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       【摘要】 
       目的研究青刺果多糖的提取工艺并测定多糖的含量。方法采用正交实验，进行水提醇沉法的优选；以葡萄糖标准液绘制标准曲线，用苯酚-硫酸，紫外分光光度法于490 nm波长处测定青刺果多糖的含量。结果多糖的最佳提取条件为100℃，料液比为1:20，提取时间8 h，乙醇终浓度为85%。测定青刺果多糖含量最高达36.44%。结论最佳提取条件得率高，测定方法准确，对青刺果多糖含量的测定获得较满意结果。
       【关键词】  青刺果；多糖；紫外分光光度法
       Extraction and Determination of Prinsepia utilis Rogle Polysaccharide
       JIA Renyong，LI Chao，YIN Zhongqiong*
       （College of Animal Science and Technology，Sichuan Agricultural University，Ya"an 625014，China）
       Abstract：ObjectiveTo study the extraction technology and content of polysaccharide of Prinsepia utilis. Rogle. MethodsThe methods of water lifts and the alcohol immerse were used to extract the polysaccharide of  Prinsepia utilis Rogle and the standard curve was made with the standard liquid of glucose. Phenol, vitriol and ultraviolet spectrophotometric method were used to detect the content of polysaccharide in Prinsepia utilis Rogle at the wavelength of 490nm.ResultsThe optimal extracting technological conditions were as follows:100℃, the extraction time was 8 hours, the fluid ratio was 1:22, and the concentration of ethanol was 85%.The maximum content of the polysaccharide was 36.44%.ConclusionThis method of detection is accurate and reproducible, and the result is satisfying.
       Key words：Prinsepia utilis Rogle;   Polysaccharide;   Ultraviolet spectrophotomtry
       
       多糖（polysaccharide）是一类天然大分子化合物，存在于动植物和微生物中，为生命物质的组成成分之一。大量药理及临床研究证实，多糖有抗癌、抗肥胖、控制血糖、降胆固醇和降血脂等生理功能；某些活性多糖具有抗肿瘤和增强免疫功能的作用；一些多糖还具有复杂的控制细胞分裂和分化、调节细胞生长与衰老等多方面的功能；天然多糖是一类重要的生物活性物质，具有多方面的生物活性和保健功能，可作为各种药物和保健品的有效成分，对于预防和治疗包括癌症在内的多种疾病都具有巨大的潜力［1～2］。因此，对糖类的研究再次成为关注的焦点，各国学者竞相从各种生物材料中寻找和提取具有生理活性的多糖物质，从而使糖类的研究有了空前的发展。
       
       青刺果Prinsepia utilis Rogle，别名青刺尖、扁核木、打油果等，为蔷薇科扁核木属的一种常绿灌木，自然生长于云南、四川、贵州等省的冷凉山地［3］。青刺果油粕是青刺果果仁榨油后的残渣，也是传统食用或药用部位青刺果果仁初级利用后的废弃物，其中含有较多活性物质。有关青刺果中的多糖尚未见文献报道，故本研究从充分利用资源和进一步开发青刺果的角度出发，对青刺果油粕中多糖的提取工艺和含量测定方法进行了研究，以期为青刺果进一步开发奠定基础。
       1  器材
       1.1  材料
       青刺果，苯酚，3,5－二硝基水杨酸，亚硫酸，氢氧化钠，酒石酸钠正丁醇，三氯甲烷，95%乙醇，无水乙醇，考马斯亮蓝G-250。
       1.2 仪器数显恒温水浴锅HH-2型 (国华电器有限公司)，电子天平MODEL JD200-3（沈阳龙滕电子有限公司），800B型离心沉淀器（上海安亭科学仪器厂），旋转蒸发器（巩义市英峪高科仪器厂），unico UV-2102 PC型紫外可见分光亮度计（尤尼柯上海仪器有限公司）。
       2  方法
       2.1 青刺果多糖的提取称定青刺果50 g，按比例加入蒸馏水，于恒温水浴锅中回流提取，布氏漏斗过滤，将滤液于旋转蒸发仪上进行浓缩，浓缩至约80 ml时，再将浓缩液用Savage法除蛋白，即是向浓缩液中加其1/4体积的三氯甲烷，随之再加入三氯甲烷体积1/4的正丁醇，剧烈振摇5～10 min，混匀，以1 500 r/min离心20 min，分去水层与有机层交界处的变性蛋白质，水层仍按照此方法反复除蛋白5次。然后在上清液中加入一定量无水乙醇，使乙醇的终浓度达一定比例，沉淀过夜。沉淀用布氏漏斗抽滤，然后用无水乙醇和丙酮反复多次抽洗，直至沉淀呈粉末状时将其置于表面皿中。将表面皿于60℃干燥至恒重即得青刺果多糖粗品，计算粗多糖得率。
       2.2 正交实验根据有关资料报道，选取温度(A)，提取时间(B)，料液比(C)，乙醇终浓度(D)4个因素，每个因素3个水平，选用L9(34 )正交实验方案提取青刺果多糖，以多糖得率为指标确定最佳提取工艺。因素水平见表1，实验安排方法见表2。表1  青刺果多糖提取实验因素水平（略）表2  青刺果多糖提取实验方案（略）
       2.3  含量测定采用硫酸-苯酚比色法测定粗多糖中川牛膝总糖含量［4］，DNS法测定粗多糖中还原糖的含量［5］，考马斯亮蓝G-250比色法测定粗多糖中蛋白质含量［6］。
       2.4   多糖含量计算
        多糖含量(%)=总糖含量-还原糖含量
        多糖得率(%)=多糖含量×干燥提取物质量原药材粉末质量×100%
       3  结果
       3.1  多糖含量从表3中可以看出，影响多糖得率的因素主次顺序为A>B>C>D，温度对多糖得率的影响最大，其次为时间，料液比和乙醇终浓度。根据正交表分析，青刺果多糖的最优提取工艺应为A3B3C3D2，即温度100℃，提取时间8h，料液比1：20，乙醇终浓度85%。 表3  正交实验结果（略）
       3.2  测定青刺果中蛋白质含量经计算得回归方程为Y=0.016 3X-0.053 9，相关系数r=0.992 5，样品蛋白质含量见表4，由表4可知，含量最大的为样品1，含量为19.58%。表4  青刺果蛋白质含量（略）
       4  讨论
        多糖遇浓硫酸脱水生成糖醛或其衍生物与苯酚试剂发生缩合反应，生成橙黄色化合物。此化合物在490 nm处有最大吸收波长，其颜色深度与粗多糖中总糖的含量成正比，可用比色法测定其含量，以此计算粗多糖中总糖含量。苯酚极易氧化，因此在测定时要避光和操作迅速。本法简单，显色稳定，灵敏度高。用乙醇沉淀所获得的多糖，常混有较多的蛋白质，降低了多糖的纯度，必须予以去除。Savage法是从多糖中去除蛋白质最缓和的方法，但要达到除尽蛋白质的目的需进行反复多次的处理，如能配合加入蛋白质水解酶（膜蛋白酶、胃蛋白酶、链蛋白酶等），使蛋白质大分子先进行一定程度的降解，再用Savage法处理，效果更好。
        实验结果表明，采用水提法提取青刺果多糖，工艺简单，是一种理想的提取多糖类物质的方法。此外青刺果多糖含量较高，以青刺果为原料开发以其多糖为主要成分的药物、保健品等具有极为良好的应用前景。
       【参考文献】
         　　［1］中华人民共和国药典委员会.中国药典,Ⅰ部［S］.广州:广东科技出版社，1995:27.
       
       ［2］黄芳,蒙义文.活性多糖的研究进展［J］.天然产物研究与开发,l999,1(5):90.
       
       ［3］范志远,习学良,欧阳和.青刺果的植物学特性及其人工栽培技术［J］.西部林业科学,2005,34(4):47.
       
       ［4］白红进,赵小亮,蒋 卉.新疆刺山柑多糖的提取及含量测定［J］.食品研究与开发,2007,28(3):120.
       
       ［5］张惟杰.糖类复合物生化研究技术［M］.杭州：浙江大学出版社,1994:13.
       
       ［6］杨华,阮振寰,姚 宏.百合多糖的提取及蛋白含量测定［J］.美中国际创伤杂志, 2005,4(2):53.