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       【关键词】  三七皂
        摘要：目的：研究超声提取方法对三七中皂苷的提取率的影响。方法：采用高效液相色谱(HPLC)法比较不同超声提取时间与常规浸泡对三七皂苷的提取率。结果：三七中皂苷的提取率随超声提取时间的增加而增加，在30 min～8 h的时间范围内差异不显著，和常规浸泡相比，超声提取缩短提取时间数十倍，提取率略高于常规浸泡，但也无显著差异。结论：超声法提取三七皂苷能显著提高提取效率，采用超声提取30 min～1 h可以代替常规浸泡36 h处理的方法。
        关键词：三七；皂苷；超声提取；高效液相色谱
        Studies on Ultrasonic Extracting Saponins of Panax notoginseng
        MA Ni, GAO Mingju, CUI Xiuming, CHEN Zhongjian
        (Wenshan Prefectural Sanqi Science and Technology Research Institute,Yunnan Province,China 663000)
        Abstract:Objective:To Study on ultrasonic extracting how to affect the rate of extraction in saponins of Panax notogineng.Methods:The contents of saponins were determined by HPLC.Results:The time of ultrasonic extracting is shortened many multiples than the common extracting, either of rate of extraction are not obvious differente.Conclusion:To choose the 30 min～1 h of ultrasonic extracting replace the 36 h of common extracting.
        Key words:Panax notogingseng;Saponins;Ultrasonic extracting;HPLC
        三七Panax notogingseng(Burk.)F.H.Chen为五加科人参属多年生草本植物，皂苷是三七最主要的有效成分，三七中皂苷成分的提取多以水或醇为溶剂进行加热回流［1］及浸泡提取［2］，并在工业及含量测定中广泛应用，但具有提取时间长或操作繁琐的特点。超声波提取是中药材有效成分提取的一种方法，该法有利于能够提高效率，且不影响中药中有效成分的结构，克服了传统提取三七皂苷成分的影响，并以常规提取进行比较，为提取三七的皂苷成分提供新方法。
           1仪器与试药
        1.1仪器岛津Lc10Atvp高效液相色谱仪，ShimPack VPODS 250*4.6色谱柱，SPD10AVP紫外检测器，Classvp工作站控制处理，电子分析天平SHIMADZU AX200(日本岛津)，CQ－250超声波清洗器(中船七院七二六研究所)。
        1.2试剂水为重蒸水，乙腈和甲醇均为色谱纯，单体皂苷R1、Rg1、Rb1对照品均购自中国药品生物制品检定所。
        1.3药材料取三年生三七主根部分干燥后粉碎(100目)。
           2方法与结果
        2.1供试品溶液制备分别称取干燥至恒重的三七粉0.200 0 g于10 ml容量瓶，加甲醇至刻度，称定质量。分别超声提取(频率为20 kHz)30 min,1，2，4和8 h，常规浸泡24,36 h提取，放置至室温后补足损失甲醇，0.45 μm滤膜过滤，滤液作为供试品溶液。
        2.2对照品溶液制备精密称取经干燥恒重的三七皂苷R1，人参皂苷Rg1和Rb1对照品适量，加甲醇分别制成1 ml含三七皂苷R1 0.45 mg，人参皂苷Rg1 1.2 mg，人参皂苷Rb1 1.2 mg的对照品溶液。
        2.3色谱条件色谱柱为ShimPack VPODS反相柱(5 μm，250 mm×4.6 mm)，填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；乙腈(B)水为流动相，025 min(B)由20%～40%线性梯度洗脱，25 min结束后(B)回复至20%，进样前乙腈水(20∶80)应平衡5 min，流速为1.0 ml/min；检测波长为203 nm；柱温40℃；理论板数按Rg1峰计算应不低于3 000，相连组分的分离度应符合要求；样品进样量为20 μl。
        2.4线性关系精密吸取三七皂苷R1对照品溶液3，6，9，12，15，18 μl进样，按上述色谱条件测定，以对照品质量对峰面积作回归曲线，得R1回归方程：Y＝389 721X＋84 775，r＝0.999 5，线性范围1.35～8.1 μg；同法测得，Rg1回归方程：Y＝588 237X＋482 678，r＝0.999 3，线性范围3.6～21.6 μg；Rg1回归方程：Y＝441 058X＋424 145，r＝0.999 7，线性范围3.6～21.6 μg。
        2.5精密度考察取三七粉样品，处理配制得供试液，连续进样5次，以峰面积计算，三七皂苷R1 RSD为1.16%；人参皂苷Rg1 RSD为1.12%；人参皂苷Rb1RSD为1.13%(n=5)。
        2.6稳定性实验取上述样品液，每隔30 min进样1次，结果三七皂苷R1 RSD为1.21%；人参皂苷Rg1 RSD为1.21%；人参皂苷Rb1RSD为1.22%(n=5)。
        2.7重复性实验取三七样品粉末，分别称取5份处理配制成供试液，按上述色谱条件测定，结果三七皂苷R1 RSD1.25%；人参皂苷Rg1 RSD1.19%；人参皂苷Rb1RSD1.24%(n=5)。
        2.8加样回收率实验精密称取三七样品粉末5份，加入三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1各适量，按上述色谱条件测定。测得三七皂苷R1 的平均回收率为98.02%，RSD为1.43%；人参皂苷Rg1的平均回收率为97.87%， RSD为1.35%；人参皂苷Rb1的平均加收率为97.51%，RSD为1.40%)。
        2.9样品测定分别精密吸取2.1项下供试品溶液20 μl，按上述色谱条件测定，结果见表1。
        表1不同提取方法与三七皂苷含量(略)
   
    3讨论
        3.1从表1中可以看出，随着超声提取时间的增加，皂苷含量有增加趋势，30 min～8 h皂苷含量增加了3.12%，2～8 h皂苷含量仅增加了1.17%，超声提取与常规提取率比较差异也不显著；s值均0.03，说明超声提取皂苷比较稳定；超声提取的单体皂苷含量占总皂苷含量的相对比例为R1∶Rg1∶Rb1＝1∶4.7∶4.3，与常规提取的比例(1∶4.8∶4.2)基本一致，成分未发生变化。
        3.2超声提取三七皂苷8 h得量最高，但所耗时间长，耗能多，为了节省能源，超声提取三七皂苷30 min～1 h为宜。
        3.3超声波在人参上提取皂苷已有研究［4，5］，并且都表现出时间短、效率高的特点，和我们在三七上研究的结果一致。三七采用超声波提取皂苷，仅30 min～1 h就能取得良好的效果，时间延长对皂苷提取率的增加影响不大，并且增加能源消耗和造成声污染，该方法可应用于三七的含量检测及工业提取。
           参考文献：
        ［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2000：1010.
        ［2］郑光植，杨崇仁.三七生物学及其应用，第1版［M］.北京：科学出版社，1994：2727.
        ［3］郭孝武.超声提取与常规提取对部分中药碱类成分提出率的比较［J］.世界科学技术－中药现代化，2002，4(5)：5961.
        ［4］张晶，陈全成，弓晓杰.不同提取方法对人参皂苷提取率的影响［J］.吉林农业大学学报，2003，25(1)：7171.
        ［5］许汉英，梁春，商明磊，等.人参中总皂苷的超声波快速提取方法研究［M］.理化检验化学分册，2002，(38)12：625625.
        (云南省文山州三七科学技术研究所，云南 文山663000)