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       【关键词】  高效液相色谱法
        摘要：目的：建立元胡痛经滴丸中延胡索乙素的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法，以Hypersil ODS 2为固定相，甲醇水三乙胺(70∶30∶0.5)为流动相，检测波长280 nm，流速1.0 ml/min，柱温室温。结果：在0.225 4～1.127 0 μg范围内有良好的线性关系，平均回收率为99.18%(n=5)，RSD＝2.24%。结论：该方法简便，准确，灵敏，可作为本品的质量控制方法。
        关键词：高效液相色谱法；元胡痛经滴丸；延胡索乙素
        Determination of Tetrahydropalmatine in Yuanhu Tongjing Droppills by HPLC
        XIAO Caihong1, LI Shang2
        (1.The Third Institute for Drug Control of Guangzhou, Guangzhou, 510700, China; 2.The Electrical Engineering Bureau Hospital of Guangdong Province, Guangzhou, 510735, China)
        Abstract:Objective:To establish a method for determination of tetrahydropalmatine in Yuanhu Tongjing Droppills.Methods:HPLC method was selected to determine the content of tetrahydropalmatine. The chromatographic conditions included Hypersil ODS 2 column, methanol－water－triethylamine (70∶30∶0.5) as the mobile phase, the detection wavelength at 280 nm, flow rate 1.0 ml/min and column temperature at room temperature.Results:The linear range was 0.225 4～1.127 0 μg and the average recovery was 99.18% (n=5), RSD=2.24%.Conclusion:This method is simple, accurate and sensitive, which may be used for quality control of Yuanhu Tongjing Droppills.
   
    Key words:HPLC;Yuanfu Tongjing Droppills;Tetrahydropalmatine
        元胡痛经滴丸由延胡索、丹参、蒲黄等几味药组成，采用固体分散技术制成新型速效滴丸剂。元胡痛经滴丸具有活血、调经、止痛的功效，临床主要用于气滞血瘀型痛经、月经不调、小腹胀痛等症。临床实验表明，本制剂具有作用迅速，生物利用度高的特点。延胡索活血行气止痛为君药，其镇痛药理作用以延胡索乙素最强［1］，建立HPLC法测定延胡索乙素的含量，以控制其质量。方法学研究结果表明，该法简便，准确，灵敏。
           1仪器与试药
        1.1 仪器 戴安液相色谱仪：Summit P680A泵，Summit PDA100二级管阵列检测器；Chromeleon色谱工作站；ASI-100自动进样器；电子天平(十万分之一，德国Sartorius)；TCQ-250型超声波清洗器 (北京医疗设备二厂)。
        1.2药品与试剂延胡索乙素对照品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号0726200208)；元胡痛经滴丸及缺延胡索阴性制剂(自制)；甲醇为色谱纯；水为超纯水，其它试剂为分析纯。
           2方法与结果
        2.1对照品溶液的制备精密称取延胡索乙素对照品适量，加甲醇制成67.62μg/ml的对照品溶液。
        2.2供试品溶液阴性对照溶液的制备 取本品10 g，研细，精密称取细粉0.5 g，精密加入甲醇30 ml，称定重量，超声提取30 min，取出，放冷至室温，称重，补足损失的甲醇，静置，取上清液20 ml, 挥去甲醇后，适量水混悬，加浓氨水1 ml，加入乙醚15 ml，萃取3次，合并乙醚液，水浴挥干，残渣用甲醇溶解定容至10 ml，用微孔滤膜(0.45μm)过滤，作为供试品溶液。另取缺延胡索的阴性制剂0.5　g，同法制成阴性对照溶液。
        2.3色谱条件及系统适应性实验 色谱柱：Hypersil ODS 2柱(大连依利特，4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：甲醇水三乙胺(70∶30∶0.5) ；流速：1.0 ml/min；检测波长：280 nm；柱温：室温；进样量10 μl。分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件记录色谱图，理论塔板数按延胡索乙素峰面积计算不低于3 000，延胡索乙素峰与之相邻峰的分离度不低于2.0。延胡索乙素的保留时间约为11.5 min，延胡索乙素与供试溶液中其它组分达到基线分离，阴性对照液图谱在延胡索乙素峰位置无吸收峰。见图1。
        图1延胡索乙素HPLC图
        2.4标准曲线的制备精密称取五氧化二磷减压干燥过夜的延胡索乙素对照品11.27 mg，用甲醇溶解定容至50 ml，作为对照品母溶液。精密吸取此母液1，2，3，4，5 ml于5支10 ml容量瓶中，分别加入甲醇至稀释至刻度，作为对照品溶液。精密吸取各溶液10μl进样，按上述色谱条件测定峰面积，以对照品进样量X(μg)为横坐标、峰面积值Y(mAU・min)为纵坐标，进行回归处理，回归方程为Y=16.642 0X-0.254 2，r=0.999 8。表明延胡索乙素在进样量为0.225 4～1.127 0 μg范围内具有良好的线性关系。
        2.5最低检出限实验在本色谱条件下，使延胡索乙素峰高为仪器响应噪声的3倍高，测得延胡索乙素的最低检出量约为0.1 ng。
        2.6精密度实验 精密吸取上述对照品溶液10 μl，重复进样5次，按上述色谱条件测定延胡索乙素峰面积积分值，结果RSD为0.27%。
        2.7稳定性实验取同一批样品，按上法制备供试品溶液，每隔2 h进样1次，按上述色谱条件测定，RSD为1.92%，表明供试品溶液在8 h内保持稳定。2.8重复性实验 精密称取同一批号样品5份，按上法制备供试品溶液，分别进样测定，延胡索乙素平均含量为1.862 mg/g，RSD=1.81%。
        图2延胡索乙素标准曲线
        2.9回收率实验按加样回收法，取同一批号样品约0.25 g，6份，分别加入延胡索乙素对照品（0.225 4 mg/ml）1 ml，待溶剂挥干后，按“2.2”方法制备供试品溶液，分别进样测定，计算回收率，结果见表1。
        表1回收率测定结果样品含（略）
        2.10样品含量测定分别自动进样供试品溶液和对照品溶液各10 μl，测定，按延胡索乙素的峰面积，外标法计算其含量，结果3批含量分别为1.862，1.754，1.911 mg/g。
           3讨论
        3.1提取方法的考察参考文献方法［2～4］实验比较了超声、回流、索氏提取3种提取方法；比较了甲醇、乙醇、乙醚3种提取溶媒及用量；根据延胡索生物碱的碱性强弱，最终选择以60倍量甲醇超声提取30 min，结合调节pH值乙醚萃取除杂效果最好，图谱清晰阴性无干扰。
        3.2 检测波长的确定延胡索乙素对照品溶液在200～500 nm范围扫描，结果在280.8 nm处有最大吸收峰，与文献280 nm相近，确定采用280 nm作为检测波长。
        3.3流动相的选择根据延胡索乙素的化学性质，采用甲醇水、甲醇磷酸盐缓冲液、乙腈磷酸盐缓冲液、甲醇0.1%磷酸、甲醇水三乙胺等流动相实验，结果以甲醇水三乙胺峰形良好，分离效果最佳。
           参考文献：
        ［1］黄泰康.常用中药成分与药理手册［M］.北京：中国医药科技出版社,1999：874881.
        ［2］杨天展.高效液相色谱法测定胃得康散中延胡索乙素含量［J］.时珍国医国药,2000,11(1)：3132.
        ［3］王利胜,朱盛华,王岩.HPLC测定糖尿康胶囊中延胡索乙素的含量［J］.中国新医药,2003,2(10)：2223.
        ［4］马临科.高效液相色谱法测定延胡索中延胡索乙素的含量［J］.药学实践杂志, 2003,21(6):351353.
        (1.广州市药品检验所三分所，广东 广州510700；2.广东省电力医院，广东 广州510735)