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       【摘要】 
       目的观察夏至草醇提物对高分子右旋糖酐（Dextran 500）致大鼠实验性弥散性血管内凝血（DIC）心肌损伤的影响。方法Wistar雄性大鼠20只，随机分为夏至草组（n=8）、模型组（n=6）和对照组（n=6）。静脉推注10% Dextran 500（10 ml/kg.bw）复制DIC模型（对照组以等量生理盐水代替）。6 min后，夏至草组自颈静脉缓慢推注夏至草醇提物（5 g/ml，6g/kg.bw），其它两组以等量生理盐水代替。40 min后，制备心肌组织匀浆，观察心肌匀浆MDA含量及SOD活性、NO含量及NOS活性的变化。结果与对照组相比，模型组心肌匀浆MDA，NO含量及NOS活性显著升高，SOD活性降低；夏至草组心肌匀浆MDA，NO含量及NOS活性显著低于模型组，SOD活性升高。结论夏至草醇提物减轻Dextran 500致DIC大鼠心肌损伤的机制与降低自由基损伤、降低NO的生成与释放有关。
       【关键词】  夏至草； 弥散性血管内凝血； 心肌损伤； 自由基； 一氧化氮
       Effect of Ethanol Extract from Mrrubium incisum against the Myocardium Injury in Experimental DIC Rats
       LIANG Haifeng, WANG Weiping, ZHANG Yuping,DU Shuting,JIANG Hua
       （1. The First Affiliated Hospital, Hebei North University, Zhangjiakou, 075000, China; 2. Insititute of Microcirculation, Hebei North University, Zhangjiakou,  075029, China）
       Abstract：ObjectiveTo observe the effects of ethanol extract from Mrrubium incisum on myocardium injury of disseminated intravascuclar coagulation (DIC) rats induced by Dextran 500. Methods20 male Wistar rats were divided into three groups: Mrrubium incisum group (n=8), model group (n=6) and control group (n=6). The DIC model was established by intravenous injection of Dextran 500 (10ml/kg.bw), and Dextran 500 was replaced by equivalent normal saline in control group. 6 minutes later, ethanol extract from Mrrubium incisum was infused (5g/ml, 6g/kg.bw); in other groups ethanol extract from Mrrubium incisum was replaced by normal saline. After 40 min, the hearts were taken out, 10% homogenate was prepared, and the free radical indexes of MDA content and SOD activity, NO content and NOS activity were determined. Results The contents of MDA and NO and NOS activity of myocardium homogenate in model group were significantly increased, and SOD activity was significantly lowered than that of control group. The contents of MDA and NO and NOS activity of myocardium homogenate in Mrrubium incisum group were significantly lowered, and SOD activity were significantly increased as compared with model group.ConclusionEthanol extract from Mrrubium incisum could markedly abate myocardium injury of DIC rats induced by Dextran 500 and its mechanism may be related to its antiperocidation and decreasing release of NO.
       Key words：Mrrubium incisum;   Disseminated intravascuclar coagulation (DIC);   Myocardium injury;   Free radical;   Nitric oxide
        细胞、组织和器官的正常功能，依赖于正常的血液循环及血液灌流。微循环障碍是引起器官功能障碍甚至损伤的主要因素之一，研究表明，高分子右旋糖酐（Dextran 500）在导致大鼠弥散性血管内凝血（disseminated intravascular congulation, DIC）及血液流变性异常的同时，可引起多个组织器官的形态学损伤，可见红细胞淤滞、血栓形成及坏死［1］；研究表明［2，3］，夏至草可明显改善血淤大鼠的血液和淋巴微循环障碍，从而改善机体的整体状态。为了进一步阐明夏至草醇提物抑制DIC大鼠心肌损伤的机制，本文观察夏至草醇提物对Dextran 500致大鼠DIC时心肌组织自由基损伤以及一氧化氮（NO）的影响，为DIC诱发心肌损伤的临床防治提供实验依据。
       1  材料和方法
       1.1  实验动物与夏至草醇提物制备
       Wistar大鼠20只，体重240～300g（中国医科院实验动物繁育中心提供），随机分为夏至草组（n=8）、模型组（n=6）和对照组（n=6）。前两组以Dextran 500复制DIC模型。唇形科夏至草属植物夏至草mrrubium incisum Benth的全草（内蒙驻张家口医药站提供，经河北北方学院中医系姜希强教授鉴定）。按文献［4］报道方法制备夏至草醇提物，经水煎醇沉，再经活性炭脱色、灭菌制成原生药含量为5g/ml的注射液（pH、澄清度、溶血试验检测均为合格）。
       1.2  DIC模型的复制所有大鼠均以2%戊巴比妥钠溶液（北京化学试剂厂生产，批号20000919，50mg/kg.bw）肌注麻醉后，行颈部正中手术切口，剥离左颈静脉和右颈总动脉，肝素钠（北京奥博星生物技术责任有限公司生产，批号001218）抗凝，插管，备注射、输液及放血用。稳定15 min后，夏至草组及模型组大鼠，以10%的Dextran 500（Dextran 500，瑞典Pharmacia Biotech，10ml/kg.bw）经左颈静脉缓慢匀速推注，1min注完，复制DIC模型［5，6］。6 min后，夏至草组经WZF-50F2双道微量注射泵（浙江大学医学仪器有限公司）由颈静脉缓慢推注夏至草醇提物（6g/kg.bw，以等量生理盐水稀释）；模型组输入与夏至草醇提物等量的生理盐水；输液时间为5min。对照组以等量生理盐水代替Dextran 500和夏至草醇提物。
       1.3  标本制备及指标检测经夏至草醇提物治疗或相当于治疗40 min后，分别处死动物。选择固定的心肌组织0.8～1.0 g，加9倍的4℃无菌生理盐水，应用FJ-200型高速分散均质机（上海标本模具厂）低温制备10%组织匀浆，应用高速低温离心机以2 500 r/min离心10min，取上清液置于冰箱内-80℃冷冻备测。
       
       应用改良硫代巴比妥酸（TBA）微量法测定心肌匀浆丙二醛（MDA）水平，黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（SOD）活性，应用硝酸还原酶法、化学显色法分别检测各组动物心肌匀浆NO2/NO3含量（反映NO含量）及NOS活性，严格按照试剂盒说明书要求进行操作（试剂盒购自南京建成生物工程研究所）；心肌匀浆蛋白以考马斯亮蓝法进行定量。
       1.4  统计学处理所有数据以±s表示，经SPSS 11.0统计软件包进行单因素方差分析，两组间比较用两样本均数t检验，P<0.05为具有显著性差异。
       2  结果
       2.1  夏至草醇提物对DIC大鼠心肌组织自由基损伤的影响
       给予Dextran 500后，模型组心肌匀浆MDA含量均显著高于夏至草组和对照组（P<0.01～ 0.05），而夏至草组与对照组比较无统计学意义（P>0.05）；模型组心肌匀浆SOD活性均显著低于对照组及夏至草组，但夏至草组心肌匀浆SOD活性低于对照组（P<0.05），见表1。表1  夏至草醇提物对DIC大鼠心肌匀浆MDA含量及SOD活性的影响（略）
       2.2 夏至草醇提物对DIC大鼠心肌匀浆NO及其合酶的影响给予Dextran 500后，模型组心肌匀浆NO2/NO3及NOS活性均显著高于夏至草组和对照组（P<0.01～0.05），夏至草组心肌匀浆NO2/NO3含量与对照组比较无统计学意义（P>0.05），但夏至草组心肌匀浆NOS活性高于对照组（P<0.05），见表2。表2  夏至草醇提物对DIC大鼠心肌匀浆NO及其合酶的影响（略）
       3  讨论
        高分子右旋糖酐所导致的微循环障碍以及凝血功能紊乱是引起大鼠心肌、肺、肾、肝等多个器官的功能障碍、诱发多器官功能障碍综合征（multiple organ dysfunction syndrome, MODS）的主要因素之一［1］。临床上由于凝血功能紊乱导致DIC发生后，所引起心肌内微血栓进一步诱发心肌损伤成为患者的致命因素之一。鉴于夏至草具有利水消肿、活血化淤作用［7］，应用夏至草醇提物可明显改善大鼠的淋巴微循环障碍［8］，为此，本研究从自由基损伤及一氧化氮等方面观察夏至草醇提物对DIC大鼠心肌损伤的影响，在阐明夏至草药理学作用的同时，为临床防治DIC引起的心肌损伤提供实验依据。
       
       自由基损伤在细胞损伤乃至器官功能障碍的发病学中具有重要作用［9］。研究结果表明，给予Dextran 500后，模型组心肌匀浆自由基的代谢产物MDA含量均显著升高，具有清除自由基功能的SOD活性降低，结果提示Dextran 500在引起大鼠DIC的同时，加重了心肌组织细胞的缺氧以及酸性产物潴留，加速了自由基的生成，这是引起自由基产生和释放的重要原因［10］；而过多的氧自由基进一步激活补体，补体系统被激活，补体活化产物可刺激巨噬细胞和中性粒细胞释放细胞因子和氧自由基，后者进一步通过膜脂质过氧化作用攻击内皮细胞而加重损伤，形成心肌细胞损伤的恶性循环。输入夏至草醇提物后，心肌匀浆MDA的含量均显著低于模型组，SOD活性升高，结果提示输入夏至草醇提物有效地减轻了大鼠心肌的自由基损伤。
       
       NO作为一种具有多重生理功能的介质，在参与调节血管和气管平滑肌舒张、机体免疫防御、细胞溶解等诸多方面发挥重要作用［11］，降低NO的生成释放可改善内毒素休克的低血压［12］。研究结果表明，给予Dextran 500后，模型组心肌匀浆的NOS活性及NO含量增高，其机制可能为Dextran 500在引起大鼠急性微循环障碍的同时，加重了细胞缺氧，刺激iNOS表达增强，NOS活性增高，诱导内皮细胞、巨噬细胞、中性粒细胞形成大量的NO，从而引起NO的释放增多；大量的NO发挥其损伤作用，加重炎症反应，通过刺激中性粒细胞产生呼吸爆发及脱颗粒，释放氧自由基和蛋白水解酶，作用于内皮细胞，进一步导致细胞损伤，引起心肌损伤。输入夏至草醇提物后，心肌匀浆NO含量及NOS活性均显著低于模型组，结果提示输入夏至草有效地抑制了NOS活性表达，从而减少NO的产生和释放。
         
       综上所述，夏至草醇提物对Dextran 500致DIC大鼠心肌损伤具有较好的干预作用，其机制与夏至草醇提物具有良好的改善微循环作用，可有效改善微循环流态［3］、改善细胞缺氧状态，从而减轻组织细胞的自由基损伤有关；同时，也抑制NO产生，减轻了NO所引起的炎症反应，降低NO对组织细胞的损伤，最终达到保护心肌功能的作用。研究结果为深入研究夏至草醇提物的药理学作用以及DIC诱发心肌损伤的防治提供了实验依据，具有较高的临床应用前景。
       【参考文献】
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