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       【摘要】 
       目的建立蜚蠊药材的质量控制方法。方法采用薄层色谱法定性鉴别，色谱条件为正丁醇-醋酸-水（5∶1∶1），0.5%茚三酮显色剂；采用索氏提取法测定脂肪含量；水分测定法检查水分的最低控制限；分光光度法测定总氨基酸的含量，茚三酮显色后检测波长为570 nm。结果蜚蠊药材与对照品薄层色谱斑点清晰,易于识别，药材中脂肪的含量不得超过7.0%，水分含量不得超过12.0%，分光光度法测定总氨基酸含量，回归方程：A=0.067 943C+0.009 143，r =0.999 9, 酪氨酸含量在1.0～10.0 μg范围内呈良好的线性关系。结论该方法简便易行,重复性好,可用于蜚蠊药材的质量控制。
       【关键词】  蜚蠊药材 薄层色谱法 索氏提取法 水分测定法 分光光度法
       Study on the Quality Control of Roach
       YANG Yongshou， XIAO Peiyun,LIU Guangming
       （ Faculty of Pharmacology，Dali University, Dali 671000, China）
       Abstract：ObjectiveTo establish the quality control of Roach. MethodsTLC was used to identify the quality of Roach. The chromatographic condition was n-butanol-HAc-H2O(5∶1∶1), and the developer was triketohydrindene hydrate (0.5%);Soxhlet"s extraction was used for the determination of fat; moisture content was detected by the Aquametry; the content of amino acids was determined by Absorption spectrometry, the developer was triketohydrindene hydrate, and the warvlength was 570 nm.ResultsRoach spots and control article spots were very clear by TLC identification. The fat content of Roach was less than 8.0%, and the Moisture content was less than 12.0%. The amino acids were measured by absorption spectrometry and  the regression equation  was A=0.067 943C+0.009 143,(r=0.999 9),the calibration curve for amino acids showed good linear correlation within the concentration range of 1.0～10.0 μg. The average recovery of the method was 100.36%,RSD was 1.85%. ConclusionThe methods are simple and repmducible, and can be used for quality control of Roach.
       Key words：Roach；  TLC；  Soxhlet"s extraction；  Aquametry；  Absorption spectrometry
       蜚蠊(Roach)为昆虫纲蜚蠊目，蜚蠊科，俗称蟑螂，全世界发现并记载的蟑螂种类约三千余种，广泛分布于热带、亚热带地区，在我国也有广泛分布。蜚蠊作为药用最早载于《神农本草经》中［1］。近年来的研究发现，蜚蠊中含有对肝炎、心脑血管疾病、肺癌及恶性纤维瘤有显著疗效的活性成分［2～4］，并且以蜚蠊药材为原料开发出“康复新滴剂”“心脉龙注射液”“肝龙胶囊”等国家系列新药。但蜚蠊药材在长期的使用过程中一直没有规范的国家标准，致使药材在饲养过程中无相应规范要求，药材质量无法得到保证。研究表明，蜚蠊药材中主要有效成分为氨基酸和蛋白质［5］，但药材在饲养过程中，养殖厂家为追求其重量，在饲料中加入大量脂肪成分，致使药材品质下降，并且给药厂生产增加了处理成本，加上蜚蠊药材为富营养的动物药，水分含量的高低将直接影响药材的质量及存放时间，因此必须加以控制。蜚蠊药材质量标准的建立，将为该药材提供科学、可靠的质量检测方法，同时可对蜚蠊药材的规范化养殖提供理论依据。
       1  仪器与试剂
       岛津UV2550紫外-可见分光光度计，梅特勒电子天平AE240（瑞士），索氏提取器，DZKW-4水浴锅（上海科析实验仪器厂），超声波清洗器（上海科导超声仪器公司），ZY紫外分析仪（上海安亭），硅胶G254 (青岛海洋化工厂)。酪氨酸、亮氨酸、丙氨酸、a-氨基丙酸、甘氨酸对照品（中国药品生物制品检定所生产，批号:0856-200507，0833-200534，0832-200511，0853-200508，0815-200523），其它试剂均为分析纯。
       2  方法与结果
       2.1  对照品溶液的制备 
       精密称取80℃减压干燥至恒重的酪氨酸对照品10.0 mg，置100 ml容量瓶中，加0.02 mol/L的NaOH溶液10 ml，水浴加热至完全溶解，加水至刻度，摇匀，即得浓度为100.0 μg/ml的酪氨酸对照品溶液（含量测定用）。
       精密称取80℃干燥至恒重的亮氨酸、丙氨酸、氨基丙酸、甘氨酸各2.0 mg，用50%甲醇稀释10 ml，得浓度为200.0 μg/ml的对照品溶液（薄层鉴别用）。
       2.2  供试品溶液的制备 
       取粉碎后的供试品10 g，精密称定，置烧瓶中加95%的乙醇100 ml水浴回流提取3次，1 h/次，过滤，合并滤液，残渣加约30～40 ml水，水浴加热，充分溶解，放冷后过滤，除去脂肪，用少量水洗涤烧瓶及漏斗两次，滤液于比色管中定容至50 ml，加活性炭0.5 g，振摇，过滤，滤液即为供试品溶液。
       2.3  药材的薄层色谱鉴别 
       取“2.2”项制备的供试品溶液,另取“2.1”项制备的亮氨酸、丙氨酸、氨基丙酸、甘氨酸对照品溶液，吸取上述溶液各5 μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上,以正丁醇∶醋酸∶水(5∶1∶1)的溶液为展开剂,展开约10～15 cm,取出,晾干,用0.5%的茚三酮溶液喷雾显色，检视,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。样品与对照品的薄层色谱图见图1。
       2.4  药材中脂肪含量的控制测定
       蜚蠊药材中脂肪的含量参考国家标准标GB9695.1- 1988《肉与肉制品- 游离脂肪含量的测定》，使用索氏抽提法，用石油醚抽提样品中的脂肪。然后于水浴上回收溶剂，蒸干后95～105℃干燥2 h称量,计算样品中脂肪含量，结果见表1。表1  蜚蠊药材脂肪含量测定结果（略）
       从表1可得，人工饲养的蜚蠊药材中脂肪的含量明显高于自然生长的药材，这给药厂的生产增加了处理成本，因此，有必要控制药材中脂肪的含量。根据大量的实验及药厂生产的经验，本文将蜚蠊药材中脂肪的含量控制在7.0%以内。
       2.5  药材中水分含量的控制取人工饲养的蜚蠊药材适量，60℃真空减压干燥至恒重，按表2取干燥后的药材，并按比例加入一定量的水，混合均匀后于250 ml广口试剂瓶中密封保存，25℃恒温放置，每隔15 d取样观测，以考察水分含量与药材稳定性之间的关系，实验结果见表2。表2  蜚蠊药材中水分与存放时间的关系（略）
       
       从表2可知，蜚蠊药材中水分的含量不得超过12.0%，否则药材很容易发生腐败变质，故药材中水分应控制在12%以内。
       2.6  药材中总氨基酸的含量测定
       2.6.1  测定波长的选择
       取“2.1”项下配制的酪氨酸对照品溶液，加入1ml pH=5.0的柠檬酸缓冲液和1 ml茚三酮显色剂，摇匀，水浴加热15 min，取出，冷却至室温，加入60%乙醇3 ml，摇匀，在紫外-可见分光光度计上于400～700 nm范围内进行全波长扫描，酪氨酸在570 nm处有最大吸收。故选择570 nm为蜚蠊药材中总氨基酸含量测定波长。
       2.6.2  线性关系考察 
       精密吸取“2.1”项中制备好的酪氨酸溶液0，0.1，0.3，0.5，0.7，0.9，1.0 ml于10 ml容量瓶中，分别加入1 ml pH=5.0的柠檬酸缓冲液和1 ml 0.5%的茚三酮溶液，摇匀，水浴加热15 min，取出，冷却至室温，分别加入60%乙醇3 ml，定容，摇匀，照分光光度法于570 nm处测定吸光度A［6］。以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，得回归方程：A=0.067 943C+0.009 143，r= 0.999 9，结果表明酪氨酸含量在1.0～10.0 μg范围之间呈良好的线性关系。
       2.6.3  样品中总氨基酸的测定 
       精密吸取供试品溶液1.0 ml于10ml容量瓶中，照标准曲线制备项下的方法自“分别加入1 ml柠檬酸缓冲液”起，依法测定吸收度，用标准曲线法计算出供试品溶液中氨基酸的含量（μg），并照下列公式换算为蜚蠊中总氨基酸的含量：
       
       总氨基酸（mg/g）=（C×2.5×0.662）÷（W-W×水分含量%）
       W为供试品含量（g）；C为氨基酸含量（μg）；2.5为样品在配制过程中的稀释倍数；转换系数0.662是氨基酸的平均分子量120除以酪氨酸的的分子量181.2所得。
       2.6.4  精密度实验 
       精密吸取同一供试品溶液,重复测定5次,总氨基酸含量的RSD为2.36%。
       2.6.5  稳定性实验
       精密吸取同一供试品溶液,分别在放置0,1,2,3,4,5,6 h后测定,总氨基酸含量的RSD为1.97% ,表明供试品溶液在6 h内稳定。
       2.6.6  重复性实验 
       取同一批样品,按“2.2”项下的方法制备5份供试品溶液,依法测定，蜚蠊药材中总氨基酸含量的RSD为1.64%,表明方法重复性较好。
       2.6.7  加样回收率实验 
       取已知含量的蜚蠊药材样品5份,1.0 g/份，分别加入对照品酪氨酸8.0 mg,依法进行样品处理和测定,计算加样回收率,结果总氨基酸的加样回收率为100.36%，RSD为1.85%,方法的回收率较好。结果见表3。表3  回收率实验（略）
       2.6.8  样品测定 
       按上述供试品溶液的制备方法和测定条件,测定了5批不同产地人工饲养的蜚蠊药材中总氨基酸含量，结果见4。表4  蜚蠊药材中总氨基酸的含量测定（略）
       3  讨论
       从本研究建立的薄层色谱测定方法来看，薄层色谱展开系统分离效果好，斑点清晰，不拖尾，药材供试品与对照品色谱相应位置上显相同颜色的斑点。
       
       由于蜚蠊药材中主要有效成分为氨基酸、蛋白质和多肽等富营养物质，水分含量过高易引起腐败变质，故药材中水分含量控制在12%以下有利于药材的保存。
        
       含量测定方法操作简单,重复性好,可用于药品生产企业及生产基地对蜚蠊药材的质量控制。
        
       从对不同产地、不同采集时间的药材中总氨基酸含量的测定结果来看,药材中有效成分总氨基酸的含量有一定的地域性差异,同一地区的药材不同批次间也有差异,这可能与生长环境、喂养饲料及采集时间不同有关系。
       【参考文献】
         　　［1］孙星衍.神农本草经［M］.上海：商务印书馆，1955：90.
       
       ［2］蒋述均，陈利铭，安一明.顺铂肝动脉灌注联合扶正抗癌治疗中、晚期原发性肝癌的临床治疗［J］.福建医药杂志，1992，14（3）：26.
       
       ［3］张 军.虫类药的抗肿瘤实验及应用［J］.中医信息，1992，9（3）：39.
       
       ［4］廖剑英.康复新治疗恶性纤维组织细胞瘤1例［J］.大理学院学报，2003，2（3）：92.
       
       ［5］戴 云，曾 茗，项朋志. 蜚蠊的药用价值［J］.中药材，2005，28（9）：848.
       
       ［6］国家药典委员会. 中国药典，Ⅱ部［S］.北京：化学工业出版社, 2005：22.