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       【摘要】 
       目的对药用植物灰毡毛忍冬Lonicera macranthoides Hand.-Mazz的染色体数目和核型进行研究。方法采用常规制片方法，经显微摄影后对染色体进行分析。结果灰毡毛忍冬的体细胞染色体数目为2n=18，核型公式为K（2n）=2x=18=2m+8sm（2SAT）+8st（4SAT），染色体相对长度组成为2n=18=4L+4M2+4M1+6S，染色体总长为47.264μm，长臂总长为34.826μm，核型不对称系数（AS.K%）为73.71%，属于“3B”型。结论灰毡毛忍冬染色体的数目、核型等清晰准确。
       【关键词】  灰毡毛忍冬 染色体 核型分析
       Chromosome and Karyotype Analysis of Lonicera macranthoides
       WANG Ye,  MEI Shumo, ZHENG Li,XIAO Congying
       (Research Center of Chinese Medicine Modernization, Huaihua Medical College, Hunan, Huaihua  418000，China)
       Abstract：ObjectiveTo study Lonicera macranthoides Hand.-Mazz chromosome number and karyotype .Methods Sections combined with micrograph were used to analyze chromosome.ResultsLonicera macranthoides normal diploid 2n=18, karyotype formula was K（2n）=2x=18=2m+8sm（2SAT） +8st（4SAT），the relative length was 2n=18=4L+4M2+4M1+6S, the total length of chromosome groups was 47.264μm, the total length of long arms was 34.826μm, the AS.K% was 73.71%, which belong to "3B"type. ConclusionThe chromosome number and karyotype morphological character of Lonicera.macranthoides show clear.
       Key words：Lonicera macranthoides;   Chromosome;   Karyotype analysis
       灰毡毛忍冬Lonicera macranthoides Hand.-Mazz为忍冬科忍冬属木质藤本植物，常生于山谷溪边、山坡或山顶混交林，灌木丛中，分布于湖南、贵州、四川、安徽等全国大部分地区，其花蕾及初开的花在四川、贵州、云南等省作金银花使用。由于含有较高的抗菌成分绿原酸，值得开发利用［1］，已作为山银花收入《中国药典》［2］。灰毡毛忍冬在湖南已栽种约1.3万ha，其产量已远超过山东济银花与河南密银花之和［3，4］，并且目前国内学者对灰毡毛忍冬的研究较多，但灰毡毛忍冬的细胞学研究尚未报道。本实验对灰毡毛忍冬的染色体数目和核型等进行了研究，旨在为探讨该种药用植物的起源、系统演化、植物分类、药材鉴定、良种培育及分子生物学的深入研究提供必要的细胞学资料。现将灰毡毛忍冬的核型分析结果报道如下。
       1  材料与仪器
       1.1  材料
       灰毡毛忍冬采自溆浦县龙庄湾四宝山中药材基地，并移栽至怀化医专药用植物园，经梅树模副教授鉴定为忍冬科植物灰毡毛忍冬Lonicera.macranthoides Hand.-Mazz.。凭证标本存放于湖南怀化医专中医药现代化研究中心细胞研究室。
       1.2  仪器
        
       CX-41 OLYMPUS生物显微镜(日本)，染色体分析系统VideoTesT-Karyo2.1版（美国）。
       2  方法
       取供试植物生长旺盛时期的茎尖置于0.002 mol/L8-羟基喹啉（15℃）4 h→纯化水前低渗30 min→Carnoy"s I固定液(无水乙醇∶冰醋酸=3∶1)（15℃）固定24 h→70%乙醇保存。将材料置于1 mol/L HCl（60℃）酸解8min→纯化水洗涤数次→转入（37℃）2.5%纤维素酶和果胶酶（2∶1）混合液中酶解40 min→0.0075 mol/LKCl后低渗30 min→Carnoy"s I固定液再固定30 min。涂片法制片，火焰干燥后卡宝品红染色液滴染，镜检。根据染色体数量统计要求，观察50个染色体分散良好、数目清晰的细胞进行染色体数目统计，选择质量较好的分裂相进行显微摄影，用VideoTesT-Karyo2.1版测量染色体长度，并进行分析，每条染色体测量5次后的平均值制成染色体参数表格、核型及核型模式图。
       
       染色体核型分析采用Levan等［5］以染色体臂比来确定着丝点位置和Kuo［6］以染色体相对长度系数将染色体分成4组的染色体分类标准。采用Stebbins［7］的按核型中最长染色体与最短染色体之比及臂比大于2的染色体所占的比例和Arano［8］提出的长臂总长与全组染色体总长之比的核型不对称系数（AS.K%）来确定染色体核型不对称程度。
       3  结果
       3.1  染色体数目  
       观察50个染色体分散良好的细胞，有48个细胞染色体数目为18条，因此确定灰毡毛忍冬体细胞染色体数目为18，与文献报道的同科植物金银花染色体数目相同［9～11］。其中第3～6号有明显随体，观察中未发现有B染色体。经分析得出灰毡毛忍冬体细胞染色体数目为2n=2x=18。见图1。
       3.2  染色体相对长度组成及核型分析  
       
       按Kuo［6］的分类标准，可将灰毡毛忍冬的染色体分成4组，L组（第1，2号），M2组（第3，4号），M1组（第5，6，号），S组（第7，8，9号），其染色体相对长度组成为2n=18=4L+4M2+4M1+6S。
       按Levan［5］等的分类标准，灰毡毛忍冬染色体核型公式为2n=2x=2m+8sm（2SAT）+8st（4SAT），染色体组总长为47.246 μm，最长染色体为8.997 μm，最短染色体为3.078μm，最长染色体是最短染色体的2.92倍，臂比值变化范围是1.394～4.225，其中有8对染色体臂比大于2，占全组染色体88.89%，依据Stebbins［7］的核型分类标准，属于“3B”型，得出灰毡毛忍冬属于较中等的不对称核型。根据Arano［8］的计算方法，核型不对称系数（AS.K%）为73.71%。灰毡毛忍冬的染色体各项参数见表1，核型及核型模式图见图2～3。表1  灰毡毛忍冬的染色体参数（略）
       4  讨论
       4.1  关于忍冬属植物染色体 
       忍冬属植物染色体研究较少，只有金银花［9～11］有报道。我们研究了红白忍冬(染色体分析结果另文报道)与本文的灰毡毛忍冬，报道情况与我们的研究结果表明，三者染色体核型有所区别，为用染色体分析结果进行忍冬属的植物分类及鉴定提供了依据。
       4.2  关于第3号染色体随体数目 
       郭振怀等［9］报道，第3号染色体随体，数目成单，造成同源染色体不能正常配对。我们研究发现灰毡毛忍冬第3号染色体上有成对的随体。金银花（忍冬）和灰毡毛忍冬都是忍冬属忍冬组缠绕亚组的植物［12］，亲缘关系比较近，但植物形态与药材性状区别很明显［13，14］。染色体核型模式图、核型公式和随体也有差异，这些将为忍冬科植物分类和金银花类药材的鉴定提供依据。
       【参考文献】
         　　［1］税丕先,刘家奇,孙 琴，等.灰毡毛忍冬的生药学研究［J］.时珍国医国药, 2005,16(11):1076.
       
       ［2］国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社, 2005：21.
       
       ［3］周日宝,贺又舜,潘清平,等.湖南金银花种植基地概况［J］.湖南林业科技,2003,30 (3):51.
       
       ［4］张永清.山东金银花生产情况调查［J］.山东中医杂志,2000,19(10):621.
       
       ［5］Levana A, Fredga K, Sandberg A A. Nomenclacture for centromeric position on chromosme［J］. Hereditas,1964,52:201.
       
       ［6］Kuo S R, Wang T T, Huang T C. Karyotype analysis of some formosan gymnosperms［J］.Taiwania,1972,17:66
       
       ［7］Stebbins G L.Chromosome Evolution in Higher Plants［M］.London: Edward Aronld, 1971:88.
       
       ［8］Arano H. Cytological studies in subfamily carduoideae (compositae) of Japan［J］.Bot Mag（Tokyo）,1963,76:32.
       
       ［9］郭振怀，王 敏，李三星.金银花染色体核型研究［J］.河北农业大学学报,1993,16(1):33.
       
       ［10］陈升振，陈忠毅，黄向旭，等.五十种植物的染色体计数［J］.广西植物,1990,10(1):33.
       
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       ［12］中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志，第72卷［M］.北京：科学出版社,1988：238，244.
       
       ［13］徐炳声.金银花质量研究［J］.药学学报，1979,14(1)：23.
       
       ［14］湖南省卫生厅.湖南省中药材标准［M］.长沙：湖南科技出版社,1993：191.