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       【摘要】 
       目的确定江西栀子最佳采收期，保证江西栀子的质量。方法采用高效液相色谱法，以熊果酸为化学对照品，固定相为UltimateTM C18键合硅胶柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)，流动相为甲醇∶水∶冰醋酸∶三乙胺（90∶10∶0.03∶0.06），流速0.6 ml·min-1，温度25℃，波长210 nm测定江西栀子熊果酸含量。结果熊果酸在0.1～3.0 μg范围内峰面积A与其质量M呈现良好的线性关系，其回归方程为： A＝-12 954.88+452 850.96 M，r＝0.999 6，n＝7；3批江西黄栀子中熊果酸的含量分别为（0.591 0±0.003 944）mg·g-1药材，RSD＝0.667 8%，n＝3；（0.576 0±0.005 033）mg·g-1药材，RSD＝0.873 7%，n＝4；（0.544 4±0.010 96）mg·g-1药材，RSD＝2.039%，n＝3;3批江西红栀子中熊果酸的含量分别为（0.361 6±0.000 360）mg·g-1药材，RSD＝0.100%，n＝3；（0.355±0.006 250）mg·g-1药材，RSD＝1.763%，n＝5；（0.381 6±0.002 835）mg·g-1药材，RSD＝0.743 1%，n＝3；精密度实验RSD＝1.754%，仪器精密度良好；稳定性实验RSD＝2.493%，在3.5 h测定熊果酸的含量是稳定的；江西黄栀子重复性实验RSD＝0.941 1%，江西红栀子重复性实验RSD＝0.779 2%，平均回收率101.9%。结论江西黄栀子中熊果酸含量显著高于江西红栀子，选择合理的采收期对于江西栀子质量非常重要，可为其他产地栀子确定最佳采收期提供借鉴，具有非常重要的推广价值。
       【关键词】  江西栀子 采收期 熊果酸 高效液相色谱法
       栀子为茜草科植物栀子Gardenia jasminoides Ellis的干燥果实。主产于江西、四川、重庆、湖北、浙江、贵州、湖南、福建等省。栀子具有泻火除烦、清热、凉血解毒之功效，用于热病心烦、黄疸尿赤、血淋涩痛、血热吐衄、目赤肿痛、火毒疮痈等症。熊果酸为栀子的有效成分之一，具有显著而迅速降低谷丙转氨酶，消退黄疸，增进食欲和恢复肝功能的作用，这在茵栀黄注射液，茵陈蒿汤等方剂中得到广泛的应用，表明栀子治疗黄疸型肝炎、病毒性肝炎主要是通过其有效成分熊果酸实现的。栀子熊果酸还具有显著的抗炎、抗动脉粥样硬化、解热降温、抗菌、抗肿瘤、抗惊厥等作用，其药理活性显著而广泛。因此测定栀子中熊果酸的含量是控制栀子质量的一个重要指标。受到山里红嫩叶中熊果酸含量相对较高以及山茱萸果实由青变红到成熟，熊果酸含量逐渐降低这两个研究成果的启发，我们推论不同采收期或多或少对栀子果实中熊果酸含量会有影响，存在一定规律，但这方面的研究未见报道［1～6］。因此有必要研究江西栀子熊果酸含量随采收期改变而变化之规律，从而为优选江西栀子药材采收期提供依据。
       1  仪器与材料
       SSI高效液相色谱仪；UltimateTM C18键合硅胶柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)；AS3120A Ultrasonic Cleaner；AP-01P真空泵；Haier BCD-176DA电冰箱；SHH V21型长风三用电热恒温水浴箱；ZK072型电热真空干燥箱；RE-52B型旋转蒸发器；AS 701KDT Ultrasonic Cleaner；UV-9200型紫外可见光分光光度计；FA1104W电子天平； Sh10A型水份快速测定仪；50目分样筛； Kodak Easy share Z7590数位相机；CASIO fx-4800p电子计算器；冰醋酸、甲醇、三乙胺为分析纯，色谱纯甲醇；熊果酸化学对照品（110742-200516，约20 mg，供含量测定用，中国药品生物制品检定所）、栀子苷化学对照品（110749-200511，约20 mg,供含量测定用，中国药品生物制品检定所）、栀子产自江西省樟树市（经课题组鉴定，江西红栀子为茜草科植物栀子Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果实、江西黄栀子为茜草科植物栀子Gardenia jasminoides Ellis的干燥中期未成熟果实）。
       2  方法和结果
       2.1  色谱条件固定相为UltimateTM C18键合硅胶柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相为甲醇∶水∶冰醋酸∶三乙胺（90∶10∶0.03∶0.06）,流速0.6 ml·min-1，温度25℃，波长210 nm［7］。
       2.2  栀子熊果酸提取条件优选以药材粒径、甲醇加入量、超声提取时间、超声提取次数4因素3水平，以熊果酸收率为指标，选用L9（34）正交表优选栀子熊果酸提取条件为：栀子药材粉碎为50目粉末，加入甲醇量为药材量的5倍，每次超声提取60 min，超声提取3次，可使熊果酸收得率达到最大，且经济合理。有关研究将另文报道。
       2.3  熊果酸标准曲线的绘制精密称取熊果酸化学对照品2.0 mg（60℃减压干燥24 h），用甲醇定容于10 ml容量瓶中，即得0.2 mg·ml-1的熊果酸对照品溶液。熊果酸在0.1～3.0 μg范围内峰面积A与其质量M呈现良好的线性关系，其回归方程为：A＝－12 954.88＋452 850.96 M，r＝0.999 6，n＝7［8］。
       2.4  精密度实验精密吸取上述熊果酸对照品溶液10 μl进样，其积分面积RSD＝1.754%，n＝5。表明该方法、该仪器测定熊果酸精密度符合要求。
       2.5  稳定性实验精密吸取上述熊果酸对照品溶液10 μl进样，每隔30 min测定1次，其积分面积RSD＝3.493%，n＝5。表明熊果酸用该方法在该仪器上3.5 h内测定结果较稳定，符合要求。
       2.6  栀子熊果酸含量测定重复性实验照前面按“2.2”项下栀子熊果酸的提取工艺提取，测得江西黄栀子重现性实验RSD＝0.941 1%，江西红栀子重复性实验RSD＝0.779 2%，表明该方法重复性实验符合要求。
       2.7  栀子熊果酸加样回收率实验栀子熊果酸的提取工艺提取，取该溶液2 ml，加入上述熊果酸对照品溶液0.3 ml，平均加样回收率为101.9％，表明该方法测定栀子熊果酸的加样回收率符合要求。
       2.8  3批江西栀子中熊果酸的含量测定按照“2.2”项下栀子熊果酸的提取条件提取3批江西栀子熊果酸，按照上述条件分别测定熊果酸含量。结果见表1～2［9］。
       3  讨论
       江西黄栀子又称为中期栀子，实验证明江西黄栀子中熊果酸含量显著高于江西红栀子，选择合理的采收期对于江西栀子质量非常重要。亦为其他产地栀子确定最佳采收期提供借鉴，具有非常重要的推广价值。刘荣华发现山里红嫩叶中熊果酸的含量相对较高［10］；陈随清也发现山茱萸果实由青变红到成熟,熊果酸含量逐渐降低［11］。表明栀子幼果与山茱萸幼果、山里红嫩叶一样熊果酸含量较成熟果或叶更高,这似乎是一个普遍规律，值得进一步研究。表1  江西黄栀子熊果酸含量测定(略)  表2  江西红栀子熊果酸含量测定定(略) 
         
       实验发现，上述熊果酸对照品溶液积分面积为1.5×105～2.5×105，峰高为6×103～7×103，理论塔板数约1.2×104时，峰高法计算结果与真实值的误差为1.240%，积分面积计算结果与真实值的误差为1.415％，表明峰高法比积分面积法更接近真实值，尤其适用于熊果酸峰与齐墩果酸及其衍生物峰未完全分开时。考虑到江西栀子中熊果酸峰与齐墩果酸及其衍生物峰完全分开，而且峰高法计算结果与峰面积法计算结果无显著性差异，出于习惯考虑，本实验仍采用峰面积法测定江西栀子熊果酸的含量。
       
       冰醋酸主要用于改善熊果酸与齐墩果酸及其衍生物图谱分离度。由于冰醋酸具有挥发性，对熊果酸与齐墩果酸及其衍生物图谱分离度存在一定程度的波动，通过反复实验，才得到较成功的图谱。若改用不具有挥发性的磷酸，则可能改善熊果酸与齐墩果酸及其衍生物图谱分离度的波动性，可能更容易成功，有待于进一步研究。
       熊果酸提取温度最好在60℃以下，样品溶液置于0℃冰箱中贮存，测定时分析室的温度控制在25℃左右，以避免熊果酸分解对结果造成影响。
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