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       【摘要】 
       目的建立水红花子含量的测定方法。方法采用高效液相色谱法测定水红花子中的含量槲皮素，以C18柱为色谱柱，甲醇-0.4％磷酸溶液（42∶58）为流动相；检测波长为375 nm。按外标法进行检测。结果线性范围0.12～1.2 μg（r=0.999 9），平均回收率99.1％，RSD＝3.1%。结论此方法简便，准确。
       【关键词】  高效液相色谱法； 水红花子； 槲皮素
       Determination of Quercetin in Fruits of Polygonum orientale L.  by  HPLC 
       XIANG Meixian，SU Hanwen，YAN Yunjun
        
       (1.Huazhong University of Science and Technology，Wuhan 430074, China； 2.South-central  University for Nationalities, Wuhan 430074,China； 3.People"s Hospital of Wuhan University,  Wuhan  430060，China)
       Abstract：ObjectiveTo establish a method for the determination of quercetin from the fruits of Polygonum orientale L. MethodsQuercetin was determined by HPLC.The mobile phase was Methanol -0.4%Phosphorus acid glacial (42∶58) .The detection wavelength was set at 375 nm .The external standard method was used.ResultsThe quercetin sample size showed a good linear relationship at the range of 0.12～1.2 μg（r=0.999 9）. The average recovery of the added sample was 99.1％，RSD was 3.1%.ConclusionThe method is simple ,accurate.
       Key words：HPLC；  Fruits of Polygonum orientale L.；  Quercetin
        水红花子为红蓼的成熟果实，具有散血消癥、消积止痛之功。用于癥瘕痞块，瘿瘤肿痛，食积不消，胃脘胀痛等症。在前人对水红花子有关现代药理研究的基础上，本文对水红花子［1］的含量进行了相关研究，以期探讨该药材的指纹图谱研究，为该药材制定质量标准奠定基础。
       1  材料
        Agilent1100高效液相色谱系统［美国Agilent公司］,CIV-240IPC 紫外分光光度计（日本SHIMADZU 公司）；槲皮素对照品（中国药品生物制品检定所）； 水红花子购于湖北省中药材公司,药材经中南民族大学万定荣教授鉴定为蓼科植物红蓼的成熟果实即水红花子。所用试剂均为分析纯，水为注射用水。
       2  方法与结果
       2.1  色谱条件
       色谱柱为Kromasil C18 250 mm×4.6 mm；柱温30℃；流动相为甲醇-0.4％磷酸溶液（42∶58）；流速1.0 ml·min-1；检测波长375 nm；进样量10 μl。色谱图见图1。
       2.2  对照品溶液的制备
       精密称定槲皮素对照品适量，置10 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成含槲皮素0.6 mg·ml-1的对照品溶液。
       2.3  供试品溶液的制备 
       取水红花子粉末约5.0 g，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)80 ml，加热回流1 h，滤过，弃去石油醚液，药渣加甲醇80 ml，加热回流提取至无色，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移置10 ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。
       2.4  线性关系考察 
       取配制含槲皮素0.06 mg·ml-1的对照品溶液，分别进样2，4, 6，8，10，20 μl测定槲皮素的吸收峰峰面积，以进样量(μg)为横坐标，吸收峰峰面积为纵坐标作图，得出回归方程为：Y=18.772X-4.751 7,r=0.999 9。结果表明,槲皮素进样量在0.12～1.2 μg范围内呈良好的线性关系。
       2.5 精密度实验 
       取对上述照品溶液10 μl，重复进样5次，按上述色谱条件进行测定，其相对保留时间稳定，RSD为0.9％（n=5），表明仪器精密度良好。 　  
       2.6 稳定性实验 
       取同一浓度的供试品溶液，分别进样10 μl于0，6，12，24，48 h进样测定，RSD为2.7％（n=5），表明样品溶液在48 h内基本稳定。
       2.7  重复性实验 
       取同一批号药材，按供试品溶液的制备方法平行制备5份，按上述色谱条件进行测定，RSD为2.5％（n=5）,表明该方法重复性良好。
       2.8  回收率实验 
       精密称取5份已知含量的水红花子粉末，分别准确加入适量槲皮素对照品，按供试品溶液的制备方法处理并进行测定，结果平均回收率为99.1％，RSD＝3.1%（n=5）。表明该测定方法可靠。结果见表1。表1  回收率实验（略）
       2.9  样品含量测定 
       按上述方法对3批水红花子粉末，按前面含量测定方法进行测定，计算样品中槲皮素的含量，分别为0.025 6%，0.023 5%，0.02 24%。
       3  讨论
       
       为更有效控制本品的内在质量，本文采用了RP-HPLC法测定其槲皮素的含量，其方法简便，分离度好，专属性强，为水红花子指纹图谱研究奠定了基础。
        实验曾分别选用甲醇-0.5％醋酸溶液和甲醇-0.4％磷酸溶液为流动相［2，3］进行测定，结果流动相中加入一定量的磷酸，可改善峰形和分离度。
       【参考文献】
         　　［1］郑一敏,胥秀英,傅善权,等.高效液相色谱法测定水红花子中芦丁与槲皮苷的含量［J］.中国药学杂志，2005，40(21):1660.
       
       ［2］翟延君，冯夏红，初正云，等.水红花子的品质评价研究［J］.中国药房,2005,16(13):1034.
       
       ［3］朱丽华，蒋国强，杨水新，等.高效液相色谱法测定菟丝子中芦丁、槲皮素及山萘酚的含量［J］.浙江中医学院学报,2001,25(4)：65.