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       【摘要】 
       目的研究建立青皮、醋青皮饮片质量标准。方法采用高效液相色谱法测定青皮炮制品中4种成分。结果对青皮饮片的质量作了系统的研究，包括鉴别、检查、含量测定等。结论该研究系统、规范，数据准确、可靠，方法稳定、简单，可为国家制定青皮、醋青皮饮片质量标准提供科学依据。
       【关键词】  醋青皮； 橙皮苷； 辛弗林； N-甲基酪胺
       青皮为橘Citrus reticulata Blanco及其栽培变种的幼果或未成熟的果皮，具有疏肝理气、消积化滞的功效。用于治疗肝气郁滞之肝郁胸胁胀痛、乳房胀痛、寒疝疼痛、食积气滞、胃脘胀痛及癥瘕积聚等。青皮中主要含有挥发油和黄酮类成分，其中挥发油中主要含有右旋柠檬烯、芳樟醇、月桂烯、α-蒎烯等；黄酮类成分中有橙皮苷、柚皮苷、柚皮芸香苷等，另还含有辛弗林等成分。橙皮苷是青皮中的主要有效成分，辛弗林是青皮升压的有效成分。目前对青皮饮片的质量标准研究未见有详细报道。2005年版《中国药典》仅收载了青皮药材的薄层鉴别及高效液相法测定橙皮苷含量，但醋青皮饮片质量标准没有规定。同时我们在按药典法测定橙皮苷时，发现样品中成分提取不够完全，因此，对青皮饮片的质量作了系统的研究，并对HPLC法测定橙皮苷等进行了详细的方法学研究，对药典法进行了改进，以期为制定青皮、醋青皮饮片质量标准提供科学依据。现报道如下。
       1  材料
       1.1  原材料购买个青皮，产地为浙江杭州、湖北宜昌、湖北及市售品；四花青皮，产地为四川、浙江、江西、福建，经鉴定为芸香科植物橘Citrus reticulata Blanco及其栽培变种的干燥幼果或未成熟果实的果皮。
       1.2  炮制辅料米醋，恒立牌镇江米醋，镇江市润州区恒运酱醋厂出品，总酸度为3.5%。
       1.3  炮制品制备
       1.3.1  药典法炮制品制备取青皮片或丝，以每100 kg加醋15 kg的比例拌匀，闷透，置锅内，炒至微黄色，取出，放凉。
       1.3.2  本研究新法炮制品制备（中试样品）
        净制：将个青皮、四花青皮挑去发霉、破瓣杂质等不合格药材。
        切制：将净四花青皮药材放入洗药机内，用慢速洗2 min左右，放入筐内闷润，其间再用水冲1～3次，闷1 h后切2 mm左右丝。
        个青皮：取净个青皮放洗药机内慢速洗涤，取出放筐内闷润4 h左右，其间用水冲3～4次，然后切2～3 mm厚片。
        醋炒青皮：将个青皮片和四花青皮丝分别称重，加15%米醋拌匀，闷7～10 min左右。四花青皮以投药底锅温140℃左右炒10 min。个青皮以投药底锅温145～150℃分别炒10 min左右，出锅，阴凉处晾晒。以上样品均放通风处阴干。 
       1.4  仪器及试剂
       惠普1100单泵高效液相色谱仪，Waters600单泵高效液相色谱仪。橙皮苷、辛弗林、N-甲基酪胺（中国药品生物制品检定所提供），硅胶G（自制），甲醇为色谱纯及分析纯，其他试剂均为分析纯。
       2  方法与结果
       2.1  青皮饮片性状研究
       2.1.1  青皮药材　
       个青皮：呈类球形，直径0.5～2 cm。表面灰绿色或黑绿色，微粗糙，有细密凹下的油室，顶端有稍凸起的柱基，基部有圆形果柄痕。质硬，断面果皮黄白色或淡黄棕色，厚1～2 mm，外缘有油室1～2列。瓣囊8～10瓣，淡棕色。气清香，味酸、苦、辛。
        四花青皮：果皮剖成4裂片，裂片长椭圆形，长4～6 cm，厚1～2 mm。外表面灰绿色或黑绿色，密生多数油室；内表面类白色或黄白色，粗糙，附黄白色或黄棕色小筋络。质稍硬，易折断，断面外缘有油室1～2列。气香，味苦、辛。
       2.1.2  青皮饮片性状
        生四花青皮丝：类半圆形薄片或成规则丝状。表面黄白色或淡黄棕色，外缘有油室1～2列。外表面灰绿色或黑绿色。气清香，味苦、辛。
       
       生个青皮片：个青皮饮片多为直径0.5～2 cm环形薄片，表面黄白色，外缘有油室1～2列，可见瓤囊，周边灰绿色或黑绿色。气清香，味酸苦、辛。
       2.1.3  醋青皮形如青皮丝或片，色泽加深，微有醋气。
       2.2  粉末显微特征
       2.2.1  青皮饮片粉末淡灰棕色。中果皮薄壁组织众多，细胞形状不规则，壁稍增厚，有的作连珠状。果皮表皮细胞表面观多角形或类方形，垂周壁增厚，气孔长圆形，直径20～28 μm，副卫细胞5～7个；侧面观外被角质层，靠外方的径向壁稍厚。草酸钙方晶存在于近表皮的薄壁细胞中，呈多面形、菱形或方形，直径8～28 μm，长24～32 μm。橙皮苷结晶棕黄色，呈半圆形、类圆或无定形团块。螺纹、网纹导管细小。其中个青皮果皮表皮细胞壁较薄。
       2.2.2  醋青皮与生品差异在于部分表皮细胞壁呈棕色。
        显微特征图省略。
       2.3  薄层鉴别取个青皮、四花青皮生品、炮制品粉末各0.3 g（大生产10批样品），加甲醇10 ml，超声20 min，滤过，取滤液5 ml，浓缩至约1 ml，作为供试品溶液。另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液2 μl，对照品溶液10 μl，点于同一用0.5％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯甲醇水（100∶17∶13）为展开剂，展至约3 cm，取出，晾干，再以甲苯－醋酸乙酯甲酸水（20∶10∶1∶1）的上层溶液为展开剂，展至约8 cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，至紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。见图1～2。
       2.4  检查
       2.4.1 水分测定  
       按2000年《中国药典》附录IX H53页。测定青皮生品、炮制品结果见表1～2。
       2.4.2 总灰分及酸不溶性灰分测定按2000年《中国药典》附录IX J54页。总灰分测定、酸不溶性灰分测定结果见表1～2。
       2.4.3  浸出物测定
       按2000年《中国药典》附录XA 63页。测定结果见表1～2。表1  个、四花青皮生品中总灰分、酸不溶性灰分、水分、浸出物含量（略）表2  醋个、四花青皮中试品中总灰分、酸不溶性灰分、水分、浸出物含量测定（略）
       2.4.4  重金属及农药残留测定重金属测定，农药残留量测定，微生物检查由北京谱尼理化分析测试中心测试，方法略。结果见表3。表3  醋个、四花青皮中试品中重金属、农药残留量、微生物测定（略）
       2.5  含量测定橙皮苷测定方法见文献［1］；辛弗林和N-甲基酪胺测定方法见文献［2］。
       2.5.1  高效液相色谱条件色谱柱：填料为Kromasil-C18，5 μm，4.6 mm×250 mm（北京分析仪器厂填装）；橙皮苷  流动相：甲醇-水-醋酸乙酯（35∶61∶2）；柱温35℃；检测波长284 nm；流速1.0 ml/min。
       
       辛弗林N-甲基酪胺  流动相：甲醇-水-十二 烷基硫酸钠（55∶45∶0.1）；检测波长275 nm；流速1.0 ml/min。
       2.5.2  对照品溶液的制备橙皮苷  精密称取橙皮苷对照品2.57 mg，置于25 ml容量瓶中。精密量取3 ml置10 ml容量瓶中，50%甲醇定容，备用。
        辛弗林、N甲基酪胺  取对照品适量，加30%甲醇，配成辛弗林、N-甲基酪胺浓度均为0.02 mg/ml，备用。
       2.5.3  供试品溶液制备橙皮苷 ：取不同产地，不同品种青皮样品粉末(过80目)约30 mg，精密称定，置50 ml锥形瓶中，精密加甲醇25 ml，超声处理30 min。放冷，过滤，精密量取续滤液3 ml，置于10 ml容量瓶中，50%甲醇稀释至刻度，摇匀，用微膜（0.45 μm）滤过。测量不同产地青皮生品、炮制品中橙皮苷的含量。
       
       辛弗林、N-甲基酪胺 ：取样品约0.1 g，精密称定。准确加30%的甲醇溶液25 ml，称定，超声30 min，补至原重，混匀，过滤（0.45 μm），取续滤液即得。
       2.5.4  测定　
       分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各20 μl注入液相色谱仪，测定峰面积，计算含量，测定结果见表4～5。表4  中试青皮生饮片中各成分的含量（略）
       表5  中试醋青皮中各成分的含量（略）
       3 讨论
        青皮炮制前后在饮片性状和粉末显微特征方面的主要区别在于，炮制后醋青皮饮片色泽加深，呈微黄色，有焦斑，并微有醋香。炮制后醋青皮粉末颜色较生品加深，呈灰棕褐色，部分表皮细胞壁呈棕色。
        四花青皮与个青皮饮片差异在于，个青皮饮片可见瓤囊（心皮室隔组织）；显微镜观察粉末个青皮果皮表皮细胞壁较薄。
        四个成分含量测定表明，青皮醋制品中挥发油比生品下降10%左右，其它成分，生制品含量基本变化不大。
        本研究新建立的两个成分含测方法，具简便、准确、重复性好的特点，可为制定青皮、醋青皮质量标准提供依据。
       【参考文献】
         　　［1］李先端，顾雪竹，林 生，等. HPLC测定青皮生品及炮制品中橙皮苷的含量［J］.中成药，2004，26（9）：724.
       
       ［2］李先端，马志静，林 生，等.高效液相色谱法测定青皮中辛弗林和N-甲基酪胺的含量［J］.中国中药杂志，2004，29（6）：537.