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       【摘要】 
       目的探讨不同剂量配比对芍药甘草汤中芍药苷煎出量的影响。方法采用高效液相色谱法，色谱条件：色谱柱为Kromasil C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；以乙腈-0.1%磷酸溶液=15∶85为流动相；检测波长230 nm；流速1.0 ml/min。柱温为室温；进样体积10 μl。结果芍药苷在0.102～1.02 μg范围内呈良好的线性关系,r=0.999 8,各种配伍未见芍药苷煎出量有明显变化。结论不同剂量配比对芍药甘草汤中芍药苷的煎出无明显的影响，该方法可作为芍药甘草汤中芍药苷的含量测定方法。
       【关键词】  芍药甘草汤 芍药苷 高效液相色谱
       Influence to the Quantity of Peoniflorin in Different Doses Matching Shaoyaogancao Decoction
       QIU Zhenwen, LUO Dandong, REN Jiemei, ZHANG Qingye
       (The First Hospital of Guangzhou  University of  TCM, Guangzhou510405,China)
       Abstract：ObjectiveTo investigate the influence to the quantity of Peoniflorin in different doses matching Shaoyaogancao decoction.MethodsThe HPLC method was established for the determination of peoniflorin in Shaoyaogancao decoction. The column was Kromasil C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，mobile phase consisted of acetonitrile－0.1%phosphoric acid＝15∶85，the column tempreture was room temperature,and the flow rare was 1.0 ml/min．The detection wavelength was 230 nm．ResultsA better linearity was obtained in the range of 0.102～1.02μg for peoniflorin，with a good correlation coefficient, r=0.999 8． The method had good precision. The quantitative peoniflorin in different doses matching Shaoyaogancao decoction had no significant difference.ConclusionThe quantitative peoniflorin in different doses matching Shaoyaogancao composition have no significant difference. There is no influence to the quantity of Peoniflorin in different doses matching Shaoyaogancao decoction .This method is simple，and quick, and it can be used as assaying peoniflorin in Shaoyaogancao decoction.
       Key words：Shaoyaogancao decoction；  Peoniflorin；  HPLC
       芍药甘草汤是《伤寒论》著名方剂，由芍药和甘草各等份组成。药虽两味，但结构严谨，配伍精当，后世医家极为推崇。该方是常用的缓急止痛之方，主营阴不足、肝脾不和，症见脘腹诸痛，四肢挛急等。随着现代药理学的发展，许多学者对芍药甘草汤进行了大量的研究［1］，获得了不少的成果，但对芍药甘草汤的配伍规律研究却鲜有报道。本实验拟探讨芍药与甘草不同剂量配伍时对芍药苷煎出量的影响，为对芍药甘草汤进行深入配伍规律研究打下良好的基础。现将实验报道如下。
       1  仪器与试药
       1.1  仪器高效液相色谱仪（DIONEX P680 HPLC）；ASI-100型自动进样器，PDA-100型紫外检测器，STH585柱温控制器。LC-2002色谱工作站。SB-5200超声波清洗机，试验室专用超纯水机。
       1.2  药物与试剂芍药、甘草药材购于广东省药材公司，经有关专家鉴定分别为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall的干燥根及豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch的干燥根及根茎；芍药苷对照品（批号：110736－200525），购自中国药品生物制品检定所。乙腈为色谱纯，磷酸、乙醇等均为分析纯。
       1.3  药物分组与煎煮方法实验设5个组，分别为：①芍药∶甘草（1∶1）；②芍药∶甘草（1∶2）；③芍药∶甘草（2∶1）；④甘草组；⑤芍药组。 各组药量及配比关系见表1。表1  芍药与甘草的量及配比关系（略）
       以上各组药物按上述的分组方法取药，以6倍量的水进行煎煮，共3次，40 min/次，合并水煎液，水浴浓缩，第1组浓缩成100 ml，第2组浓缩成200 ml，第3组浓缩成100 ml，第4组浓缩成100 ml，第5组浓缩成100 ml，4℃保存备用。
       2  方法和结果
       2.1  色谱条件色谱柱为Kromasil C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；以乙腈-0.1％磷酸溶液=15∶85为流动相；检测波长为230 nm；流速为1.0 ml/min；柱温为室温。在此条件下芍药苷与其他组分能达到较好分离，阴性对照品溶液无干扰（见图1～4）。理论塔板数按芍药苷计算不低于2 000。
       2.2  标准曲线的制备精密称取芍药苷对照品适量，以甲醇溶解并定容于25 ml容量瓶中，得浓度为0.102 mg/ml的对照品溶液。分别取对照品溶液1，2，4，6，8，10 μl按上述色谱条件进行测定。以峰面积的积分值为纵坐标（Y），进样量为横坐标（X），绘制标准曲线，求得芍药苷的回归方程：Y=297.28X+0.074，r=0.999 8，线性范围为：0.102～1.02 μg。
       2.3  供试品溶液的制备精密吸取“1.3”项下制得的各种浓缩药液25.0 ml，置50 ml量瓶中，分别加入等体积的75％乙醇，至刻度，静置，取上清液过0.45μm的微孔滤膜，即得供试品溶液。
       2.4  阴性样品溶液的制备精密吸取第4组药液25ml，照“2.3”项下供试品溶液制备方法制备，过0.45 μm的微孔滤膜，即得。
       2.5  精密度实验取芍药苷对照品溶液重复进样6次，10 μl/次。测得芍药苷峰面积RSD分别为1.01%，0.98%。
       2.6  稳定性实验精密吸取对照品溶液10 μl，重复进样6次，每次间隔2 h，测得芍药苷峰面积RSD为0.65%，结果表明12 h内稳定。
       2.7  重复性实验按拟定的含量测定方法，取同一样品溶液，平行制备6份，测得峰面积并计算含量，结果测得芍药苷含量的RSD为0.88%。
       2.8  加样回收率实验分别精密吸取已测得芍药苷含量的第1组中药溶液25 ml，置50 ml量瓶中，加入一定量的对照液，混匀，75％乙醇稀释置刻度，照“2.3”项下供试液制备方法制备供试品溶液，进样测定，分析计算结果。结果表明芍药苷的平均回收率为100.23%(RSD为1.9%)。
       2.9  含量测定按供试品溶液制备方法和色谱条件对5组样品溶液进行了测定，计算每克芍药的煎出平均量。结果见表2。表2  含量测定结果（略）
       3  讨论
       芍药甘草汤常用于多种痛证的治疗，如肋间神经痛、三叉神经痛、胃脘痛、腹痛、坐骨神经痛或妇科炎性腹痛、痛经等［2］。现代药理研究表明，芍药甘草汤具有解痉、镇痛、抗炎的药理作用［1］，可明显减少醋酸所致的小鼠扭体次数； 使二甲苯所致小鼠耳肿胀程度明显减轻［3］；对乙酰胆碱所致肠管痉挛性收缩有明显拮抗作用［4］。白芍有养血柔肝、缓中止痛、敛阴收汗的功能，是芍药甘草汤中缓急止痛的主要药物，白芍主含芍药苷(paeoniflorin)，药理及临床［5，6］研究表明，芍药总苷具有良好的解痉［7］、镇痛［8］、抗炎的作用［9］。因此，本实验以芍药苷为检测指标，探讨芍药甘草不同比例配伍对该方抗炎、解痉、镇痛的主要化学成分芍药苷的含量变化，以揭示其配伍规律，为深入研究该方打下良好的基础。
       色谱条件的选择，参考2005版《中国药典》［10］芍药苷的高效液相测定条件用C18反相柱进行测定。从DAD检测器记录信号中提取芍药苷200～400 nm的光谱图，最大吸收为230 nm。本实验所用的流动相，配比简单，不含盐类，芍药苷与样品中其他杂质分离度好，能满足实验要求。根据对流速、温度的考察,发现当流速为1 ml·min-1，温度为室温的时候，芍药苷的分离效果好，出峰时间更适中。
       综上所述，不同剂量配比对芍药甘草汤中芍药苷的煎出无明显的影响。 高效液相检测方法学考察结果表明，该方法简便，可行，重复性良好，可作为芍药甘草汤中芍药苷的含量测定方法。
       【参考文献】
         　　［1］王新瑞，芍药甘草汤的药理学研究进展［J］.山西医药杂志，2002，31（4），308.
       
       ［2］柯雪帆.伤寒论选读［M］.上海：上海科学技术出版社，1996：28.
       
       ［3］邱明义.附子汤、桂枝附子汤、芍药甘草汤镇痛抗炎作用比较研究［J］.中国实验方剂学，1999，5(4): 45.
       
       ［4］王均宁.芍药甘草汤及其制剂止痛作用的药理与临床研究［J］.中成药, 1999, 21 (9) : 483.
       
       ［5］闵伟琪，魏 琴，李洪毓，等.白芍总苷治疗类风湿关节炎的多中心临床研究［J］.中华风湿病学杂志, 2005，9（8），487.
       
       ［6］关文秋.芍药甘草汤临床与药理研究近况［J］.国医论坛，2003，18（6），51.
       
       ［7］木村正康.芍药甘草汤对骨骼肌松弛作用的机理［J］.国外医学·中医中药分册，1983，7(6)：21.
       
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       ［9］梁曼若.白芍的抗炎免疫药理作用研究［J］.新中医，1989，21（3）：51.
       
       ［10］国家药典委员会.中国药典［S］.北京：化学工业出版社，2005:附录28.