方面寻找可能造成杂质高芒果苷含量不一的原因，以进一步提高芒果苷原料药质量的稳定性。
       【参考文献】
         　　［1］邓家刚，郑作文，曾春晖.芒果苷的药效学实验研究［J］.中医药学刊，2002,20(6):37.
       
       ［2］黄 潇，彭志刚.芒果苷药理作用研究概况［J］.中国药师,2007,10(1):73.