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       【摘要】 
       目的优选盐炙益智仁的最佳工艺。方法采用正交设计L9（34），以挥发油、水浸出物和诺卡酮（nootkatone）的含量为考察指标。结果最佳盐炙工艺为100 g饮片，用2 g食盐加40 ml水溶解后，与益智仁拌匀，闷润30 min，在250℃下炒炙8 min。结论优选得到的工艺稳定、合理、可行。
       【关键词】  益智仁；炮炙；正交实验
       Optimization of Processing Technology of Fructus Alpiniae Oxyphyllae  by Orthogonal Experimental Design
       LI Xingying， HU Changjiang， LIN Hui， HUANG Qinwan， LI Xinghua
       （Chengdu University of Traditional Chinese Medica, Chengdu, Sichuan 611137 ,China）
       Abstract：ObjectiveTo optimize the technology of processing Ructus Alpiniae Oxyphyllae. MethodsOrthogonal design L9（34） was used to screen out the best extraction conditions with naphtha,the percentages of water- soluble components and the content of Nootkatone as indexes. ResultsThe optimal procedure was set as follows:fructus alpiniae oxyphyllae was added with 2% salt and mixed homogeneously at 250℃ for 8 min .ConclusionThe technology is stable, reasonable and viable.
       Key words：Fructus Alpiniae Oxyphyllae；  Processing；  Orthogonal designs
        益智是姜科植物益智Alpinia oxyphylla Miq.的干燥成熟果实。中医临床使用益智仁主要分为生品和盐炙品，生品性温味辛，主归脾、肾经，具有温脾止泻，摄唾涎，治疗脾寒泄泻、腹中冷痛、口多唾涎等疾病；而盐炙品可缓其辛燥，主入肾经，以补肾缩尿涩精为主［1］，治疗肾虚遗尿、小便频数、遗精白浊等疾病。
        《中国药典》2005版Ⅰ部对益智仁的炮制仅规定了盐炙法［2］，传统的炮制方法是盐水拌润后用文火炒干，缺乏对火力、火候等相关量化参数，不能保证工艺的重复性和饮片质量的稳定性。本工艺选择闷润时间、炒制时间、炒制温度这3个主要因素，采用正交实验设计L9（34），以益智仁中的诺卡酮（Nootkatone）及水浸出物、挥发油的含量为指标，对盐炙益智仁的炮制工艺进行优选，确定盐炙益智仁的最佳炮制工艺，为益智仁饮片炮制的规范化、产业化和盐炙共性技术的研究提供了参考依据。现报道如下。
       1  仪器与材料
       1.1  仪器
       日本岛津LC-l0A高效液相色谱仪(SPD-10AVP紫外检测器、SCL-6A系统控制器、TC-100恒温箱、LC2000色谱数据工作站)，KUUDOS SK250HP型超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司)，BP211D AG电子天平(德国Sartorius)，TU-1001型紫外一可见分光光度计(北京普析科学仪器有限公司)，正德牌远红外可控温电炉(功率 45～2 000 W)，红外测温仪（smart仪器有限公司）。
       1.2 试药
       Nootkatone对照品(购买于Alfa Aesar，批号10112423，含量大于98％），乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。
       1.3 药材 
       购于成都五块石药材市场，经本校生药教研室李敏教授鉴定确认为《中国药典》规定的姜科植物益智Alpinia oxyphylla Miq.的干燥成熟果实。将益智去壳得到益智仁饮片。
       2  方法与结果
       2.1  盐炙益智仁样品的制备  
       按正交实验设计安排益智仁炮制实验（表1，表2），称取益智仁饮片分别加入2%的盐（预先用药材量40%水溶解，再均匀喷洒），闷润不同时间，然后置于设定不同温度的锅中，不停翻炒直至设定的时间，立即取出，摊放至凉，装袋备用。表1  正交实验因素及水平设计（略）
       2.2   挥发油含量测定 
       照挥发油测定法《中国药典》2005年版附录XD甲法项下规定操作，以饮片形式，在筛选提取条件（加12倍量水，浸泡2 h，提取8 h）的基础上进行测定。结果见表2。
       2.3  水浸出物含量测定
       按《中国药典》2005年版附录XA下热浸法进行测定。结果见表2。
       2.4  Nootkatone含量测定结果见表2。表2  实验安排及结果（略）
       2.4.1  色谱条件 
       色谱柱为diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)。流动相为乙腈-水（70∶30）；流速1.0 ml/min；检测波长235 nm；柱温35℃。理论塔板数按nootkatone峰计算为3 000以上。同时取阴性供试品溶液进样，结果表明，阴性供试品在nootkatone色谱峰位置处无相应峰出现。对照品阴性及样品供试品的高效液相色谱图。见图1～3。
       2.4.2  对照品溶液的配制 
       精密称取对照品Nootkatone 24.18 mg置于25 ml容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,精密移取1 ml于25 ml容量瓶中,加甲醇定容至刻度,摇匀即得浓度为0.038 69 mg/ml的对照品溶液。
       2.4.3  供试品溶液的制备 
       经筛选后为：精密称取盐益智仁粗粉约1 g置于25 ml容量瓶中，加入20 ml甲醇超声提取30 min，放冷后滤至25 ml容量瓶中，残渣用适量甲醇洗涤，滤过，合并滤液，定容至25 ml。精密量取此溶液1 ml至10 ml容量瓶中，加入甲醇定容，用0.45 μm微孔滤膜过滤,吸取续滤液进样,测定其含量。
       2.4.4  线性关系的考察精密量取Nootkatone对照品溶液(0.038 688 mg/ml) 2, 4, 6. 8, 10，12 μl进样，记录色谱图，测定其峰面积，并以峰面积值(A)对进样量(C)进行回归，得标准曲线方程A=1E+07C-412 65，r=0.999 5。结果表明,在0.077 38～0.464 26 μg范围内,线性关系良好。
       2.4.5  精密度实验精密吸取上述对照品溶液10 μl，重复进样5次，Nootkatone峰面积的RSD=0.91%。结果表明，精密度良好。
       2.4.6  稳定性实验 
       取样品供试液20 μl，分别于0, 2, 4, 6, 8 h进样，测得样品中峰面积值的RSD=0.95%，结果表明供试品溶液在8 h内稳定。
       2.4.7  重复性实验 
       按拟定的含量测定方法，对同一批样品，分别制备供试品液，测得峰面积值并计算含量，RSD=1.55%。结果表明该方法重复性良好。
       2.4.8  回收率实验 
       取已知含量的样品约0.5 g，精密称定后，分别加入对照品溶液(0.967 2 mg/ml)按上述样品制备方法和色谱条件，制备加样回收供试品溶液并进样，测定含量，Nootkatone平均回收率为96.90%,RSD=1.6%(n=6)。结果见表3。
       2.4.9 样品含量测定取盐炙样品，按照“2.4.3”项操作,进样20 μl注入液相色谱仪,按照上述条件测定,计算Nootkatone含量。
       2.5  结果分析
       采用 综合加权评分法，挥发油含量以含量较高为好，把第8号实验定为100分，宜用公式y1 =100 Y1/1.260；水浸出物以含量较高为好，把第3号实验定为100分，宜用公式y2 =100 Y2/22.456；Nootkatone的含量以含量较高为好，把第5号实验定为100分，宜用公式y3 =100 Y3/3.82。根据本例研究的目的，其权重系数为挥发油含量（y1）为0.3,水浸出物(Y2)为0.3,Nootkatone(y3)的含量为0.4,对3个单项相加,用公式Y=0.3y1+0.3y2+0.4y3=22.06y1+1.34y2+10.47y3求出各号的综合评分。结果见表3。表3  回收率实验结果（略）
       2.6 方差分析见表4。表4  方差分析（略）
        结果表明，B因素炮制时间、C因素炮制温度对实验结果有显著影响,A因素闷润时间无明显影响,综合考虑盐炙后便于饮片干燥及成品水分含量等因数,盐炙益智仁的最佳工艺组合确定为：A1B2C2,即100 g益智仁用食盐2 g加40 ml水溶解,与益智仁拌匀，闷润30 min在250℃炒炙8 min。
       2.7  验证实验称取同批药材3份各100 g，按照优选的炮制工艺即用2 g食盐加40 ml水溶解后，与益智仁拌匀，闷润30 min,与益智仁拌匀，闷润30 min在250℃下炒炙8 min的条件进行重复实验。结果见表5。表5  验证实验（略）
       3 讨论 
        经过研究确定盐炙益智仁的最佳工艺为：A1B2C2,即100 g益智仁用食盐2 g加40 ml水溶解，闷润30 min，在250℃炒炙8 min。实验证明其方法是稳定、合理、可行的,能适应于该饮片的工业化、规范化生产。
       
       我们采用Nootkatone、挥发油、水浸出物的量化指标，综合评判益智仁盐炙的炮制工艺，使其火候评判客观化，克服传统单凭经验判断火候因人而异的主观性，使其方法更加科学、合理和可行。
       【参考文献】
         　　［1］原思通.医用中药饮片学［M］.北京：人民卫生出版社,1999：437.
       
       ［2］国家药典委员会. 中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：204.