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       【摘要】 
       目的研究氢溴酸高乌甲素口服后在小鼠体内的药动学特性。方法用HPLC法测定血药浓度，用MCPKP药动学软件处理药-时数据。结果氢溴酸高乌甲素血药浓度在0.5～15 μg·ml-1范围内呈良好的线性关系。小鼠按11.71 mg·kg-1单剂量口服给药，主要药动学参数为：t1/2ka=1.90 h，t1/2β=4.31h，tmax=0.94 h，Cmax=2.40 μg·ml-1，AUC= 20.89 μg·h-1·ml-1。结论小鼠口服氢溴酸高乌甲素后，体内药-时过程符合二室开放模型，吸收较快，消除速度适中。
       【关键词】  氢溴酸高乌甲素； 口服； 药动学
       Pharmacokinetics of Lappaconite Hydrobromide in Mouse Following Oral Administration
       SHI Yanbin,  LIU Xiuhua, LDong,GUAN Yuzhu
       (1.School of Pharmacology, Lanzhou University, Lanzhou 730000,China; 2.The Second Hospital of Lanzhou University, Lanzhou 730030,China; 3.Gansu Institute for Drug Control,Lanzhou 730000,China)
       Abstract:ObjectiveTo study the pharmacokinetics of lappaconite hydrobromide in mouse following oral administration.MethodsThe concentration of lappaconite hydrobromide in plasma sample was determined using HPLC method. The data of drug concentration-time were processed using a MCPKP programm. ResultsThe concentration of Lappaconite Hydrobromide in Mouse plasma had a good linear relationship within 0.5～15 μg·ml-1 range. Lappaconite Hydrobromide was given to mice following oral administration at a single dose of 11.71 mg·kg-1. The main parameters were listed as follows: t1/2ka=1.90 h, t1/2β=4.31 h, tmax=0.94 h, Cmax=2.40 μg·ml-1, AUC= 20.89 μg·h-1·ml-1. ConclusionThe results showed that drug concentration-time data of lappaconite hydrobromide in mouse plasma was fitted to a two-compartment open model. Lappaconite hydrobromide is absorbed rather quickly and eliminates moderately in mice.
       Key wordsLappaconite hydrobromide;   Oral administration;   Pharmacokinetics
        氢溴酸高乌甲素（Lappaconite Hydrobromide）是从高乌头中提取总碱，经化学分离获得的二萜类单体刺乌头碱的氢溴酸盐，是国内首创的非成瘾性止痛药，具有较强的镇痛作用，还具有局部麻醉、降温、解热和抗炎消肿作用［1］。截至目前，尚未见到小鼠口服氢溴酸高乌甲素的药动学研究报道。我们进行的前期研究表明氢溴酸高乌甲素静脉注射后在小鼠体内的药时过程符合二室开放模型，原药主要分布于周边室，消除速度适中［2］。本文应用HPLC测试血药浓度，旨在对小鼠口服氢溴酸高乌甲素的药物动力学进行初步研究，以期为临床合理用药和剂型改进提供一定理论依据。
       1  材料与方法
       1.1 材料
       Shimadzu高效液相色谱仪（日本岛津），包括SCL-10ATvp系统控制器，SPD-M10Avp可调波长紫外检测器，LC-10ATvp输液泵，DGU-12A脱气机，725i型手动进样阀，CTO-10ASvp柱温箱。全自动电子分析天平（北京赛多利斯仪器系列有限公司），台式离心机（上海安亭科仪厂）；XW-80A涡旋振荡仪（上海精科实业有限公司）。
       
       氢溴酸高乌甲素片（甘肃兰药药业集团有限公司，规格5mg，批号20041001），氢溴酸高乌甲素标准品（10289-0001，中国药品生物制品检定所），甲醇（色谱纯，山东禹王实业有限公司化工厂），肝素钠（上海生化试剂工厂），0.1M磷酸二氢钠（市售分析纯）,重蒸水（购自兰州大学第一附属医院）。KM种小鼠，体重(20±2)g，雌雄各半，购自兰州大学动物实验中心，实验前在实验室适应性饲养1周，标准饲料喂养。
       1.2 方法
       1.2.1  给药及采样小鼠按11.71 mg·kg-1单剂量口服氢溴酸高乌甲素片，于0.017，0.5，0.75，1，1.5，4，8，10 h由眼球采血，注入肝素化的离心管中，离心（5 000 r/min，15 min），分离血浆，于－20℃冰箱保存，备用。每个时间点3只小鼠。另取数只小鼠采集空白血浆，同法处理。
       1.2.2 血浆处理
       取血浆100 μl于离心管中，分别加入甲醇200 μl，旋涡振荡10 min，静置30 min，离心（5 000 r/min，15 min），取上清液，用0.45 μm有机滤膜过滤后，低温（0～4℃）静置2 h，过滤，精密吸取100 μl进样分析。
       1.2.3 色谱条件
       Microsorb-MV 100-5 C18色谱柱（250 mm×4.6 mm×5 μm，Varian），流动相为甲醇-0.1M磷酸二氢钠（50：50，V/V），流速0.6 ml·min-1，检测波长252 nm，柱温40℃。
       1.2.4 标准曲线的制作用
       甲醇配制500 μg·ml-1的氢溴酸高乌甲素标准品储备液，再用甲醇稀释成所需系列浓度，分别量取200 μl浓度为10.0，7.5，5，2.5，1.25，0.5，0.25 μg·ml-1的标准溶液加入到100 μl的空白血浆中，即得20，15，10，5，2.5，1.0，0.5 μg·ml-1血浆标准品。按“血浆处理”项同法处理，精密吸取100 μl进样分析。
       1.2.5 方法
       精密度与回收率分别配制0.5，5，15 μg·ml-13个浓度的氢溴酸高乌甲素标准品血浆溶液，按“血浆处理”项方法处理血浆样品，精密吸取100 μl，于1天内进样3次。另在连续3 d内同法配制上述3个浓度的血浆标准液，即配即测。配制两份0.5 μg·ml-1氢溴酸高乌甲素血浆标准液，一份在沉淀血浆蛋白前加入标准品（样品A），另一份在沉淀血浆蛋白后加入标准品（样品B），保持溶液总体积不变。具体操作如下：精密量取100 μl的空白血浆2份，分别加入0.25 μg·ml-1的标准溶液200 μl和甲醇溶液200 μl，振荡5 min，（5 000 r/min，离心15 min），静置2h，取上清液，再分别加入甲醇50 μl和1.0 μg·ml-1的标准品溶液50 μl，振荡、过滤，即得。同法制得5.0，15 μg·ml-1的血浆标准溶液。每个样品各3份。精密吸取100 μl进样。回收率按如下公式计算：回收率（%）=（样品A 的峰面积 / 样品B的峰面积）×100%。
       2  结果
       2.1  色谱特异性用给药前的空白血浆作对照，在上述色谱条件下，氢溴酸高乌甲素保留时间附近无明显内源性杂质干扰。空白血浆和含药浆的色谱图见图1。
       2.2 标准曲线和检测限以氢溴酸高乌甲素峰面积对血药浓度作图得到回归方程：Y＝4.333×10-5X＋0.309 0，R＝0.999 6（n=3）。由此可知，氢溴酸高乌甲素的血药浓度在0.5～15 μg·ml-1的范围内与峰面积有良好的线性关系。按信噪比(S/N)为3∶1和10∶1分别计算，血浆中药物最低检测限为0.15 μg·ml-1，最低定量限为0.5 μg·ml-1。
       2.3 精密度与回收率
       0.5，5，15 μg·ml-1的氢溴酸高乌甲素血浆标准液经HPLC测试，计算日内精密度和日间精密度及回收率。结果见表1。表1  方法精密度和回收率
       浓度（略）
       2.4  药时曲线与药动学参数
       2.4.1  血药浓度小鼠单剂量口服氢溴酸高乌甲素后，含药血浆同“标准曲线的制作”项处理，HPLC测试，将所得峰面积代入标准曲线求出血药浓度，药-时曲线见图2。
       2.4.2 药动学参数将小鼠口服氢溴酸高乌甲素的药-时数据经MCPKP软件［3］处理，可知小鼠单剂量口服氢溴酸高乌甲素后，体内血药时程符合二室开放模型，主要药动学参数如下：T1/2ka =1.90 h，t1/2α=0.27 h，t1/2β=4.31 h，tmav=0.94 h，Cmax=2.40 μg·ml-1，AUC0→∞=20.89 μg·h-1·ml-1。
       3 讨论
        选择6.0％的高氯酸作为血浆样品的蛋白沉淀剂，经紫外全波长扫描后可知高氯酸会使氢溴酸高乌甲素的吸收峰消失，这可能是因为加入高氯酸后，破坏了其化学结构所致。以甲醇作为该药物的沉淀蛋白剂，经紫外扫描可知药物有最大吸收峰，且药物在甲醇中的溶解性好，经过1 ml含药血浆中加入1，2，2.5，3 ml甲醇后血浆预处理效果的比较，并且兼顾血药浓度保持在最小稀释水平，最终选择加入2 ml甲醇，经低温放置后过滤，可达到完全沉淀蛋白的目的。
       
       以甲醇∶0.1M磷酸二氢钠（72∶28）为流动相［4］，药物的保留时间在6～7 min之间，在此有明显的内源性杂质的干扰，改变流动相(甲醇-0.1mol/L磷酸二氢钠的比例为50∶50）时，氢溴酸高乌甲素的保留时间在（11.50±0.5）min，且与杂质峰分离效果较好；另外，增加流动相中磷酸二氢钠的浓度会有效防止裂峰。
       
       文献报道［5］单剂量给小鼠口服高乌甲素的安全剂量为13.22 mg·kg-1。本实验参考该值，经预试验确定的最终给药剂量为11.71 mg·kg-1。若高于此值，实验小鼠会中毒死亡。
        小鼠单剂量口服氢溴酸高乌甲素后，从主要药动学参数t1/2ka=1.90 h，t1/2β=4.31 h，小鼠口服氢溴酸高乌甲素后在体内的药-时过程符合二室开放模型，吸收较快，消除速度适中。
       【参考文献】
         　　［1］唐希灿, 朱梅英, 冯 洁, 等. 刺乌头碱氢溴酸盐的药理研究［J］.药学学报, 1983, 18(8):579.
       
       ［2］管玉珠, 史彦斌, 马文忠, 等. HPLC法研究小鼠静注氢溴酸高乌甲素的药动学［J］.中国新药杂志, 2006, 15(15):1258.
       
       ［3］夏文江, 成章瑞. MCPKP-药物动力学房室分析的一种微机程序［J］.中国药理学报, 1988, 9(2): 188.
       
       ［4］袁才英, 位海强, 杨 青, 等. HPLC法改进氢溴酸高乌甲素含量测定方法［J］.广东药学, 2003, 13(2): 7.
       
       ［5］梁资富, 吕燕萍, 苑 伟，等. 氢溴酸高乌甲素量-效关系的实验研究［J］.中国药理学通报，1993, 9(2):32.