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       【摘要】 
       目的观察威灵仙对α－萘异硫氰酸酯（ANIT）所致大鼠黄疸模型的退黄降酶作用。方法将Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、茵栀黄组、威灵仙高剂量组和低剂量组。各治疗组连续灌胃给药7 d后，ANIT诱发黄疸模型，48 h后取血分离血清，以血清肝功能指标、SOD活性、MDA含量及肝脏组织病理学改变为观察指标。结果与模型组比较，威灵仙高剂量组ALT，AST，TBIL，ALP，γ－GT，MDA均下降，SOD升高（P<0.01），且能明显减轻肝细胞变性、坏死和肝内胆汁淤积。结论威灵仙对实验性胆汁淤积大鼠具有退黄降酶作用。
       【关键词】  威灵仙； 黄疸模型
       Effect of Radix et Rhizoma Clematidis Clematis on Jaundice Model of Rat Induced by ANIT
       WANG Jun, HE Bingshu
       (1. Department of Pharmacology, Medical College of Wuhan University of Science and Technology, Wuhan 430065, China; 2.Hubei Women & Children Hospital, Wuhan 430071, China)
       Abstract：ObjectiveTo observe the effect of Radix et Rhizoma Clematidis Clematis (WLX) on jaundice model of rat induced by ANIT. MethodsWistar rats were randomized into five groups: normol group, model group, Yinzhihuang group, high dosage group of WLX and low dosage group of WLX. Except normol group and model group, others groups were given corresponding drugs for 7 days and then additionally administered ANIT to induce jaundice on the 8th day. 48 hours later, the serum was separated. The liver functional sign, the activity of SOD, the content of MDA in serum and change in pathology of liver tissue were observed.ResultsCompared with model group, ALT, AST,  TBIL,  ALP,  γGT , MDA of high dosage group of WLX descended obviously, SOD went up obviously(P<0.01), and high dosage group of WLX reduced the hepatic cellular change, necrosis and cholestasis in pathology of liver tissue.ConclusionWLX has the action of reducing serum bilirubin and transaminase in rats of experimental cholestasis.
       Key words：Radix et Rhizoma Clematidis Clematis (WLX);  Jaundice model
        中药威灵仙来源于毛莨科植物威灵仙、棉团铁线莲或东北铁线莲的干燥根及根茎，归膀胱、肝经，具有祛风除湿、通络止痛等功效。随着现代药理研究的深入，威灵仙更显示出解痉、抗肿瘤等多方面的药理作用［1，2］，尤其是其治疗胆石症、胆囊炎、黄疸性肝炎等肝胆疾病取得了一定的疗效［3～6］。本研究采用α萘异硫氰酸酯（ANIT）造成肝内胆汁淤积大鼠黄疸模型，观察威灵仙（WLX）对血清肝功能指标、SOD，MDA以及肝脏组织病理学变化的影响，以期为威灵仙利胆退黄的功效提供现代药理学依据。
       1  材料与方法
       1.1  药物、试剂
       威灵仙免煎剂，由三九医药股份有限公司生产，每袋相当于饮片10 g。α－萘异硫氰酸酯，北京通县育才精细化工厂生产，临用前用色拉油配制成20g/L的溶液。茵栀黄注射液，由常州康普药业有限公司生产。超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）试剂盒购自南京建成工程研究所。
       1.2  动物与分组
       Wistar大鼠，♀，体重（200±20）g，购自湖北省实验动物中心。大鼠随机分为正常组、模型组、茵栀黄组、WLX高剂量组和低剂量组共5组，每组8只。
       1.3 方法 
       WLX高剂量组以3.0 g/（kg·d）灌胃给药，低剂量组6.0 g/（kg·d）灌胃给药，茵栀黄组1 ml/（kg·d）腹腔注射给药，正常组和模型组以等量生理盐水灌胃给药。连续给药8 d，第8天给药后1 h，正常组等量色拉油灌胃，其余各组ANIT 5 ml/kg灌胃，同时继续给药，待第10天给药后1h(染毒48 h，处死前禁食1 h)，摘眼球取血，分离血清，以全自动生化分析仪检测血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总胆红素（TBIL）、碱性磷酸酶（ALP）、谷氨酰转肽酶（γ－GT），并按试剂盒方法测定血清超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量。处死大鼠，在同一部位切取肝脏，福尔马林固定，常规石蜡切片，HE染色，光镜下作组织病理学观察。
       1.4  统计学分析
       两组间均数比较采用t检验。
       2  结果
       2.1   肝功能测定
       见表1。模型组与正常组比较，大鼠血清ALT，AST，TBIL，ALP，γ－GT均升高（P<0.01）。表1  各组间肝功能指标的变化（略）
       2.1.1  TBIL的变化
       与模型组比较，WLX各剂量组和茵栀黄组均显著下降（P<0.05或P<0.01）。
       2.1.2 ALT，AST，ALP，γ－GT的变化
       与模型组比较，WLX高剂量组和茵栀黄组ALT，AST，ALP，γ－GT均明显下降（P<0.01），WLX低剂量组下降无显著差异。
       2.2   血清中SOD活性和MDA含量的变化
       见表2。模型组与正常组比较，MDA升高（P<0.01）、SOD下降（P<0.01）。与模型组比较，WLX高剂量组和茵栀黄组MDA含量均明显下降、SOD活性明显升高（P<0.05或P<0.01）。表2  各组间血清SOD活性和MDA含量的变化(略)
       2.3  肝脏组织病理学变化正常组肝小叶结构完整，肝细胞形态正常，无变性坏死、炎性细胞浸润和纤维组织增生等改变。模型组肝细胞大量混浊肿胀、空泡变性，胞内可见胆色素沉积，毛细胆管内胆汁淤积，汇管区有纤维组织增生。WLX高剂量组肝小叶结构基本完整，肝细胞轻度变性，无肝细胞坏死，少数毛细胆管内胆汁淤积，汇管区少量纤维组织增生。茵栀黄组肝小叶结构较完整，个别肝细胞空泡变性。
       3  讨论
        ANIT既损伤肝细胞，又损害肝胆管，能诱发大鼠肝脏特别是胆管上皮细胞损害，引起血液中胆红素和转氨酶急剧升高，胆汁流量减少，炎性细胞增加以及肝细胞坏死能相似于人类肝内胆汁淤积的病理改变［7］，可作为退黄药物研究模型。ANIT于大鼠中毒48h血清TBIL达高峰，72h开始下降［8］。本实验模型组与正常组比较，大鼠血清ALT，AST，TBIL，ALP，γ－GT，MDA均升高，SOD下降（P<0.01），提示造模成功。
       
       ALT与AST是最常用的肝功能指标，升高程度与肝细胞受损程度相一致。TBIL是判断黄疸程度的主要指标。ALP在肝主要分布在肝细胞的血窦侧和毛细胆管侧的微绒毛上，当胆汁排出不畅、毛细胆管内压亢进时，可诱发产生大量ALP；γ－GT在肝内分布在肝细胞毛细胆管侧和整个胆管系统，因此胆内压增高时ALP和γ－GT升高，是诊断胆道系统疾病常用的指标。WLX各剂量组TBIL均明显低于模型组，提示威灵仙有明显退黄作用；WLX高剂量组ALT，AST，ALP，γ－GT均明显低于模型组，提示威灵仙有一定降酶作用。结合WLX高剂量组明显改善肝脏病理改变的结果，提示威灵仙有护肝作用，在治疗肝病方面有良好的开发应用前景。
       
       很多药物保肝作用的机制多与抑制类脂质过氧化物在肝脏的堆积有关。SOD和MDA是反映体内氧化与抗氧化平衡的指标。SOD是机体发挥抗氧化作用的主要酶类，其作用是清除自由基，防止自由基对细胞结构的损伤，SOD活性可反映机体清除氧自由基的能力，SOD活性越高，自由基清除速度越快。而MDA是脂质过氧化的最终产物，可严重破坏细胞膜结构，导致细胞膜肿胀坏死，其含量常可以反映机体脂质过氧化的程度。WLX高剂量组SOD活性明显升高、MDA明显降低，表明威灵仙可能是通过抗氧化和细胞保护作用发挥护肝退黄效应。但WLX低剂量组具有退黄效应（TBIL下降P<0.05），而对血SOD活性和MDA含量无明显影响，可见抗氧化和细胞保护作用并非威灵仙护肝退黄效应的唯一机制。今后还应对其有效化学成分及其药理作用、机理进行进一步的研究，以适应中药现代化的要求。
       【参考文献】
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