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       【摘要】 
       目的研究无出血活性纤溶酶（Nonhemorrhagic fibrinolytic enzyme，NHFLE）的急性毒性，评价其安全性。方法尾静脉注射给药，观察记录给予NHFLE后昆明种小鼠的急性毒性反应。结果NHFLE的半数致死量（LD50）为28.84 mg/kg。结论急性毒性实验证实该药毒性低，临床应用安全性好。
       【关键词】  蛇毒 尖吻蝮蛇 纤溶酶 急性毒性实验
       Experimental Study on Acute Toxicity of Nonhemorrhagic Fibrinolytic Enzyme from Agkistrodon acutus
       PENG Junhua , LI Yuanhong , KUANG Xiaocong , LEI Danqing , LI Zhaoyan  
       1.Department of Pathophysiology, Guangxi Medical University, Nanning 530021, China;
       2.Department of Pharmacology, the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University, Nanning 530021, China;
       3.Snake Venom Research Institute of Guangxi Medical University, Nanning 530021, China
       Abstract：ObjectiveTo evaluate the safety of non-hemorrhagic fibrinolytic enzyme（NHFLE） from Agkistrodon acutus by acute toxicity research. MethodsThe acute toxicity of NHFLE was studied on Kunming species mice by venous injection.ResultsAcute toxicity experiment showed that LD50 of NHFLE was 28.84 mg/kg in mice. ConclusionAcute toxicity study indicated that NHFLE has low toxicity and it is safe in clinical application.
       Key words：Snake venom;   Agkistrodon Acutus;   Fibrinolytic enzyme;   Acute toxicity
       
       据报道，尖吻蝮蛇毒含有凝血及抗凝组分［1］，抗血小板聚集［2］及出血成分［3］。我们从广西桂北产尖吻蝮蛇毒中分离纯化出了一种无出血活性纤溶酶［4］，并对其进行了药效学研究，证实该药对动物血栓具有较强的溶栓、抗凝作用［5］。本实验主要进行无出血活性纤溶酶（NHFLE）的急性毒性研究，为该新型抗血栓制剂的临床实验提供实验依据。
       1   材料
       1.1  药物
        
       NHFLE，为白色粉末，由广西医科大学蛇毒研究所提供，4℃保存。使用时以生理盐水配至适当浓度。
       1.2  动物
       昆明种小鼠，体重约18～22 g，雌雄兼用。
       2 方法
       2.1  动物分组及给药 
       用0.9%生理盐水注射液将NHFLE冻干粉配成不同浓度的受试药液，供动物注射用，给药体积为10 ml/kg。根据预实验的结果,取健康昆明种小鼠50只，雌雄各半，随机分为5组，每组10只。各组剂量均按等比级数设计，尾静脉注射给药1次，剂量分别为23.6，26.2，29.2，32.4和36.0 mg/kg（剂量等比级数为0.9）。另取小鼠10只作为对照组，给予同等体积的0.9%生理盐水注射液。连续观察7 d小鼠的反应情况，观察记录动物外观，活动状态，大、小便性状及颜色、皮毛、呼吸，鼻、眼、口腔分泌物及死亡情况。用LD50综合计算法［6］计算本品的LD50及95%的可信限。
       3  结果
       给小鼠1次注射不同剂量NHFLE后，最大剂量组约4 min后大多数动物出现呼吸加快、抽搐、步态不稳、口唇发绀等现象，约30 min内多数动物陆续死亡。除最小剂量组外，其余剂量组在7d内也有数量不等的动物死亡。死亡动物解剖肉眼观未见心、肝、肺、肾、脾等重要器官出血、坏死等异常表现。存活动物在给药24h 后精神、活动、大小便、食欲均恢复正常。除死亡数外小鼠的其它表现未见明显差别。根据各组动物死亡的分布情况，分别计算出小鼠的LD50为28.84 mg/kg，95%的可信限为26.55～31.33 mg/kg。结果见表1。表1  NHFLE急性毒性实验LD50结果（略）
       4  讨论
       NHFLE分离提纯后，课题组已对该药主要药效学进行了研究，证实该药既具有溶栓效应，又有抗凝、纤溶效应，除了降解纤维蛋白和纤维蛋白原外，对纤维蛋白原无活化作用，也不水解凝血因子及血小板膜，显示NHFLE是一种较为理想的强力溶栓剂。为了进一步评价NHFLE的安全性,为临床安全用药提供可靠的理论依据，按照国家卫生部药政局编的《新药药理毒理学研究的指导原则》，我们进行了NHFLE的急性毒性实验。实验证实：小鼠一次静脉给药后NHFLE的LD50为28.84 mg/kg，95%的可信限为26.55～31.33 mg/kg，其毒性甚微。实验结果表明NHFLE作为溶栓药，其安全性是可以确保的。
       【参考文献】
         　　［1］Cheng HC, Ouyang C. Isolation of coagulant and anticoagulant principles from the venom of Agkistrodon acutus. ［J］. Toxicon, 1967, 4(4):235.
       
       ［2］Ouyang C, Huang TF. Platelet aggregation inhibitors from Agkistrodon acutus snake venom. ［J］. Toxicon, 1986，24(11-12):1099.
       
       ［3］刘广芬. 尖吻蝮蛇毒的柱层析分离及各组分生化药理特性的测定 ［J］. 两栖爬行动物学报,1982, 1(1):69.
       
       ［4］黎肇炎,雷丹青,杨 斌,等. 尖吻蝮蛇毒无出血活性纤维蛋白溶解酶的纯化及其理化性质研究［J］. 广西医科大学学报, 2003, 20 (2):157.
       
       ［5］黎肇炎,杨 斌,唐双意,等. 尖吻蝮蛇毒无出血活性纤溶酶对动物血栓的溶栓作用 ［J］. 中国药理学通报，2003,19(7):830.
       
       ［6］徐叔云,卞如濂,陈 修. 药理实验方法学, 第2版 ［M］. 北京：人民卫生出版社，1991:204.