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       【摘要】 
       目的优选紫丁香叶中总皂苷的提取工艺。方法采用香草醛－冰醋酸－高氯酸显色法，用紫外分光光度计测定不同提取方法下所得紫丁香叶药材中总皂苷的含量，选出紫丁香叶总皂苷的提取工艺。进而设定正交实验，来优选最佳提取工艺。结果总皂苷的最佳提取工艺为70%乙醇回流提取2次，1 h/次，加醇量为每次13倍量。结论此工艺安全、成本低，得到的总皂苷含量高，可作为提取紫丁香叶生产工艺参考。
       【关键词】  紫丁香叶 总皂苷 正交设计 提取工艺
       Study on the Extraction Process of Total Saponins from Syringa Leaves
       HAO Ting ting,YAN Mingming, GUO Tingting,SHAO Shuai,ZHANG Lianxue
       1.College of Chinese Materia Medica, Jinlin Agricultural University, Changchun, Jilin 130118 China；
       2.Changchun University of Traditional Chinese Medicine, Changchun Jilin 130117,China
       Abstract:ObjectiveTo optimize extraction process of total saponins from Syringa leaves. Methods5%Vanillin-Acetic Acid Glacial-Perchloric Acid colormetric analysis method and UV were used to measure the content of total saponins from Syringa leaves by different extraction solutions. The orthogonal experiment was used to select the best conditions. ResultsThe best extraction technology was 13-fold and 70%ethanol,1hour of reflux for 2times of extraction.ConclusionThis optimal process is simple,stable and efficient.It is suitable for pharmaceutical production of Syringe leaves.
       Key words：Syringa leaves；  Total saponins；  Orthogonal design；  Extraction methods
       
       紫丁香叶为木樨科Oleaceae丁香属Syringa紫丁香Syringa oblata L.的干燥叶［1］。味辛，性温，入胃、肝、胆三经，有清热燥湿、解毒、消炎的作用。紫丁香叶中主要含有皂苷、黄酮［2］、有机酸、苯丙素、环烯醚萜等多种有效成分。嫩叶可当茶饮解暑，鲜叶提取液对弗氏痢疾杆菌有较强的抑菌效果。紫丁香叶制成的片剂，用于治疗急性黄疸型肝炎，取得良好效果［3］。在民间，用紫丁香叶煎剂来治疗暴火眼和防治痢疾非常普遍［4］。调查显示紫丁香叶有很好的应用前景和经济效益，但目前，《中国药典》（2005年版）并未收录紫丁香叶，对紫丁香叶总皂苷类化合物化学成分、药理作用等方面的研究并不深入。鉴于此，本实验以齐墩果酸为指标，通过紫外分光光度法对不同提取紫丁香叶总皂苷的方法进行了比较和考察，优选出紫丁香叶总皂苷最佳提取方法和工艺，为紫丁香叶中有效部位总皂苷的进一步研究奠定基础。
       1  仪器与材料
       日本岛津紫外分光光度计UV-2401PC（北京）；电子天平Mettler CE 240(上海)；试剂均为分析纯；齐墩果酸标准品（供含量测定用）购于中国药品生物制品检定所；紫丁香叶为200609采摘的新鲜叶(由长春中医药大学邓明鲁教授鉴定)，干燥备用。
       2  方法与结果
       2.1  紫丁香叶总皂苷的不同提取方法
       2.1.1  水煎法
       取干燥的紫丁香叶100 g，加水文火煎煮3次。第1次12倍量水煎2 h，后2次加10倍量水，煎1.5 h，合并3次提取液，过滤，浓缩，80℃减压干燥，称重。同法做3次平行实验，计算平均得膏率。得膏率(%)=干膏重/生药量×100%。
       2.1.2   醇提法
       
       传统的提取总皂苷的方法为乙醇提取，因此本实验选用70%乙醇回流提取。取干燥的紫丁香叶100 g，用70%乙醇回流提取3次，1.5 h/次，加醇量分别为12，10，8倍量。合并提取液，过滤，浓缩80℃，减压干燥，称重。同做3次平行实验，计算平均得膏率。
       2.1.3   超声波法
       取两份干燥的紫丁香叶100 g，分别加10倍量水和70%乙醇超声3次，30～40 min/次，合并提取液，过滤，浓缩，减压干燥，称重。同法做3次平行实验，计算平均得膏率。  
       2.2  紫丁香叶总皂苷含量测定方法
       2.2.1  对照品溶液的制备
       以齐墩果酸作为标准品，精密称取干燥至恒重的齐墩果酸对照品 11.04 mg置于25 ml容量瓶中，加甲醇5 ml超声处理5 min，用甲醇定容至刻度，摇匀得浓度为0.44 mg/ml的对照品储备液。
       2.2.2  测定波长的选择
       精密吸取齐墩果酸对照品溶液0.05 ml及供试品溶液1 ml于10 ml具塞试管中，水浴挥干溶剂，精密加入新配制的5%香草醛－冰醋酸溶液0.2 ml，高氯酸0.8 ml，加塞，摇匀，于60～65℃水浴中加热15 min，取出，流水冷却至室温后，精密加入醋酸乙酯5 ml，摇匀，以相同试剂为空白，在450～900 nm波长范围内扫描。齐墩果酸对照品在553 nm处有最大吸收，样品溶液在546 nm处有最大吸收（见图1），但在550 nm处也有强吸收，故选择550 nm为测定波长。
       2.2.3  标准曲线的制备精密吸取齐墩果酸对照品溶液(mg/ml) 0.05，0.10，0.20，0.30，0.40，0.50 ml分别加入6支具塞试管中，即各试管中标准品的量分别为0.022，0.044，0.088，0.132，0.176，0.220 mg，按照“2.2.2”项下操作，按分光光度法［5］,于 550 nm处测定吸光度。得到吸光度与浓度的方程：A=8.342 5C+0.052 7,r=0.999 5(n=6)。在22～220 μg范围内齐墩果酸对照品显色后的吸光度与浓度呈良好线性关系。
       2.2.4  供试品含量测定取“2.1”项下的5组干粉各2.5 g，30 ml甲醇溶解，称重，超声20 min，补足损失的重量，摇匀过滤，取续滤液1 ml甲醇定容到100 ml，作为供试品溶液。取供试品溶液1 ml于10 ml具塞试管中，按照标准曲线项下的操作方法测定样品的吸光度。然后根据线性方程计算其总皂苷的含量。结果见表1。表1  紫丁香叶中总皂苷不同提取方法含量比较（略）
       2.3  正交实验法优选紫丁香叶总皂苷醇提工艺通过表1可以看出，不同提取方法直接影响着紫丁香叶总皂苷的测定结果，虽然超声波提取法是近几年发展起来的提取方法，节省时间，而且溶剂用量少，但该法出膏率低，提取得到的总皂苷含量较低，不宜采用。综合考虑，70%乙醇提取总皂苷是比较合适的提取方法。为此，设计醇提正交，以进一步优化醇提工艺。
       2.3.1  因素水平的确定根据实际情况，选择提取次数（A），提取时间（B），溶媒量（C），醇浓度（D）4个考察因素，每个因素各设置3个水平。因素水平见表2。
       2.3.2  实验方法及指标考察取紫丁香叶100 g，按L9(34)正交表安排实验。共9组实验，每组两次平行实验，以总皂苷含量为指标，测定结果取其平均值。结果见表3，方差分析见表4。表2  醇提因素水平（略）表3  正交实验结果（略）
       3  讨论
       目前《中国药典》尚未收录紫丁香叶，而且尚未见国内有关于紫丁香叶总皂苷含量的报道。本实验中选用皂苷类比较常见的母核结构——齐墩果酸为对照品，对总皂苷的含量进行测定，不失为一种较好的选择。
       
       在提取时间因素的水平选择上，提取时间太长，成本高，不利于生产，时间短提取不完全。因此选择了1.0，1.5，2.0 h 3个提取水平；溶媒用量根据实际的浸渍情况，选择12，13，14倍量3个水平；同时预实验结果表明50%以下醇提所得总皂苷含量较低，因此选择50%，70%，90% 3种醇浓度水平。表4  方差分析（略）
       由表3的直观分析结果可知，优选出的提取工艺为A2>C2>D3>B2。由表4的方差结果分析可知，A，C因素对醇提工艺均有显著影响，D因素对醇提有影响，而B因素对结果没有影响。因此，为节省能源，选择提取1.0 h。即最佳提取工艺为A2B1C2D2，即以70%乙醇回流提取2次，1 h/次，加醇量为13倍量/次。验证实验表明，此提取工艺得到满意的实验结果。
       【参考文献】
         　　［1］孙传奇．辽宁省中药资源名录［M］.沈阳：辽宁省中药资源普查办公室，1987：46.
       
       ［2］Harbome,J．B．A chemotaxonomic survey of flavoriods in leaves of the Oleaceae［J］.Bot．J．Linn,soc,1980,8(2)：155.
       
       ［3］王迪，张贵军，李仁郁．黑龙江省丁香属植物药资源研究［J］.中医药信息，1985，3：32．
       
       ［4］李永吉，吕邵娃，王艳宏，等．丁香叶药用研究进展［J］.中医药信息，2003，20（1）：22.
       
       ［5］国家药典委员会. 中国药典, Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：附录VB.