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       【关键词】  高效液相色谱法
        摘要：目的：建立高效液相色谱(HPLC)法测定清金泻火泡腾颗粒中黄芩苷的含量。方法：采用Hypersil ODS2柱，以乙腈0.2%磷酸溶液(55∶45)为流动相，流速1.0 ml・min-1，检测波长277 nm。结果：在0.15~1.240μg范围内，黄芩苷进样量与吸收峰积分值呈良好的线性关系，平均回收率为99.72%，RSD为1.42%(n=5)。结论：该法测定清金泻火泡腾颗粒中黄芩苷的含量结果准确，重复性好。
        关键词：高效液相色谱法；清金泻火泡腾颗粒；黄芩苷；含量测定
        Determination of Baicaline in Qingjin Xiehuo Effervescent Granules by HPLC
        LAI Liangqing, XUE Xiuqing
        (The First Clinical College, Guangzhou University of TCM, Guangzhou 510405, China)
        Abstract:Objective:To determine the content of baicaline in Qingjin Xiehuo Effervescent Granules by HPLC.Methods:Baicaline was separated by Hypersil ODS 2 column using acetonitrile0.2% phosphoric acid solution (55∶45) as mobile phase, the flow rate was 1.0 ml・min-1 and the detection wavelength was 277 nm.Results:There was a good linear relationship between the concentration and peak area value of baicaline within range of 0.155~1.240 μg. The average recovery of this method was 99.72%, RSD was 1.42%(n=5).Conclusion:The method was highly reproducible and accurate.
        Key words:HPLC;Qingjin Xiehuo Effervescent Granules;Baicaline;Determination
        清金泻火处方由黄芩、栀子、大黄等几味药物组成，用于肺热咳嗽、咽喉肿痛、衄血、大便秘结等症。为了便于临床运用，将该方制备成新型泡腾颗粒剂。黄芩清热燥湿、泻火解毒，为方中君药，黄芩苷是主要有效成份［1］，其含量测定方法报道较多。本研究参考文献方法，建立了HPLC法测定黄芩苷含量的方法，方法学考察结果表明，该法稳定、准确、重现性好，可作为清金泻火泡腾颗粒的质控方法。
           1仪器与试药
        戴安高效液相色谱仪：Summit P680A泵，Summit PDA-100二级管阵列检测器；ASI-100自动进样器；Chromeleon色谱工作站；Shimadzu Libror AEL 40SM(十万分之一)天平(日本岛津)；H6605T超声清洗机(无锡超声电子设备厂)；黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号0715-200010)；乙腈为色谱纯，水为超纯水；其他试剂均为分析纯；清金泻火泡腾颗粒及缺味阴性制剂自制。
           2方法与结果
        2.1对照品溶液的制备精密称取60℃减压干燥4h的黄芩苷对照品适量，加甲醇溶解，制成每1 ml含黄芩苷62 μg的溶液，即得。
        2.2供试品溶液制备取本品约0.5 g，精密称定，置100 ml具塞锥形瓶中， 精密加入50%甲醇溶液50 ml，称定重量，超声处理30 min，放冷，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液1 ml，于2 ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得供试品溶液。
        2.3空白溶液的制备取缺黄芩阴性制剂按“2.4”方法，制备阴性空白对照溶液。
        2.4色谱条件及系统适用性实验Hypersil ODS 2柱(依利特，4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：乙腈0.2%磷酸溶液(55∶45)；检测波长277 nm；柱温为室温；流速1.0 ml・min-1分别取对照品溶液。样品溶液。阴性对照液注入色谱仪，记录色谱图。见图1黄芩苷峰保留时间约为11.3 min，阴性对照色谱图在黄芩苷峰位置无干扰峰，黄芩苷峰与其它组分达基线分离，分离度不低于2.0，理论塔板数以黄芩苷峰面积计算不低于4 000。
        2.5线性关系考察精密称取60℃减压干燥4 h的黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1 ml含0.155 mg的溶液。精密量取上述溶液1，2，4，6，8 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，分别吸取10 μl注入液相色谱仪，按色谱条件进行测定，以对照品进样量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标，进行回归处理，回归方程：Y=42.935 3X-0.394 8，r=0.999 9，说明黄芩苷在0.155～1.240 μg的浓度范围内线性关系良好。
        图1黄芩苷HPLC色谱图
        2.6精密度实验精密吸取上述对照品溶液，重复进样5次，黄芩苷峰面积积分值的RSD=0.48%。
        2.7稳定性实验取配制好的样品溶液，分别于2，6，9，12，24 h进行测定，结果RSD=0.83%，该样品溶液24h内稳定。
        2.8重复性实验精密称取同一批号样品5份，按样品测定方法测定，结果RSD=1.96%。
        2.9回收率实验采用加样回收法，精密称取已知含量(黄芩苷含量13.26 mg・g-1)的同一供试品5份，分别加入一定量的黄芩苷对照品，按样品测定方法进行测定，计算回收率。结果见表1。
   
    表1回收率测定结果样品量（略）
        2.10样品测定精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μl进样，读取峰面积值，按外标法计算含量，结果见表2。
        表2样品测定结果批号   黄芩苷含量C/mg・g-1   RSD(%)030508   13.26   1.56030516   14.15   1.84030524   13.64   1.43n=3
           3讨论
        在建立黄芩苷的HPLC测定方法过程中，对供试品溶液制备方法进行了优选，结果以50%甲醇50 ml超声提取30 min为优；根据文献方法［2，3］，对几种流动相及比例进行对比，结果以乙腈0.2%磷酸溶液(55∶45)最佳，黄芩苷峰形对称，保留时间适中。
           参考文献：
        ［1］王本祥.现代中药药理学［M］.天津：天津科学技术出版社，1997：299301.
        ［2］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2000：248248，418418.
        ［3］吕东，杨凤梅. HPLC测定润肺止咳胶囊中黄芩苷含量［J］.中成药，2003，25(7)：599600.
        (广州中医药大学第一临床医学院，广东 广州510405)