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       【关键词】  颗粒
        摘要：目的：评价三种天然澄清剂ZTC、101果汁澄清剂、壳聚糖与乙醇对维药祖卡木水提液的澄清效果。方法：通过用HPLC法测定祖卡木药液中大黄酚及甘草酸的含量，以有效成分的保留率及固形物收率为指标对4种澄清剂进行比较研究。结果：ZTC天然澄清剂、101果汁澄清剂、壳聚糖、乙醇澄清的药液中大黄酚的保留率分别为85.94%，86.64%，84.47%，89.67%。甘草酸的保留率分别为95.18%，83.30%，83.90%，81.82%。固形物收率分别为17.58%，16.23%，18.12%，17.04%。结论：澄清剂与乙醇沉淀法相比可提高有效成分含量，保持固形物的收率。
        关键词：祖卡木；工艺；高效液相色谱
        Study on Clarifying Process of Zukamu Granule
        CHEN Wen, YING Xue,JIANG Fashou, TANG Hui,LIU Xiao
        (College of Pharmacy, Shihezi University, Shihezi 832002, China)
        Abstract:Objective:To evaluate the clarifying effects of ZTC、101 juice chitosan natural clarifying agents and alcohol in Uigur medicine Zukamu decoction.Methods:The content of chrysophanol and glycyrrhizin in the residue received were considered with HPLC method . The rate of the available ingredients reserved and the residue received were considered as the standards to evaluate the clarifying effect of three natural clarifying agents.Results:The reserved rate of chrysophanol in the filtrate of ZTC、101 juice and chitosan were 85.94%，96.64%，84.47%，89.67% respectively. The reserved rate of glycyrrhizin in the filtrate were 95.18%，83.30%，83.90%，81.82%，correspondently. The rate of the residue received were 17.58%，16.23%，18.12%，17.04%, respectively.Conclusion:Using clarifying agents can increase the rate of the available ingredients reserved and has no effect on the residue received compared with alcohol.
        Key words:Zukamu;Procedure;HPLC
        祖卡木颗粒剂是《中华人民共和国卫生部药品标准・维吾尔药分册》中收录的成药制剂［1］，主要用于感冒咳嗽、发热无汗、咽喉肿痛、鼻塞流涕等疾病的治疗。它主要由山柰、睡莲花、甘草、破布木果、蜀葵子等中药组成，通过传统的水提醇沉法制得黄棕色、气微香、味甜、微苦的颗粒剂，生产过程中存在醇用量大、成本高等缺点，使用过程中存在易吸潮结块等缺点。因此本实验拟采用澄清剂法来替代原工艺中的醇沉法，本实验采用3种天然澄清剂，以药液中大黄酚及甘草酸的保留率以及固形物收率为指标进行考察，为筛选出最适合祖卡木颗粒工艺的澄清剂提供实验依据。
           1仪器与材料
        1.1仪器HP1100高效液相色谱仪(美国惠普)、Laborota 4001旋转蒸发仪(德国Heidoph)、TP300超声波提取器(北京天鹏电子新技术有限公司)、TGL－16G高速离心机(上海安亭)、TDL－40B低速离心机(上海安亭)、SHB－Ⅲ循环式水泵(郑州长城)、WS70－1红外快速干燥器(上海锦屏)等。
        1.2材料大黄、甘草、破布木果、蜀葵子等购于石河子大学第一附属医院，并经本院生药教研室李鹏副教授鉴定，1＃澄清剂购于北京正天成澄清剂技术有限公司，2＃澄清剂购于上海华逊应用生物研究所，3＃购于上海明胶厂。大黄酚和甘草酸单铵盐标准品购于中国药品生物制品检定所，其他常规试剂均为分析纯。
           2方法与结果
        2.1提取与澄清工艺
        2.1.1水提取样品的制备［1］按祖卡木处方分别称取一定量药材，用水蒸气蒸馏法提取挥发油，双层纱布滤出提取液，药渣与其余中药合并，分别以6，4，3倍量蒸馏水煎煮1 h，双层纱布过滤，合并滤液浓缩至每毫升提取液相当于原药材0.33 g，备用。
        2.1.2不同澄清剂的澄清工艺［2～4］采用正交设计实验分别对4种澄清剂进行最佳工艺的筛选，得到4种澄清剂的最佳制备工艺。将祖卡木水提取样品分为4组(每组3份)，按下述方法加入不同澄清剂分别作澄清处理。1号：含醇量达到50%沉淀，2号、3号、4号分别加入最佳剂量的101果汁澄清剂、壳聚糖澄清剂和ZTC澄清剂进行澄清处理。各组液体分别过滤后测定大黄酚、甘草酸以及固形物的含量，以有效成分的保留率及固形物收率为指标进行比较研究。
        2.2评价指标［5］
        2.2.1有效成分的保留率采用HPLC法分别对澄清前提取液和澄清后提取液中大黄酚、甘草酸进行含量测定，按下述公式计算有效成分的保留率＝澄清前的有效成分含量／澄清后的有效成分的含量。
        2.2.2固形物收率精密吸取待测液50 ml于已恒重的蒸发皿中，沸水浴蒸干，105℃干燥至恒重，计算固形物收率。
        2.3大黄酚的含量测定［5］
        2.3.1色谱条件色谱柱ZORBAX ODS C18 4.6 cm×15 cm，流动相为甲醇0.1%磷酸(90∶10)，流速1.0 ml/min，检测波长440 nm,注温25℃。
        2.3.2供试品的制备取20.00 ml澄清液，置圆底烧瓶中，加甲醇15 ml，振摇，混匀。70℃水浴挥去甲醇，溶液加2.5 mol/L H2SO420 ml，超声5 min。放冷后加三氯甲烷15 ml，70℃水浴回流1 h。放冷后用三氯甲烷萃取3次(10，10，10ml)，合并三氯甲烷液，并用无水Na2SO4脱水。三氯甲烷液在30℃旋转蒸发回收三氯甲烷。残渣用甲醇定容至10 ml量瓶中，摇匀，在1.5 ml离心管中12 000 r/min离心5 min，取上清液作为供试品。
   
    2.3.3标准曲线的制备精密称取经105℃干燥至恒重的大黄酚对照品5 mg，至50 ml容量瓶中，用甲醇定容，精密移取9.0 ml至50 ml容量瓶中，用甲醇定容，精密吸取0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 ml分别置10 ml容量瓶中，用甲醇定容，摇匀，即得，取20μl按上述色谱条件分别进样，并以样品浓度C(μg/ml)对其峰面积A回归得标准曲线方程，回归方程为A＝46.620 0C5.446 3，r＝0.999 8。线性范围为：0.9～12 μg/ml。
        2.3.4精密度实验大黄酚精密度实验取大黄酚对照液(3.60 μg/ml)按上述色谱条件按标准曲线法测定，重复进样5次，测得峰面积，计算精密度，RSD为1.6%。
        2.3.5大黄酚回收率测定精密量取2.00 ml大黄酚对照液加入定量的已知含量的10.00 ml澄清液中，按供试品溶液制备方法操作及测定，计算大黄酚的回收率为103.6%±4.6%(n＝5)。
        2.4甘草酸含量的测定［7］
        2.4.1色谱条件色谱柱ZORBAX ODS C184.6 cm×15 cm，流动相为甲醇0.2 mol/L醋酸铵溶液冰醋酸(67∶33∶1)，流速1.0 ml/min,检测波长250 nm，柱温25℃。
        2.4.2标准曲线的绘制精密称取经105℃干燥至恒重的甘草酸标准品10 mg至50 ml容量瓶中，用甲醇定容，精密吸取对照品溶液12.5 ml于50 ml容量瓶中，用甲醇定容。分别吸取上述溶液2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 ml分别置10 ml容量瓶中，用甲醇定容，摇匀，即得，取20μl按上述色谱条件分别进样，以浓度C为横坐标，峰面积A为纵坐标，绘制曲线。得回归方程：A＝96.008C－10.666，r=0.999 9，在10～50 μg/ml之间呈良好的线性关系。
        2.4.3回收率实验精密吸取澄清液10 ml，置50 ml量瓶中，加入甘草酸单铵盐对照品溶液1.0 ml(0.112 mg/ml)，加水稀释至刻度。12 000 r/min离心10 min，按“测定法”进行。计算回收率为98.19%±1.23%(n＝5)。
        2.4.4测定方法取澄清液20.00 ml用流动相定容至50 ml容量瓶，摇匀，以12 000 r/min离速离心10 min，即得供试品溶液。精密称取甘草酸单铵盐对照品适量，加甲醇制成每毫升含甘草酸单铵盐0.5 mg的溶液(折合甘草酸为0.489 8 mg)。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μl，注入液相色谱仪，测定，计算甘草酸含量。
        2.5测定结果对1，2，3，4号样品分别进行测定。结果见表1。
        表1不同澄清工艺结果比较%编号（略）
           3小结
        3.1处方中的总蒽醌为主要有效成分之一，甘草酸为甘草中的主要有效成分，故以总蒽醌(以大黄酚计)和甘草酸为有效成分保留率的检测指标。以固形物收率表示除去蛋白质、鞣质等的效果。
        3.2由表1可见，三种澄清剂对大黄酚、甘草酸的保留率为高于醇沉法处理过的药液，而固形物的收率四者差别很小。说明采用澄清剂较乙醇沉淀法既可降低固形物的收率，同时又保留了有效成分，但对药效是否有影响，还需通过相关的药效学实验进一步确认。使用澄清剂可使工艺流程缩短，生产成本降低，具有一定的优越性。
        3.3综合分析，ZTC澄清剂对有效成分的保留率从总体上来看较其它两种高，同时也能较好的降低固形物收率，与醇沉法比较，甘草酸保留率比后者高13.26%，固形物收率两者相近。可代替乙醇作为澄清剂使用，对其他成分有无影响，有待进一步研究。
           参考文献：
        ［1］国家药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准・维吾尔分册［S］.乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1999：175175.
        ［2］郭桂滨，宁洪斌.Ⅱ型ZTC1＋1天然澄清剂在中药口服液中的应用［J］.ITCM，2001，18(4)：5858.
        ［3］李巧如，郝武常，蒋宏伟.中药制剂工艺中101澄清剂应用的研究［J］.中成药，2000，24(1)：1819.
        ［4］宋炳生.用壳聚糖作澄清剂制备化斑口服液［J］.中草药，2000，31(7)：517518.
        ［5］董方言.现代实用中药制剂新技术［M］.北京：人民出版社，2001：379397，564602.
        ［6］吴正中，童荣生，席庆，等.HPLC测定理气复胃口服液中大黄素和大黄酚的含量［J］.华西药学杂志，2002，17(1)：6162.
   
    ［7］鲍燕燕，凌云，梁爱军.高效液相色谱法测定咽炎颗粒剂中甘草酸的含量［J］.解放军药学学报，2001，17(4)：222224.
        (新疆石河子大学药学院，新疆 石河子832002)