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       【摘要】 
       目的研究马鬃蛇醇提物(CVAE)对去卵巢大鼠雌激素水平及血脂的影响。方法手术制备去卵巢大鼠模型。CVAE灌胃21d。用放免法测定血清E2，FSH水平；用酶法测定血清TC，TG含量；镜下观察子宫内膜的组织病理学改变。结果CVAE高、低剂量均可显著升高血清E2水平；CVAE高剂量可降低血清FSH及TC水平，可使大鼠出现动情期提前，子宫的脏器系数增加；镜下观察显示，CVAE高剂量组子宫内膜增厚，腺体数量增多。结论CVAE可明显改善去卵巢大鼠的雌激素水平降低，对大鼠去卵巢后脂质代谢紊乱也有一定的改善作用。
       【关键词】  马鬃蛇 雌二醇 卵泡刺激素 血脂
       Effect of CVAE on Estrogen Level and Blood Lipid in Ovariectomy Rats
       LI Shangqiu, ZHAO Wejie, LI Pin, XIE Jinxian
       1.Guangxi Traditional Chinese Medical University, Guangxi Nanning 530001, China;
       2. Guangxi Pharmacutical College Nanning,Guangxi 530023 ,China
       Abstract：ObjectiveTo study the influence of Calotes versicolor Alcohol Extracts(CVAE) on the estrogen level and blood lipid in ovariectomy rats.MethodsThe ovariectomy female rats were made，then were treated with CVAE, i.g, for 21 days. The levels of serum estradiol(E2) and follicle stimulating hormone(FSH) were determined by the radio-immunoassay. The contents of serum total cholesterol(TC) and triglycerides(TG) were determined by enzyme technology.The histopathological change in mucous membrane was observed with microscope. ResultsThe low and high doses of CVAE significantly enhanced the level of E2. The high dose of CVAE decreased the level of serum FSH and the content of serum TC,made the phenomenon of rat oestrus be reserved beforehand, and increased the uterine coefficient. The microscopic examination results showed that the endometrium in high dose of CVAE group was proliferated and thickened, the gland was decreased in number.ConclusionCVAE can significantly elevate estrogen level and improve lipid metabolism disorder.
       Key words：Calotes versicolor；  Estradiol(E2)；  Follicle stimulating hormone(FSH)；  Blood lipid
       
       马鬃蛇Calotes versicolor又名盐蛇，为鬣蜥科动物变色树蜥，主要分布于广西，具有滋补强壮、祛风活血作用，民间常用其浸泡酒或与瘦肉同蒸，用于治疗血虚体弱、肾虚腰痛等症疗效显著［1］。现代研究表明，其对正常昆明种小鼠有双相性激素样作用［2，3］。本实验就马鬃蛇醇提物对去势大鼠雌激素水平及血脂的影响进行研究，为其开发利用提供理论依据。
       1  器材
       1.1  动物 
       雌性健康Wistar大鼠，合格证号:桂医动字第11005号。由广西中医学院实验动物中心提供，实验动物使用许可证：SYXK 桂 2003-0001。
       1.2  药品 
       马鬃蛇60%醇提物，广西中医学院药理教研室制备。批号20040215；己烯雌酚注射液(2 ml×10支 )，上海通用药业股份有限公司产品，批号020403。
       1.3  试剂 
       总胆固醇试剂盒，四川省迈克科技有限责任公司产品，批号20040426；甘油三酯试剂盒，四川省迈克科技有限责任公司产品，批号20040417；卵泡刺激素免疫测定试剂盒，天津九鼎医学生物工程有限责任公司产品，批号RG:1403；雌二醇免疫测定试剂盒，天津九鼎医学生物工程有限责任公司产品，批号RG：4403。
       1.4  仪器 
       1/10000电子分析天平（LIBROR AEU－210），日本岛津产品；SN－695B型智能放免γ测量仪，上海原子核研究所日环仪器一厂产品；MD-100半自动生化分析仪，日本产品。
       2  方法［4～6］
       2.1  动物分组与处理筛选150～180 g成年健康雌性Wistar大鼠，随机抽取10只作为空白对照组，其余按0.8 ml/100 g体重腹腔注射0.4%戊巴比妥钠溶液麻醉，无菌下行腹腔手术摘除双侧卵巢，术后连续肌注青霉素钠（40万U/kg体重）3 d，1次/d，且用碘酒和75%酒精消毒其手术部位，直至伤口充分愈合。然后进行阴道涂片，固定、染色、显微镜下观察，1次/d，连续5 d，以检查卵巢是否摘除完全。取完全不显性周期的动物用于实验，取40只，随机均分为4组，每组10只，一组灌胃生理盐水作模型对照组，二组灌胃CVAE（3 g生药/kg体重）作低剂量组，三组灌胃CVAE(6 g生药/kg体重)作高剂量组，四组灌胃生理盐水＋S.C己烯雌酚(2 mg/kg)为阳性对照组，另空白对照组灌胃生理盐水。各组连续给药21 d，1次/d。给药后第5天每天阴道涂片1次，固定、染色、显微镜下观察，以全部呈现角化上皮细胞为出现动情期。末次给药后24 h，称重，取血，测定血清中卵泡刺激素(follicle stimulating hormone ,FSH)、雌二醇(estradiol,E2)水平。测定血清中总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglycerides,TG)的含量，剖取子宫、肾上腺立即称重，计算脏器系数。子宫称重后作病理组织形态学检查。
       2.2  测定指标及方法
       2.2.1  阴道上皮脱落细胞涂片检查
       操作步骤： 涂片，HE染色，显微镜下观察。
       参考标准：动情间期-涂片有大量白细胞及少量黏液；动情前期-涂片有大量有核上皮细胞、小量角化上皮细胞；动情期-涂片满视野角化上皮细胞、偶有少量有核上皮细胞。
       2.2.2  采用放免法测定卵泡刺激素（FSH）及雌二醇（E2）的水平大鼠眼球采血，低温分离血清，采用放免法测定其血清E2，FSH水平。
       2.2.3   采用酶法测定血清中总胆固醇（TC）及甘油三酯（TG）的含量大鼠眼球采血，低温分离血清，按试剂盒说明书测定TC及TG含量。
       2.2.4  对附性器官重量的影响取血后剖取子宫、肾上腺立即于万分之一电子分析天平称重，计算脏器系数。
       2.2.5  子宫内膜病理组织形态学检查子宫称重后用4％多聚甲醛溶液固定，每侧取两段制作石蜡切片，片厚6 μm，HE染色，显微镜下观察其病理组织形态学的改变。
       2.3  统计学处理 
       计量资料以±s 表示，方差齐性采用F检验，两组间均数差异用t检验；计数资料采用卡方检验进行统计处理。
       3  结果
       3.1  对成年雌性去卵巢大鼠动情期的影响CVAE高剂量可使成年雌性去卵巢大鼠出现动情期，与模型对照组比较有显著性差异（P<0.05）；低剂量可使大鼠出现动情期，但与模型对照组比较无显著性差异（P>0.05）。结果见表1。表1  对成年雌性去卵巢大鼠动情期的影响（略）
       3.2  对成年雌性去卵巢大鼠血清卵泡刺激素（FSH）及雌二醇（E2）水平的影响CVAE高、低剂量均可明显提高血清中E2的浓度，与模型组比较有非常显著性差异（P<0.01或P<0.05）。高剂量负反馈降低血清中FSH水平，与模型组比较有显著性差异（P<0.05）。低剂量有负反馈降低血清中FSH水平的趋势，但与模型组比较无显著性差异（P>0.05）。结果见表2。表2  对成年雌性去卵巢大鼠血清雌激素水平的影响（略）
       3.3  对成年雌性去卵巢大鼠血清中总胆固醇（TC）和甘油三酯(TG)含量的影响CVAE高剂量可明显降低血清中TC的含量，与模型组比较有显著性差异（P<0.05）。高、低剂量组可明显降低血清中TG的含量，但是与模型组比较无显著性差异（P>0.05）。结果见表3。表3  对成年雌性去卵巢大鼠血清中TC及TG含量的影响（略）
       3.4  对成年雌性去卵巢大鼠附性器官重量的影响CVAE高低剂量对成年雌性去卵巢大鼠子宫具有增重作用，与模型组比较有显著性差异（P<0.05），对肾上腺有增重的趋势但差异不显著（P>0.05），低剂量对子宫、肾上腺有增重的趋势，但与模型对照组比较无显著性差异（P>0.05）。结果见表4。表4  对成年去卵巢雌性大鼠附性器官重量的影响（略）
       3.5  对成年雌性去卵巢大鼠子宫内膜组织形态学的影响结果显示，正常对照组呈正常增殖期子宫。模型对照组子宫内膜较正常对照组萎缩、变薄，腺体数量减少。CVAE高低剂量组子宫内膜增生、增厚，腺体数量增多。己烯雌酚组子宫内膜增生，局部增厚，腺体数量稍增多,局灶腺体囊性扩张。
       4 讨论
       雌性大鼠切除卵巢后，首先是雌激素缺乏，随后附性器官萎缩。由于切除卵巢后失去了雌激素对垂体的负反馈调节，垂体前叶分泌的FSH增多。本实验结果表明，大鼠切除卵巢后血清E2水平与正常对照组比较明显降低，灌胃CVAE 21d后，CVAE高剂量能明显提高血清E2水平，能使去卵巢大鼠出现动情期，改善切除卵巢后子宫的萎缩，使子宫、肾上腺重量增加，提示马鬃蛇可能通过下丘脑－垂体－性腺轴来调节雌性大鼠体内E2水平，从而促进性器官的生长发育。雌性大鼠切除卵巢后，体内雌激素水平下降，表现为腹部脂肪堆积、血胆固醇增加、肝脏脂肪增加、子宫萎缩等，并认为该模型可以模拟许多妇女绝经期疾病的病理变化［7］。本实验结果表明，马鬃蛇醇提物可明显降低血清中总胆固醇的含量，对血清中甘油三酯的含量有降低趋势。
       综上所述，CVAE可升高去卵巢成年雌性大鼠血清中E2水平，负反馈抑制血清中FSH水平；可增加大鼠子宫、肾上腺重量，改善大鼠去卵巢后萎缩的子宫；同时可明显降低血清中总胆固醇的含量。表明CVAE可使大鼠去卵巢后低下的雌激素水平升高；同时，对去卵巢后大鼠脂质代谢紊乱有一定的改善作用。
       【参考文献】
         　　［1］中国药用动物志协作组.中国药用动物志,第2册［M］. 天津：天津科学技术出版社，1983：303.
       
       ［2］谢金鲜,杨 柯,黄智波.马鬃蛇醇提物性激素样作用实验研究［J］.新中医，1999,31(2)：67.
       
       ［3］谢金鲜，李上球，李 萍.马鬃蛇醇提物对大鼠血清性激素水平的影响［J］.中国中医药科技，2003，10(2):71.
       
       ［4］杨若明,张经华,周素红,等.麋鹿茸中的性激素对大鼠和小鼠生殖系统的影响［J］.解剖学报,2001,32(2):180.
       
       ［5］田颖,刘慧莲. 尼尔雌醇对去卵巢大鼠子宫内膜作用的病理组织学观察［J］.哈尔滨医药,2002,22(3):2.
       
       ［6］王继峰,李 华,牛建昭,等. 大豆提取物对去卵巢大鼠能量平衡的作用［J］.中国中药杂志，2002,27(2):135.
       
       ［7］王继峰. 四种中药提取物对去卵巢大鼠肝脏脂代谢的影响［J］.中国特色医药杂志,2001,9(3):3.