文章标题 全文   多个检索词，请用空格间隔。

       【关键词】  茵虎清肝颗粒
       摘要：目的：建立测定茵虎清肝颗粒中大黄素、大黄酚含量的方法。方法：采用高效液相色谱法，以Inertsil ODS3 C18柱为固定相，甲醇0.1％磷酸溶液(90∶10)为流动相，检测波长254 nm，流速1.0 ml/min，柱温室温。结果：大黄素在69.76～348.80 ng(r=0.999 6)，大黄酚在12.08～60.40 ng(r=0.999 9)范围内呈良好线性关系，平均回收率大黄素为98.97％，RSD为1.16%；大黄酚99.72%，RDS为2.06%。结论：该方法简便，准确，重现性好，可用于测定茵虎清肝颗粒中大黄素、大黄酚的含量。
       关键词：茵虎清肝颗粒；  大黄素；  大黄酚；  高效液相色谱法
       Determination of Emodin and Chrysophanol in Yinhu Qinggan Granules by HPLC
       WANG Lisheng1， ZHAN Jiankun2
       (1.College of Chinese Materia Medica，Guangzhou University of TCM，Guangzhou 510405，China; 2.Undergraduate Student of 2002 of Farmaceutic Engineering Subject, Guangzhou University of TCM, Guangzhou 510405, China)
       Abstract:Objective:To establish a method for determination of the contents of emodin and chrysophanol in Yinhu Qinggan Granules.Methods:HPLC medthod was selected to determine the contents of emodin and chrysophanol. The chromatographic conditions included lnertsil ODS3 C18column，methanol(0.1％)phosphoric acid solution(90∶10)as the mobile phase，wavelength of detector at 254 nm，flow rate 1.0 ml/min and column temperature at room temperature.Results:The calibration curves were linear over the range of 69.76～348.80 ng(r=0.999 6)for emodin and 12.08～60.40 ng(r=0.999 9) for chrysophanol；and the average recoveries were 98.97％(RSD=1.16％)and 99.72％(RSD=2.06％).Conclusion:This method is simple，accurate and reliable，which could be used for determination of the contents of emodin and chrysophanol in Yinhu Qinggan granules.
       Key words:Yinhu Qinggan Granules；  Emodin；  Chrysophanol；  HPLC
        茵虎清肝颗粒主要由茵陈、虎杖、大黄、郁金等药物组成，具有清肝胆湿热 、 利水 、 止痛的功能。用于肝胆湿热型肝炎，肝区疼痛，腹胀发热，恶心呕吐，食欲减退，身体倦怠等。虎杖和大黄为主要药材，现行《中国药典》对虎杖和大黄均有含量测定方法［1］，但在同一制剂中测定虎杖和大黄中大黄素、大黄酚的含量少见报道。本制剂中大黄、虎杖皆为主要药物，为了控制成品质量，对大黄素、大黄酚的含量测定进行了方法学研究，所建立的方法简便、准确、灵敏，可作为本品的质量控制方法。
       　1  仪器与试药
       1.1  仪器戴安高效液相色谱仪：Summit P680A泵，Summit PDA100二级管阵列检测器；ASI100自动进样器；Chromeleon 色谱工作站；Shimadzu Libror AEL 40SM (十万分之一)天平（日本岛津）；SYZA 石英亚高纯水蒸馏器（江苏信达仪器厂）；KQ50 B超声波清洗机（昆山市超声设备有限公司）。
       1.2  药品与试药甲醇（色谱纯，Dikma  Company,Inc），水（超纯水，临时前制备），其它试剂为分析纯。大黄素；大黄酚（中国药品生物制品检定所提供，含量测定用，批号分别为：110756200110、110796200310，纯度检查分别为98.88%、98.54%）；缺虎杖、大黄阴性样品及成品自制。
       2  方法与结果
       2.1  色谱条件和系统适用性实验
       2.1.1  色谱条件色谱柱为Inertsil ODS3 C18柱(5 μm，4.6 mm×250 mm)；流动相为甲醇0.1％磷酸溶液(90∶10)；柱温为室温；检测波长254 nm；流速1.0 ml/min；进样量10 μl。
       2.1.2  系统适应性实验分别取对照品溶液，供试品溶液，阴性对照溶液各10 μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件记录色谱图，大黄素、大黄酚对照品保留时间分别约为8.9 min、11.7 min，供试品色谱中大黄素、大黄酚峰与杂峰分离良好，分离度均不低于1.5，理论板数按大黄素峰计算应不低于2 000，阴性对照色谱在相应位置上无干扰峰。见图1。
       2.2  标准曲线的制备精密称取大黄素对照品8.72 mg、大黄酚对照品3.02 mg，分别置50、100 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液；分别精密量取上述两种贮备液各1，2，3，4，5 ml，分别置25 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成标准混合溶液，分别精密吸取10 μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，以对照品进样量(ng)为横坐标，以峰面积(mAU・min)为纵坐标，  进行回归处理，大黄素、大黄酚回归方程分别为Y=0.066 56X＋0.534 5，r=0.999 6；Y=0.093 48X＋0.055 0，r=0.999 9。说明大黄素在进样量69.76～348.8 ng范围内呈良好的线性关系：大黄酚在进样量12.08～60.40 ng范围内呈良好的线性关系。
       2.3  供试品溶液、阴性对照溶液的制备取装量差异项下的本品，研细，取细粉约1g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇30 ml，称定重量，加热回流30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 ml，置50 ml圆底烧瓶中，挥去甲醇，加2.5 mol/L硫酸溶液10 ml，超声处5 ml，再加氯仿10 ml，加热回流1 h，冷却，移至分液漏斗中，用少量氯仿洗涤容器，并入分液漏斗中，分取氯仿层，酸液用氯仿提取2次，约 10 ml/次 合并氯仿液，以无水硫酸钠脱水，氯仿液移至100 ml锥形瓶中，挥去氯仿，残渣精密加甲醇10 ml，称定重量，置水浴中微热溶解残渣，放冷后，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。另取缺虎杖和大黄的阴性制剂1 g，同法制成阴性对照溶液。
       2.4  最低检出限实验在本色谱条件下，使大黄素、大黄酚峰高为仪器响应噪声的3倍高，测得大黄素、大黄酚的最低检出量约为0.05 ng。
       2.5  精密度和重复性实验准确吸取对照品溶液10 μl，重复进样6次，大黄素RSD为0.26％，大黄酚RSD为0.18％；取同一批样品6份，分别照供试品溶液制备方法，制得6份供试品溶液，进样，测定，大黄素RSD为1.87％，大黄酚RSD为1.72％。
       2.6  稳定性实验取同一新配制的供试品溶液，每隔一定时间进样l0 μl，依法测定，结果大黄素RSD为1.28％(n=6)，大黄酚RSD为1.19％(n=6)，表明供试品溶液制备后12 h内保持稳定。
       2.7  回收率实验采用加样回收法，取本品10袋(批号040509；大黄素含量10.72 mg/袋、大黄酚含量1.88 mg/袋)，倾出颗粒，研磨成细粉，置锥形瓶中，摇匀，取细粉约0.5 g，5份，置具塞锥形瓶中，分别精密加入大黄素(浓度0.524 6 mg/ml)、大黄酚对照品溶液(浓度0.103 2 mg/ml)各1 ml，照含量测定法测定含量，计算回收率。结果见表1～2。表1  大黄素回收率结果取样量（略）表2  大黄酚回收率结果取样量（略）
       2.8  样品含量测定分别自动进样供试品溶液各10 μl，测定，按大黄素、大黄酚的峰面积，计算其含量。结果见表3。表3  样品测定结果 （略）
       　　3  讨论
       3.1  供试品溶液制备方法考察对提取方法(回流法、超声法)、提取溶媒、提取时间进行了优选，结果以甲醇回流提取30 min为宜。对水解用酸(硫酸、盐酸)，水解时间进行了考察，结果以2.5 mol/L硫酸溶液水解1h为佳。
       3.2  检测波长的确定根据二极管阵列检测器，对大黄素、大黄酚对照品溶液和供试品溶液在190～400 nm范围扫描，结果大黄素254.2 nm，大黄酚在256.4 nm处有最大吸收峰，确定采用与文献一致的254 nm作为检测波长［1］。
       3.3  本品虎杖和大黄两味药材均含大黄素和大黄酚，但虎杖以大黄素为主，大黄酚量极少，大黄则大黄酚多于大黄素，建立本方法同时测定两者，按文献方法计算，基本能控制虎杖和大黄的含量［2］。
       　参考文献：
       ［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［M］.北京：化学工业出版社，2000：1819，167168.
       ［2］洪筱坤，王智华，李琴韵，等.胆宁片中大黄与虎杖的定量研究［J］.中成药，1995，17(8)：1414.
       作者简介：王利胜(1968)，男(土家族)，湖北人，现任广州中医药大学中药学院副教授，硕士学位，在读博士研究生，主要从事中药新药教学与研究工作.
       (1.广州中医药大学中药学院，广东 广州  510405；2.广州中医药大学2002级制药工程专业，广东 广州  510405)
       收稿日期：20050308