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       【关键词】  高效液相色谱法
        摘要：目的：建立复方风湿丸中士的宁和马钱子碱含量测定的高效液相色谱法。方法：色谱柱Diamonsil C18(4.6 mm×200 mm,5 μm)；流动相为：甲醇乙腈水冰醋酸(45∶30∶25∶0.5)；检测波长254 nm；流速1.0 ml/min。用硅胶固相萃取的样品预处理方法提取复方风湿丸中的士的宁和马钱子碱。结果：士的宁浓度在10～100 μg/ml，马钱子碱浓度在6～60 μg/ml范围内线性关系良好。士的宁r=0.999 5,平均回收率99.55%，RSD为1.01%；马钱子碱r=0.999 7，平均回收率99.73%，RSD为1.05%。结论：该方法检测结果准确，重现性好，能有效地控制复方风湿丸的质量。
        关键词：高效液相色谱法；复方风湿丸；士的宁；马钱子碱；含量
        Determination of the Contents of Strychnine and Brucine in Compound Fengshi Pills with HPLC
        TIAN Hua, LI Yuanhong, ZHU Jiancheng
        (Department of Pharmacy,Taihe Affiliated Hospital,Yunyang Medical College,Shiyan442000)
        Abstract:Objective:To establish the HPLC method for detemination of strychnine and brucine in compound Fengshi Pills.Methods:HPLC was performed on Diamonsil C18(4.6 mm×200 mm,5 μm)with methanolacetonitrileHAC(45∶30∶25∶0.5)as mobile phase.Detecting wavelength was 254 nm and flow rate was 1.0 ml/min.Strychnine and Brucine in compound Fengshi Pills were extracted by silica gel solidphase extraction method.Results:Linear ranges of Strychnine and Brucine were 10～100 μg/ml and 6 μg/ml～60 μg/ml respectively.The recovery rates of strychnine and brucine were 99.55%(RSD=1.01%)and 99.73%(RSD=1.05%)respectively.Conclusion:This method is accurate,repeatable and effective for quality control of compound Fengshi Pills.
        Key words:Compound Fengshi Pills;Strychnine;Brucine;Content
        复方风湿丸由马钱子、乳香、川牛膝等中药经工艺优选后精制而成；具有祛风、通络、活血散结的功效；主治类风湿性关节炎、坐骨神经痛等顽症。马钱子为方中主要药味之一，其毒性大，安全范围窄，过量常会导致惊厥、抽搐、昏迷等严重的神经系统不良反应。为保证临床用药的安全性、有效性，笔者对复方风湿丸中的士的宁和马钱子碱含量测定采用硅胶固相萃取的样品预处理方法和高效液相色谱法，取得满意效果。
           1仪器与试药
        1.1仪器日本岛津LG6A高效液相色谱仪，SPD2AM紫外分光检测器，CR记录仪，色层分析柱(25 mm×30 cm)。
        1.2试药士的宁和马钱子碱对照品(中国药品生物制品检定所)，复方风湿丸由中药制剂室提供，层析用硅胶(100～140目)，甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
        2方法与结果
        2.1色谱条件色谱柱为：Diamonsil C18(4.6 mm×200 mm，5 μm)；流动相为：甲醇乙腈水冰醋酸(45∶30∶25∶0.5)［1］；检测波长254 nm；流速1.0 ml/min。
        2.2对照品溶液的配制精密称取经五氧化二磷干燥剂干燥至恒重的士的宁和马钱子碱对照品各适量，用甲醇配成每1 ml中含士的宁2.50 mg和马钱子碱1.50 mg的贮备液。精密量取贮备液2 ml，置25 ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为对照品溶液。
        2.3线性关系精密量取上述对照品溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0和5.0 ml，置6只10 ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。精密吸取10 μl，注入高效液相色谱仪，每一浓度重复进样3次，求平均峰面积。以平均峰面积(Y)为纵从标，浓度(X)为横坐标，进行线性回归，得回归方程为：士的宁Y=7 475 621.5X+294 236.8(r=0.999 5,n=6)马钱子碱Y=4 896 612.8X+88 974.2(r=0.999 7,n=6)结果表明，士的宁浓度在10～100 μg/ml，马钱子碱浓度在6～60 μg/ml范围内线性关系良好。
        2.4精密度考察精密吸取对照品溶液在日内及日间重复进样6次，测得士的宁的日内及日间RSD分别为1.12%及1.21%；马钱子碱的日内及日间RSD分别为1.15%及1.18%。
        2.5加样回收率实验精密称取已知含量的同一批号样品5份，精密加入士的宁和马钱 子碱对照品，按照供试品溶液的制备方法制备、测定。结果见表1。
        2.6阴性对照实验按复方风湿丸的处方比例，取除马钱子外其它药味，依据复方风湿丸的制备工艺，制成阴性对照，按“样品测定”项下方法提取、测定，结果阴性对照液在马钱子碱和士的宁相应的位置上，均无吸收峰。
        表1回收率实验结果样品  (略)
        2.7样品含量测定精密称取复方风湿丸约0.5 g，置于具塞锥形瓶中，加入70%的甲醇水溶液10 ml，超声处理30 min，过滤，滤渣用适量甲醇洗涤，合并滤液，减压浓缩至2 ml后上样到硅胶固相萃取柱中(硅胶固相萃取柱为25 mm×30 cm的色层分析柱，固定相为100～140目的层析用硅胶，湿法装柱)，然后硅胶固相萃取柱用甲醇水(7∶3)洗脱。洗脱液经减压浓缩，浓缩液定容于10 ml容量瓶中，经0.45 μm滤膜过滤后，用微量进样器取10 μl注入高效液相色谱仪，另吸取对照品溶液10 μl注入色谱仪中，记录色谱图，按外标法计算含量。5个批号样品中士的宁和马钱子碱含量测定结果见表2。
        表2样品含量测定结果mg・g1批号（略）
           3讨论
        3.1因本丸药成分复杂，提取较困难，曾试用过超声处理样品30 min、有机溶剂萃取、高速离心等方法，可杂质多，影响测定。本实验最终采用了硅胶固相萃取的样品预处理方法提取样品，处理后的样品无杂质干扰，测定结果准确度高，重现性好。
        3.2流动相的酸碱度对出峰有一定影响，实验中发现，在酸性条件下，峰分离完好，碱性条件下较差。
           参考文献：
        ［1］宋金春，杨芰，张立. 复方马钱子片中士的宁和马钱子碱含量的测定［J］.医药导报，2002，21(2)：109110.
        (郧阳医学院附属太和医院，湖北 十堰442000)