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       【摘要】 
       目的研究升降散对内毒素发热的影响。方法采用大肠杆菌内毒素复制家兔毒素发热模型，设立正常对照组、模型组、白虎组、布络芬组，升降组，观察各组症状及体温变化，白细胞介素 -8 （IL-8），肿瘤坏死因子 -α（TNF-α）等指标变化。结果升降组症状表现较轻，降温效果平稳；升降组、白虎组、布络芬组家兔的血清 IL-8 和 TNF-α含量较模型组显著降低（P＜0.05 ～ 0.01）。结论 升降散对内毒素发热具有良好的治疗作用。
       【关键词】  升降散 内毒素发热 实验研究
       升降散一方，出自清代温病学家杨栗山的《伤寒瘟疫条辨》［1］：“瘟病总计十五方……，而升降散，其总方也，轻重皆可酌用”。现代药理研究认为［2］：僵蚕对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌等有一定抑制作用；蝉蜕有明显抗过敏作用；姜黄有抗炎、利胆、护肝、降血脂、抗血凝和抑制血小板聚集的作用；大黄药理作用广泛，对病原微生物有抗菌、抗真菌、抗病毒等作用，还有抗炎止血、降血脂血糖作用。表明该方有抗炎、抗病毒、调节免疫等作用，对炎症的治疗有一定的意义。近年来其抗炎机理已经成为温病界关注研究的焦点。笔者在临床上运用有较好的退热效果。因此，本研究通过大肠杆菌内毒素造模，设立对照组以观察该方对发热的影响及对 IL-8 和 TNF-α 水平的影响。
       1  材料与仪器
       1.1  动物
       健康家兔共 40 只，体重 1.8～2.2 kg，基础肛温（ 39.0 ± 0.4）℃（ 38.7 ～ 39.6 ℃，因本实验时间正值酷暑，所以家兔肛温在正常范围内偏高），雌雄各半（雌兔未孕），由广西中医学院实验动物中心提供。
       1.2  试剂及试剂盒
       内毒素（由恒因生物有限公司提供），用无菌生理盐水配成 15 μg/ml 溶液，4 ℃冰箱冷藏，用前置 40 ℃温水温浴20 min［3］。IL-8 和 TNF -α 酶免试剂盒（由深圳晶美生物工程公司进口批号：20060218 和 20060205 ）。
       1.3  仪器
       MK3 型号 IL-8 和 TNF-α 酶标仪（热电上海有限公司），CELLTAC 型号白细胞计数仪（日本 NIHON  KOHDEN公司），Biofuqe.stratos 型高速液晶离心机（德国），DT 系列电子天平（美国双杰兄弟集团有限公司），715 型半导体数字肛温计（上海医用仪器厂），XE-2100 全自动血液分析仪（Sysmex 公司）。
       1.4  药物制备
       白虎汤：石膏 30 g ，粳米 15 g ，知母 15 g ，甘草 9 g ，水煎浓缩至每毫升含生药1 g。升降散：僵蚕 9 g ，蝉衣 6 g ，姜黄 6 g ，大黄 6 g，水煎浓缩至每毫升含生药1g。饮片均购自广西中医学院第一附属医院中药房。布络芬缓释胶囊（每粒300 mg，批号：060101），300 mg稀释于150 mg蒸馏水中制成浓度2 mg/ml的溶液，购自广西中医学院第一附属医院西药房。中药煎剂和布络芬稀释液分别经过高压灭菌后贮于置4℃冰箱内备用，用前置30℃温水温浴20 min。
       2  方法
       2.1  动物分组与造模
       健康家兔共40只，随机分为5组：正常对照组、模型组、布络芬组、白虎组、升降组，每组8只，每笼2只分开饲养。实验用兔实验前1周抽取血液，经检测比较后筛选出5组无差异性动物方可进行造模；并1次/d测直肠肛温，连续7 d，以平均值作为基础肛温［4］。抽血1周后，除正常对照组外，余组均在室温条件，动物自然清醒的状态下，由家兔的耳缘静脉注入大肠杆菌内毒素液每次1 ml/kg［3］（攻毒），正常对照组则注入等剂量无菌生理盐水1次，全部过程均无菌操作。
       2.2  给药方法
       实验动物与人临床用药换算按文献［5］进行换算。白虎组灌胃药物10 ml/kg；升降组灌胃5 ml/kg；布络芬组灌胃14 ml/kg；模型组、正常对照组灌胃生理盐水15 ml/kg，在攻毒前2 h和攻毒后立即，两次灌服完。
       2.3  观察指标
       ①平均发热曲线；②白细胞及中性粒细胞含量观察；③血清 IL-8 和 TNF-α 含量观察。体温观察采用电子肛温计测量动物直肠温度，每 30 min 记录 1 次，白细胞及中性粒细胞含量的测定，于实验造模3 h 后由清醒家兔的耳缘静脉用2 ml 注射器连接5号针头采血1 ml ，置于普通试管中，用 XE-2100 全自动血液分析仪测量；血清 IL-8 和 TNF-α 的测量，也于实验造模3h 后由清醒家兔的耳缘静脉用 2 ml 注射器连接5号针头采血1 ml ，置于普通试管中，4℃，3 000 r/min，离心15 min，取上清液按 IL-8 和 TNF-α 酶免试剂盒说明严格操作。
       3  结果
       3.1  对平均发热曲线的影响见图1。模型组、治疗组在注射大肠杆菌内毒素后随即出现发热。每隔 30 min 测肛温1次。模型组高热持续2 h ，然后开始下降。在造模后 30 min 白虎组肛温较其他两组升高快，在1 h 时达到最高值，然后开始下降，上升和下降幅度都比较大。布络芬组在造模后30 min达到最高值，然后平稳降温。升降组降温效果好，布络芬组次之，白虎组第3。升降组在攻毒1 h 后肛温达到最高值，然后平稳降温。治疗组在造模 3 h 后肛温降至正常范围。模型组肛温仍未回到正常值。
       3.2  白细胞及中性粒细胞含量观察结果见表1。实验结果显示，攻毒3 h 后，模型组白细胞、中性粒细胞均高于正常对照组，经统计学处理差异极显著（P＜0.01）。布络芬组、白虎组及升降组的白细胞、中性粒细胞模型组均有下降，与正常对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。布络芬组效果最好，白虎组次之，升降组第3。
       3.3  血清 IL-8 和 TNF-α 含量观察结果见表 2 。实验结果显示，模型组的血清 IL-8 和 TNF-α 含量显著增加，经统计学处理差异极显著（P＜0.01）。治疗组各组含量均有降低，与正常对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。且升降组的疗效最好，白虎组次之，布络芬组第3。表1  各组家兔造模后3 h 白细胞、中性粒细胞结果比较（略）表2  各组动物血清 IL-8 和 TNF-α 含量比较（略）
       4  讨论
       升降散作为温病的“总方”，在临床广泛运用，主要用于瘟疫、温病等急性传染病或感染性疾病的治疗。由本实验可观察到该方能明显降低内毒素所致家兔的肛温和白细胞、中性粒细胞的含量，以及抑制血清 IL-8 和 TNF-α的水平，表明升降散对急性炎症的促炎因子有明显的拮抗作用。
       内毒素可以使人体和动物发热，产生炎症反应，作用于血液和组织中的单核细胞、巨噬细胞，使分泌 TNF-α，IL-1 ，IL-8 等生物学介质，IL-8 和 TNF-α同为促炎因子，在炎症早期起到积极的作用，但随着促炎因子对机体组织的过度分泌，这些促炎因子可以复制全身炎症表现并导致器官损害，而拮抗促炎细胞因子则可以对机体组织提供保护。白细胞是反映机体抗御能力和感染程度的依据，中性粒细胞具有吞噬功能、释放酶和趋化性物质，在炎症反应中具有重要作用。升降散可以降低白细胞和中性粒细胞的含量，可见其具有抗炎治疗作用。至于该方的具体抗炎机制，以及对其他炎症介质的影响有待于进一步研究。
       【参考文献】
         　　［1］杨栗山.伤寒瘟疫条辨［M］.北京：中国中医药出版社，2002:126.
       
       ［2］张佳扬.彭胜权教授运用升降散的临床经验［J］.新中医,2000,32(1):5.
       
       ［3］戴春福.温病气分证血淤病理变化的初步研究［J］.中国中医药科技,1997,4(3):137.
       
       ［4］孙敬方.实验动物方法学［M］.北京:人民卫生出版社,2002:48.
       
       ［5］陈奇.中药药理研究方法学［M］.北京:人民卫生出版社,1993:1103.