咽舒糖浆质量标准的研究
作者：赵昕 王旭明 陈军
《时珍国医国药》 2005年 第9期
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【关键词】 咽舒糖
摘要：目的：采用高效液相色谱法(HPLC)，建立咽舒糖浆中绿原酸的含量测定方法。方法：采用ODS分析色谱柱(4.6 mm×250 mm，7 μm)；流动相为乙腈 0.4%磷酸溶液(15∶85)；流速：1 ml/min；检测波长：327 nm。结果：HPLC法测定绿原酸可达基线分离，在1.62～21.60 μg线性良好，回归方程：A=2 516 409C 2 979，r=1.000 0，5次测定平均加样回收率为100.1%，RSD为0.80%。结论：该法操作简便，结果准确，重现性好，可作为该制剂的质量控制方法。
关键词：咽舒糖浆；高效液相色谱法；薄层色谱法；绿原酸
Studies on Quality Standard of Yanshu Tangjiang
ZHAO Xin, WANG Xu ming, CHEN Jun
(Institute for Drug and Instrument Control of Shenyang Military Region, Shenyang 110026, China)
Abstract:Objective:To develop a method for determination of chlorogenic acid in Yan Shu Tangjiang by high performance liquid chromatography.Methods:ODS C18(4.6 mm×250 mm，7 μm) was used,acetonitrile 0.4% phosphoric acid(15∶85) was used as mobile phase,at the rate 1 ml/min;The detection wavelength was 327 nm.Results:The calibration curve was linear in the range of 1.62～21.60 μg(r=1.000 0).The average recovery of the method was 100.1%.RSD was 0.80%(n=5).Conclusion:This method was reliable and accurate.The method can be used to control the quality of preparation.
Key words:Yan Shu Tangjiang;HPLC;TLC;Chlorgenic acid
咽舒糖浆是由金银花、北豆根、板蓝根、牡丹皮等6味药材组成的复方制剂。具有清热解毒、凉散风热、活血化瘀、解毒利咽等功能，临床上用于治疗咽炎。方中金银花药材中所含的主要成分为绿原酸，绿原酸的含量测定方法，文献报道有薄层扫描法［1］、紫外分光光度法［2］、高效液相色谱法［3］等。本实验分别采用薄层色谱法及化学法对处方中的板蓝根、牡丹皮、北豆根等3味药材进行定性鉴别；采用高效液相色谱法，对咽舒糖浆中金银花中所含的绿原酸进行含量测定，用以控制其质量。
1仪器与试药
1.1仪器LC 4A高效液相色谱仪；SPD2A紫外检测器；C R3A积分仪；UV260紫外分光光度计(日本岛津制作所)。
1.2试剂与药品乙腈为色谱纯；磷酸、氨试液、氯仿等其它试剂均为分析纯。绿原酸对照品、丹皮酚对照品、精氨酸对照品(均为中国药品生物制品检定所提供)。咽舒糖浆(由中国人民解放军第203医院提供)。
2鉴别
2.1北豆根的定性鉴别取本品5 ml，加水2 ml，加氨试液5 ml，振摇，放置1 h，滤过，滤液置分液漏斗中，加稀盐酸5 ml，振摇提取。分取酸液，置两支试管中：一管加碘化铋钾试液，生成橙红色沉淀；另一管加碘试液，生成棕色沉淀。
2.2牡丹皮的定性鉴别取本品20 ml，置分液漏斗中，加乙醚4 ml，振摇，分取乙醚层，水溶液再加乙醚提取2次，4 ml/次。合并乙醚提取液，在水浴上蒸至近干，加醋酸乙酯2 ml溶解，作为供试品溶液；取丹皮酚对照品加醋酸乙酯制成每1 ml含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液，分别吸取上述2种溶液各5μl，点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯 甲酸乙酯 甲酸 氯仿(5∶6∶3∶6)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以对甲氧基苯甲酸 甲醇 硫酸(90∶5∶8∶1.5)溶液，于110℃烘10 min，供试品色谱中，在与对照品溶液色谱相应的位置上显相同颜色斑点，而阴性对照无此斑点。见图1。
2.3板蓝根的定性鉴别取本品2 ml作为供试品溶液。另取精氨酸对照品加稀乙醇制成每1 ml含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版Ⅰ部附录VIB)实验，吸取上述两种溶液各5μl分别点于同一以羧甲基纤维素为粘合剂的硅胶G薄层板上，以正丁醇 冰醋酸 水(19∶5∶5)为展开剂，展开(展距10 cm)，取出，热风吹干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同的蓝色斑点。而阴性对照无此斑点。见图2。
图1牡丹皮鉴别薄层色谱图
图2板蓝根鉴别薄层色谱图
图3绿原酸对照品UV图谱
从图1中看出绿原酸在327 nm处有最大吸收，故选择327 nm为测定波长。
3.1.2色谱柱十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂C18柱(4.6 mm×250 mm，7μm)；流速：1 ml/min；柱温：28℃；进样量：20μl。
3.1.3流动相的选择参照有关文献，经试验，选择乙腈 0.4%磷酸溶液(15∶85)为流动相，保留时间约为17 min。
3.2对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品5.4 mg，置100 ml量瓶中，加50%甲醇适量，超声波处理10 min，使对照品溶解，再加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液(54 μg/ml)。
3.3供试品溶液的制备精密量取本品5 ml，置50 ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，离心(4000 r/min)10 min，以上清液，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，精密量取续滤液5 ml，置25 ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
3.4方法学考察
3.4.1空白实验按处方量制备缺金银花的阴性对照溶液，照文中所述含量测定方法操作，结果空白溶液与绿原酸对照品相同保留时间处，未显示明显色谱峰，说明无干扰(见图4)。
3.4.2样品溶液稳定性实验将待测样品溶液，置室温下贮存，分别于0，0.5，1，2，3，5 h，定期测定含量。结果6次含量的RSD为0.48%，表明样品溶液基本稳定。
3.4.3仪器的精密度实验精密吸取上述对照品溶液(54 μg/ml)20 μl，重复进样6次，结果RSD为0.41%，精密实验符合要求。
3.4.4重复性实验取同一批号的供试品，分别进行供试品溶液的制备、测定，重复5次，结果RSD为1.34%。
3.4.5线性关系的考察精密量取绿原酸对照品溶液0.30，0.50，1.00，1.50，2.00和4.00 ml，分别置于10 ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀。取20 μl注入液相色谱仪中，记录色谱图，以峰面积为纵坐标，相应浓度为横坐标，进行线性回归，线性方程：A＝2 516 409C－2 979， r＝1.000 0。
3.4.6加样回收率实验精密称取已知含量的同一批咽舒糖浆，5 ml精确加入绿原酸对照品适量，按文中供试品溶液的制备方法制作，测定其含量，并计算回收率。测定结果见表1。
表1加样回收率实验编号 （略）
图4咽舒糖浆的HPLC色谱图
3.5样品测定精密量取本品5 ml，置50 ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，离心(4 000 r/min)10 min，取上清液，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，精密量取续滤液5 ml，置25 ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。精密称取绿原酸对照品5 mg，置100 ml量瓶中，加50%甲醇适量，超声波处理10 min，使对照品溶解，再加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。分别吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。本品每瓶(100 ml)含金银花以绿原酸(C16H18O9)计，不得小于15 mg。取本品样品3批，按上法测定，结果见表2。
表2咽舒糖浆样品测定结果(略)
4讨论
4.1色谱条件的选择在本项实验中，采用了乙腈与磷酸水的配比，而没有采用缓冲液作为流动相，有利于色谱柱的长期使用。
4.2咽舒糖浆中金银花为君药，板蓝根、牡丹皮等为臣药。实验证明，高效液相色谱法和薄层层析法能较好地分别对它们进行定量、定性分析，可以用于控制本制剂的内在质量。
参考文献：
［1］周庆华，李彦冰.树条荚荆果实中绿原酸的含量测定［J］.中医药学报，1996，(6)：45 45.
［2］丁青龙，黄晓瑾，沈晓洁，等.不同厂家银黄口服液中黄芩苷、绿原酸含量测定［J］.中国医院药学杂志，1996，16(7)：315 315.
［3］陈金霞，谷玲，孙立新，等.高效液相色谱法测定小儿咳喘灵口服液中绿原酸的含量［J］.现代应用药学，1996，13(4)：42 42.
(中国人民解放军沈阳军区联勤部药品仪器检验所，辽宁 沈阳110026)