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       【摘要】 
       目的研究维吾尔药牛舌草中总黄酮的最佳提取工艺。方法采用正交实验确定各因素的影响大小，确定维吾尔药牛舌草中总黄酮的最佳提取条件，通过紫外分光光度法测定总黄酮含量。结果乙醇浓度对维吾尔药牛舌草中总黄酮的提取影响作用最大，牛舌草中总黄酮的最佳提取工艺为：乙醇75%；料液比1∶6；温度90℃ ；提取2次，1.5 h/次 。结论该研究可为牛舌草总黄酮工业化提取提供理论依据。
       【关键词】  牛舌草 总黄酮 正交实验 提取工艺
       Study on Extraction Process of Total Flavonoids in Anchusa italica Retiz
       MUHTAR Nurmammat1,YANG Wuliang2*，TURGUN Amar1，
       GUNQAM Nasir,YU Baojin,MAMAT Nurahmat
       1.Xinjiang Weiwuer Medical College,Hetian,Xinjiang 848000,China;
       2.The Key Lab for Modern Traditional Chinese Medical Preparation of Ministry of Education in Jiangxi College of TCM,Nanchang,Jiangxi 330004,China
       Abstract:ObjectiveTo optimize the extraction process of total flavonoids in Anchusa italica Retiz．MethodsThe content of total flavonoids was determined by UV spectrophotometer．The influence of each factor was measured by orthogonal experiments． ResultsThe concentration of ethanol had the greatest effect on the extraction of total flavonoids．The optimal condition was as follows：75% ethano1，90℃，1∶6(W/V)and extracting 2 times(1.5 h each time)．ConclusionThis study provides the theory basis for the industrial production．
       Key words:Anchusa italica Retiz；  Total flavonoids；  Orthogonal experiment；  Extraction process
       
       维吾尔药材牛舌草为紫草科植物意大利牛舌草Anchusa italica Retiz．或琉璃苣Borage officinales L.的地上部分，维吾尔医治疗心脑血管疾病的常用药材之一，具有生湿生热、调节异常黑胆质、生湿补脑、祛寒补心、爽心悦智、润燥消炎、止咳平喘等功效［1］。意大利牛舌草经预试内含有黄酮等多种化合物，但目前未见深入研究的报道。黄酮类化合物许多研究已表明生物类黄酮具有多种生物活性［2］，除有抗菌、消炎、抗突变、降压、清热解毒、镇静、利尿等作用外，在抗氧化、抗癌、防癌、抑制脂肪酶等方面也有显著效果［3］。由于黄酮类化合物的这些生物活性使得对它的研究进入了一个新的阶段，掀起了黄酮类化合物的研究、开发及利用热潮。
        
       黄酮类化合物的提取方法一般有水煎法［4］、碱提酸沉法和有机溶剂提取法。水煎法和碱提酸沉法会带入大量水溶性杂质，对以后的纯化和分离工作带来诸多不便。由于有机溶剂的提取方法具有工艺简单、效率高和较经济等优点［5］,本文对用有机溶剂提取意大利牛舌草中黄酮类化合物的工艺进行了研究，旨在为其工业化提取提供理论依据。
       1  器材
       1.1  仪器
       111-型二两装高速中药粉碎机（浙江瑞安环球药械厂）；SHB-III循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)；旋转蒸发器(上海申生科技有限公司)；U-3000紫外分光光度计（日本HITACHI公司）。
       1.2  试药
       意大利牛舌草，购自新疆和田地区维吾尔药材市场，经新疆维吾尔自治区药物研究所标本室张彦福研究员鉴定为意大利牛舌草（Anchusa italica Retiz．），粉碎后过20目筛备用。95%医用乙醇；芦丁标准品(中国药品生物制品鉴定所，含量测定用，批号0080-9705)；亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、乙醇均为分析纯。
       2  方法与结果
       2.1  标准曲线的制备准确称取芦丁标准品10 mg，置50 ml容量瓶中，加70%的乙醇溶解并稀释到刻度，配制成浓度为0.2 mg·ml-1 的芦丁标准液。精密量取配制好的芦丁标准液0，0.2，0.5，1. 0，2.0，3.0，4.0 ml，分别装入10 ml容量瓶中，加5%亚硝酸钠0.4 ml，放置6min后加入10%硝酸铝溶液0.4 ml，放置6 min，再加入4%的氢氧化钠溶液4 ml，加水至刻度，摇匀，放置15 min后在500 nm波长处进行比色测定，以吸光度(A)为纵坐标、芦丁标准品浓度(C)为横坐标作线性回归，得方程为A=9.440 5C-0.009 4 (r=0.999 7)。
       2.2  提取条件的研究及结果
       2.2.1  提取方法及溶剂的确定取牛舌草粉碎后过20目筛，备用。在对常用的溶剂提取法（水提法和醇提法）进行对比实验后发现，牛舌草含大量黏液质用水提取有一定的困难，采用乙醇提取法提去牛舌草中的总黄酮效果较好。
       2.2.2  温浸法正交实验设计为了进一步找出乙醇提取的最佳试验条件，将乙醇浓度(A)、提取温度(B)、提取次数(C)、料液比(质量比)(D)、提取时间（E）5个因素进行正交实验设计。实验因素水平见表1。表1  实验因素水平（略０
       采用L16（45 )正交表进行实验，以总黄酮含量为考察指标。具体步骤如下：精密量取提取液0.5 ml，置于10 ml容量瓶中按标准曲线的制备方法测定吸光度，通过标准曲线，得其含量。实验结果见表2～3。
        
       通过对实验误差的计算，并以实验误差去检验各因素的显著性，最后经方差分析可知，影响总黄酮提取的因素为A>C>B>E>D，即乙醇浓度>提取次数>温度>提取时间>料液比。其中，A因素对实验均有显著影响，B，C，D，E因素对考察指标无显著性影响，故确定最佳提取工艺为A3B4C2D1E3 ，即乙醇浓度75%、温度90℃、提取次数为2次、料液比为1∶6、提取时间为1.5 h为优选提取工艺。
       3  讨论
           
       由表2～3可知，首先，乙醇浓度对牛舌草中总黄酮提取率影响最大，乙醇浓度高，极性小的黄酮类化合物易得；乙醇浓度较低，极性大的黄酮类化合物易得，故选取75%乙醇为最优。其次，提取温度对提取的影响仅次于乙醇浓度，温度升高总黄酮的含量随之增加，但达到一定程度即增速缓慢，且消耗能源。由于本试验中使用的料液比值较大，提取很充分，所以其影响力较小。一般来讲，增加液料比有利于牛舌草中黄酮的提取，但液料比过大不仅增加乙醇消耗且回收难度大。表2  正交实验设计和结果（略）表3  方差分析结果（略） 
       本实验采用正交实验的方法对牛舌草中总黄酮的提取条件进行了优选，正交实验方差分析表明，影响总黄酮提取的因素为：乙醇浓度>提取次数>温度>提取时间>料液比。确定最佳提取工艺为乙醇浓度75%、温度90℃、提取次数为2次、料液比为1∶6，提取时间为1.5 h。优选出的提取工艺结果重复性好，回收率高，操作简单，结果可靠。这为牛舌草中总黄酮的进一步研发提供了很好的参考。
       【参考文献】
         　　［1］阿布热依木·卡地尔.中华本草·维吾尔药分卷［M］.上海：上海科学技术出版社，2005：99.
       
       ［2］肖坤福，廖晓峰．黄酮类化合物研究进展及应用［J］.食品研究与开发，2003，4：14.
       
       ［3］张萍，王玉珠，李红宁，等. 荞麦中生物类黄酮的提取方法研究［J］.食品研究与开发，2007,28(2)：45.
       
       ［4］姚新生，吴立军，吴继洲．天然药物化学，第4版［M］.北京：人民卫生出版社，2003：173．
       
       ［5］王立娟，李 坚，张丽君，等．山楂籽中黄酮类化合物最佳提取工艺［J］.东北林业大学学报，2002，30(5)：56．