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       【摘要】 
       目的采用反相高效液相色谱(RPHPLC)法测定不同地区、不同采集期茜草中大叶茜草素的含量。方法色谱柱Lichrosorb C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)； 紫外检测波长250 nm；流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液（85∶15），流速0.8 ml·min-1，柱温为35℃。结果大叶茜草素在0.021～0.105 μg具有良好的线性关系，r=0.999 5，平均回收率为99.82％，RSD为0.85％(n=5)。结论该方法简便快捷、精密度高、结果准确。
       【关键词】  茜草；大叶茜草素；反相高效液相色谱
       Determination of Mcilugin in Radixrubiae in Different Resources and Different Collect Time by PR-HPLC 
       JIANG Zhe, SUN Liangpeng, XU Honglan
       (1. Hospital of Yanbian University, Yanji,Jilin  133000 China；2. College of Pharmacology,Yanbian University,Yanji,Jilin, 133000 China)
       Abstract：ObjectiveTo develop an RP-HPLC method for determination of the contents of mcilugin in radixrubiae of the different resources and different collect times．MethodsThe extracts were seperated on Lichrosorb  C18 (150 mm×4.6 mm，5 μm) column with methanol-0.1%phosphoric acid (85:15) as mobile phase．The flow rate was 0.8 ml·min-1．The detection wavelength was at 250 nm．Column temperture was 35℃．ResultsThe method was linear within the range of 0.021～0.105 μg (r= 0.999 5)．The average recoveries of assay were 99.82％ and RSD 0.85％(n=5)．ConclusionThe method is simple,rapid and accurate．
       Key words：Radixrubiae；  Mcilugin；  RP-HPLC
       
       茜草为常用中药，为茜草科植物茜草 Rubia cordifolia L.的干燥根及根茎，具有凉血、 止血、祛痰、通经等功效，临床上用于治疗吐血，崩漏，外伤出血，经闭淤阻，关节痹痛，跌打肿痛［1］。茜草主产于陕西渭南、河南嵩县、安徽、江苏、山东等地。茜草素是茜草中的有效成分之一，体外实验表明，茜草素对金黄色葡萄球菌、变形杆菌、大肠埃希氏菌、绿脓杆菌、沙门氏菌和克雷伯氏菌等均有显著的抑制作用［2,3］。因此，对茜草中茜草素的含量进行测定具有重要意义。本实验采用 RPHPLC测定不同地区、不同采集期茜草中茜草素的含量。
       1  仪器与材料
        SCL10Avp型高效液相色谱仪(日本岛津)；SCL10Avp型紫外-可见检测器(日本岛津)；XW80A旋涡混合器(上海青浦沪西仪器厂)；AS3120A型超声波清洗脱气器(奥特宝恩斯仪器有限公司)。
        大叶茜草素（mcilugin）对照品 (中国药品生物制品检定所)，甲醇 (色谱纯)，磷酸(分析纯)。茜草(不同采集期夏季、秋季；不同地区采自安徽、江苏、山东)。
       2  方法与结果
       2.1  色谱条件色谱柱Lichrosorb  C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm)； 紫外检测波长250 nm；流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液（85∶15），流速0.8  ml·min-1，柱温为35℃。
       2.2 对照品溶液的制备 
       精密称取大叶茜草素对照品 2.1  mg，用甲醇溶解，定容于 100 ml容量瓶中，制得浓度为 0.021 mg·ml-1的标准储备液。
       2.3  供试液的制备
        
       取样品粉末 0.4 g，精密称定，置50 ml具塞锥形瓶中，加入甲醇25 ml，称重，浸泡过夜，超声处理30 min，放冷，加甲醇补足失重，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。
       2.4  线性关系的考察
       分别精密吸取对照品储备液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 μl，按色谱条件测定峰面积积分值，以浓度为纵坐标，峰面积为横坐标，绘制标准吸收曲线，并用最小二乘法求回归方程，结果见表1，得回归方程为C=1.98×10-5A-2.138 8，相关系数r=0.999 5。结果表明，大叶茜草素浓度与峰面积在0.021～0.105 μg内呈良好的线性关系(其中A表示峰面积)。表1  对照品峰面积测定值（略）表2  不同产地、不同采集期茜草中茜草素的含量（略）
       2.5  精密度实验
        
       精密吸取同一份供试液，连续进样 5次，20 μl/次，峰面积的RSD为 0.68％，说明仪器和色谱条件均具有良好的精密度。
       2.6  重现性实验 
       精密称取山东(秋季)茜草样品5份，按样品制备方法制备供试品，进样20 μl，测定峰面积，计算的峰面积RSD=1.20％(n=5)，结果显示，该方法具有较好的重现性。
       2.7  稳定性实验 
       在室温条件下，将样品按测定方法处理后，分别在 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 h每次进样 20 μl，RSD=0.65％(n=5)。结果表明，该溶液在 6 h内的含量基本保持不变。
       2.8  回收率实验 
       回收实验采用加样回收法进行测定 ，取已知大叶茜草素含量的茜草样品5份，精密称定，分别精密加入大叶茜草对照品230 μg，按照供试品溶液制备方法制备，依法测定，测定峰面积计算回收率，结果平均回收率为99.82%，RSD=0.85％。
       2.9  样品测定
       收集不同产地、不同采集期的茜草，测定不同产地、不同采集期药材中大叶茜草素的含量。结果见表2。
       3  讨论
        不同产地茜草中大叶茜草素的含量不同，同一产地不同采集期含量也不同，实验证明在相同产地，秋季采集的茜草中大叶茜草素含量较高；不同产地，在山东秋季采集的茜草中大叶茜草素含量最高，可为临床安全用药提供参考。
       【参考文献】
         　　［1］国家药典委员会．中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社， 2005：162.
       
       ［2］崔颖，梁剑平，陈积红，等．茜草素的抗菌活性与药效试验［J］.中国兽药科技，2005，35(12)：1008.
       
       ［3］乔亚芳，王素肾．茜草中抗菌活性成分的研究［J］.药学学报，1990，25(11)：834.